賀新國(guó)

【摘 要】 目的： 探討成都市雙流地區(qū)慢性萎縮性胃炎患者幽門(mén)螺桿菌（Hp）的耐藥情況及Hp細(xì)胞毒素相關(guān)基因A（cagA）與萎縮性胃炎關(guān)系。方法：對(duì)200株臨床分離菌株，進(jìn)行培養(yǎng)及紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)，采用PCR法檢測(cè)Hp的cagA基因。結(jié)果：成都雙流地區(qū)Hp對(duì)阿莫西林、呋喃唑酮、甲硝唑、替硝唑、克拉霉素的耐藥率分別為12.5%、1%、65%、10%和14%，HP菌株cagA基因的陽(yáng)性率為74.5%。結(jié)論：本地區(qū)阿莫西林、呋喃唑酮、克拉霉素、替硝唑可作為根除Hp的一線(xiàn)藥物。本地區(qū)Hp感染菌株以cagA基因型為主，該基因型Hp感染與萎縮性胃炎發(fā)生密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 幽門(mén)螺桿菌;慢性萎縮性胃炎;耐藥性;cagA基因

【中圖分類(lèi)號(hào)】R573.3+ 2【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1005-0019（2019）09-018-01

Abstract Objective： TO investigate the resistance profile of Helicobacter pylori associated chronic atrophic gastritis and the relationship between cagA gene.Methods： A total of 200 H.pylori isolates were cultured and tested for cagA gene by PCR.The susceptibility testing was done by disk diffusion technique.Results ：The percentage of H.pylori isolates resistant to amoxicillin， furazolidone， metronidazole， tindazole， clarithromycin was 12.5%、1%、65%、10%、14%，respectively，In Shuangliu ，Chengdu. The prevalence of cagA gene in H. pylori was 74.5%.Conclusions ：Amoxicillin， furazolidone， clarithromycin ，tindazole are the first-choice therapy for H. pylori.The H. pylori infection in Shuangliu mostly due to cagA gene which is related to chronic atrophic gastritis.

Key words：

Helicobacter pylori; chronic atrophic gastritis; Resitance; cagA gene

慢性胃炎主要由幽門(mén)螺桿菌（Helicobacter .pylori，Hp）感染所引起，感染后幾乎均存在慢性活動(dòng)性胃炎（ chronic active gastritis），亦即Hp胃炎[1-2]，感染Hp后少有自發(fā)清除，因此慢性胃炎長(zhǎng)期持續(xù)存在，部分發(fā)展為慢性萎縮性胃炎，發(fā)生胃癌的危險(xiǎn)明顯高于普通人群[3]。近年報(bào)道，我國(guó)Hp對(duì)多種抗生素耐藥呈上升趨勢(shì)[4]，耐藥率存在地區(qū)差異。Hp基因的多態(tài)性有地域差異，不同的Hp基因型可能導(dǎo)致不同的臨床結(jié)果[5]，而其中細(xì)胞毒素相關(guān)基因A（cytotoxin associated gene A， cagA）是Hp重要的毒力因子，有文獻(xiàn)報(bào)道cagA參與了萎縮性胃炎的發(fā)生發(fā)展[6]，加重胃部粘膜萎縮[7]。本次研究通過(guò)對(duì)本地區(qū)萎縮性胃炎患者Hp耐藥檢測(cè)和測(cè)定Hp菌株的cagA基因，來(lái)指導(dǎo)臨床用藥。

1 材料與方法

1.1 材料

200株Hp來(lái)自2016年06月-2017年12月成都市雙流區(qū)中醫(yī)醫(yī)院和成都市雙流區(qū)第二人民醫(yī)院胃鏡室，從慢性萎縮性胃炎患者胃竇粘膜分離得到。幽門(mén)螺桿菌培養(yǎng)基、布氏肉湯、微需氧袋（青島海博生物），酪蛋白綿羊血平皿 （成都精博瑞生物科技有限公司），彎曲桿菌鑒定板條（法國(guó)生物梅里埃公司）。 阿莫西林、呋喃唑酮、甲硝唑藥敏紙片（英國(guó)OXOID公司），替硝唑、克拉霉素藥敏紙片（北京九州天瑞科技有限公司）。細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒（杭州昊鑫生物科技股份有限公司），PCR試劑盒（天根生化科技有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 Hp的培養(yǎng)及檢測(cè)

將活檢取得胃竇部黏膜行快速尿素酶試驗(yàn)，強(qiáng)陽(yáng)性標(biāo)本做Hp培養(yǎng)。將標(biāo)本接種于Hp培養(yǎng)基，置于微需氧袋37℃，培養(yǎng)72小時(shí)，按照《厭氧菌和微需氧菌感染與實(shí)驗(yàn)診斷》[8]中Hp鑒定方法。經(jīng)染色鏡檢以及尿素酶陽(yáng)性的菌株通過(guò)彎曲桿菌鑒定板條鑒定，于布氏肉湯-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 藥敏試驗(yàn)

采用紙片擴(kuò)散法，將細(xì)菌調(diào)制成6×107CFU/mL的菌懸液，涂布于酪蛋白綿羊血平皿，貼上藥敏紙片并放入微需氧袋，37℃，培養(yǎng)3d后，測(cè)量抑菌圈直徑。結(jié)果判定按照中國(guó)食品藥品檢定研究院制定的抗菌藥物藥敏試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)確定5種抗菌藥藥敏試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3 Hp DN A提取和PCR擴(kuò)增

細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取HpDNA。PCR擴(kuò)增200株cagA基因，PCR引物序列： p1 5′-AAA GGA GTC GGC GGT TTC A-3′，p2 5′-CCT GCT TGA TTT GCC TCA TCA-3′，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為298bp。引物由成都博奧獨(dú)立醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室合成。PCR反應(yīng)體系50μL。反應(yīng)條件： 95℃5min，60℃1min， 72℃1min，共32個(gè)循環(huán)， 最后72℃延伸5min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳觀(guān)察片段大小。HpN CTC11637（第三軍醫(yī)大學(xué)藥劑學(xué)教研室提供）作為陽(yáng)性對(duì)照。若在298bp處出現(xiàn)橙黃色條帶則為cagA陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 藥敏結(jié)果

2.2 PCR擴(kuò)增結(jié)果

200株Hp PCR法共檢測(cè)出149株含cagA基因，檢出率為74.5%。具有298bp特異條帶者為cagA陽(yáng)性。

3 討論

近年研究表明，我國(guó)目前慢性萎縮性胃炎的發(fā)病率較高，有上消化道癥狀患者，經(jīng)胃鏡檢查慢性萎縮性胃炎比例高達(dá)23.2% ，胃竇病理檢查提示萎縮者占35.1%，高于內(nèi)鏡提示萎縮的比例，同時(shí)胃竇的Hp 陽(yáng)性率為33.5%[9]。成都雙流地區(qū)經(jīng)濟(jì)和醫(yī)療較發(fā)達(dá)，慢性萎縮性胃炎患病率高，Hp耐藥現(xiàn)象常見(jiàn)。反復(fù)上腹痛，飽脹，反酸，納差等癥狀影響患者的生活質(zhì)量，增加患者心理負(fù)擔(dān)。通過(guò)對(duì)本地區(qū)萎縮性胃炎Hp進(jìn)行藥敏試驗(yàn)、基因檢測(cè)，可為患者提供精準(zhǔn)治療，進(jìn)一步提高Hp根治率，減少濫用抗生素，降低胃癌的發(fā)生。

本次研究對(duì)Hp進(jìn)行5種抗菌藥物藥敏檢測(cè)，結(jié)果顯示Hp對(duì)阿莫西林、呋喃唑酮、甲硝唑、替硝唑、克拉霉素的耐藥率分別為12.5%、1%、65%、10%和14%。甲硝唑具有較高的耐藥率，與重慶地區(qū)的91. 67%[10]、國(guó)內(nèi)其他地區(qū)40%-70%基本一致，不建議本地區(qū)使用，而替硝唑作為甲硝唑同類(lèi)的替代藥物耐藥率低。阿莫西林耐藥率低，抗Hp作用強(qiáng)，可作為根除Hp的一線(xiàn)治療。目前我國(guó)Hp對(duì)克拉霉素的耐藥呈上升趨勢(shì)，對(duì)于在高耐藥率地區(qū)（ 如克拉霉素耐藥率> 15%[11]），國(guó)內(nèi)共識(shí)建議使用克拉霉素方案前行藥敏試驗(yàn)。本地區(qū)克拉霉素方案可使用。呋喃唑酮耐藥率低，尚無(wú)需考慮是否耐藥。使用PCR方法檢測(cè)200株Hp cagA基因，結(jié)果cagA基因的陽(yáng)性率為74.5%，我們認(rèn)為本地區(qū)Hp感染以cagA基因陽(yáng)性菌株為主，該基因型Hp感染與萎縮性胃炎發(fā)生密切相關(guān)。因此對(duì)于本地區(qū)Hp相關(guān)萎縮性胃炎，予以積極的抗Hp治療，可能使患者獲益更大。

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