食品中維生素D與25-羥基維生素D檢測(cè)技術(shù)及含量分布研究進(jìn)展

李 兵，趙海燕，屠瑞瑩，柳 靜，孟 娟，劉泰然，楊永紅，肖香蘭，陳 東，周香玉，趙 榕

(北京市疾病預(yù)防控制中心 北京市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究中心，營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生所，北京 100013)

維生素D是一類具有膽鈣化甾醇生物活性物質(zhì)的總稱，其中麥角鈣化甾醇(維生素D2)和膽鈣化甾醇(維生素D3)是具有生物活性的兩種形式，對(duì)保持人體鈣磷平衡、維持骨骼和牙齒健康具有重要作用。維生素D在人體內(nèi)首先轉(zhuǎn)化為25-羥基維生素D，進(jìn)而代謝為1,25-二羥基維生素D等活性物質(zhì)。人體缺乏維生素D可導(dǎo)致佝僂病、軟骨病等多種疾病[1]，目前維生素D缺乏已經(jīng)成為世界普遍存在的公共衛(wèi)生問題。人體獲取維生素D有日光照射和膳食攝入2個(gè)途徑，若能夠接受充足的日光照射，人體自身形成的維生素D即可滿足生理需要，無(wú)須額外補(bǔ)充[1]。而對(duì)于無(wú)法獲得充足日光照射的人群，膳食攝入是其補(bǔ)充維生素D的重要途徑。因此維生素D和25-羥基維生素D在食品中的含量分布十分重要，是開展飲食指導(dǎo)和攝入量評(píng)估的重要基礎(chǔ)。

天然維生素D主要存在于動(dòng)物性食品(魚、肉、蛋、奶)和植物性食品(蘑菇、木耳、銀耳)中[2]。25-羥基維生素D是維生素D的代謝產(chǎn)物，主要存在于動(dòng)物性食品如魚、肉、蛋、奶中，有研究表明其生物活性是維生素D的1.5～5.0倍[3-5]。由于維生素D和25-羥基維生素D在食品中的含量較低，且基質(zhì)干擾嚴(yán)重，因此已有方法多采用皂化除去油脂等干擾物質(zhì)后再使用半制備色譜或者固相萃取等前處理步驟進(jìn)行凈化后測(cè)定，測(cè)定方法主要有放射免疫法和色譜法等。本文綜述了近年來(lái)食物中維生素D和25-羥基維生素D的檢測(cè)方法，包括前處理方法和測(cè)定方法，以及含量分布研究的進(jìn)展，以期為開展相關(guān)工作提供理論依據(jù)。

1 樣品前處理

1.1 皂化方法

皂化是食品中維生素D和25-羥基維生素D檢測(cè)的常用前處理方法，主要用以去除脂肪等干擾物質(zhì)達(dá)到凈化的目的，并使維生素D從一些結(jié)合物中游離出來(lái)進(jìn)行測(cè)定[6]；該方法采用一定量乙醇和氫氧化鉀的水或醇溶液在氮?dú)獾谋Ｗo(hù)下避光進(jìn)行皂化反應(yīng)，皂化前需在樣品中加入一定量抗氧化劑(如抗壞血酸、焦性沒食子酸、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚等)以保護(hù)目標(biāo)物不被氧化。皂化有熱皂化和冷皂化2種，其中熱皂化通常在50～100 ℃下反應(yīng)15～120 min，有研究認(rèn)為較高的溫度會(huì)引起維生素?fù)p失和異構(gòu)化[7]。而冷皂化(常溫下皂化15～16 h)則可避免維生素D在皂化過(guò)程中的損失。

1.2 提取方法

樣品皂化后，一般采用有機(jī)溶劑提取目標(biāo)物，常用提取方法為液液萃取法，萃取溶劑通常為石油醚、正己烷、二氯甲烷、丁醇、異辛烷乙醚、異丙醚等單一溶劑或混合溶劑。液液萃取方法簡(jiǎn)單、易操作，但存在乳化、有機(jī)溶劑消耗量大、繁瑣費(fèi)時(shí)等問題。固相支撐液液萃取可減少這些問題的發(fā)生，該法通常以硅藻土為載體，可為皂化液和提取溶劑提供更大的接觸表面積，從而提高提取效率，降低有機(jī)溶劑使用量。Strobel等[8]采用硅藻土固相支撐液液萃取提取了豬肉、牛肉、羊肉和雞肉中的維生素D和25-羥基維生素D，顯著縮短樣品的前處理時(shí)間，減少了有機(jī)溶劑用量，但由于萃取柱批次間的差異，會(huì)導(dǎo)致結(jié)果有偏差，可采用同位素內(nèi)標(biāo)校正。

也有研究不皂化而直接使用溶劑提取樣品中維生素D和25-羥基維生素D，如H?llera等[9]采用甲醇提取并測(cè)定了豬不同組織中的25-羥基維生素D3，方法的回收率為80.3%～105%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.0%～26%，檢出限為1～5 ng/g；Jiao等[10]采用Fe3O4聚吡咯磁性納米微粒直接從牛奶中提取富集維生素D2和D3，該方法僅需15 min和0.5 mL有機(jī)溶劑，維生素D2和D3的回收率為72%～90%，RSD為3.6%～9.9%，檢出限分別為0.02 ng/mL和0.05 ng/mL，方法簡(jiǎn)單快速。

1.3 凈化方法

由于食品基質(zhì)十分復(fù)雜，且維生素D和25-羥基維生素D的含量較低，為了獲得良好的分離度和靈敏度，測(cè)定前需采用固相萃取柱或者半制備色譜凈化。硅膠固相萃取和正相半制備色譜是常用的凈化方法，也有研究將兩者聯(lián)用對(duì)樣品凈化，以達(dá)到更好的凈化效果。如Bilodeau等[11]先采用硅膠固相萃取柱凈化，再分別使用配備有硅膠柱和氨基柱的正相半制備色譜再次凈化，測(cè)定了肉、蛋、魚等食品中的維生素D3和25-羥基維生素D3。張潔等[12]研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)維生素D和25-羥基維生素D含量高的樣品可只采用正相半制備色譜凈化，而對(duì)于含量較低的復(fù)雜樣品(如豬肉、禽肉等)需聯(lián)合固相萃取和半制備色譜柱凈化。H?llera等[9]采用甲醇提取、C18固相萃取柱凈化測(cè)定豬脂肪和皮中的25-羥基維生素D3。李珉等[13]采用凝膠滲透色譜及液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定了油脂性食品中維生素A、D、E，樣品經(jīng)環(huán)己烷-乙酸乙酯(體積比5∶5)提取，采用凝膠滲透色譜凈化去除油脂后上機(jī)測(cè)定，并將分析結(jié)果與皂化-液液萃取/液相色譜法進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)凝膠滲透色譜/液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法在檢出限、回收率和精密度方面優(yōu)勢(shì)明顯，不但將單個(gè)樣品的檢測(cè)時(shí)間從190 min縮短至45 min，且顯著減少了人工操作，自動(dòng)化程度高。

2 儀器方法

食品中維生素D和25-羥基維生素D的測(cè)定方法有放射免疫法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法、二維液相色譜法、超臨界流體色譜法、薄層色譜法等。其中液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜法能夠?qū)S生素D2/D3、25-羥基維生素D2/D3進(jìn)行有效分離并測(cè)定，具有高選擇性的特點(diǎn)，成為食品中維生素D和25-羥基維生素D的主要測(cè)定方法。與液相色譜法相比，液相色譜-質(zhì)譜法靈敏度更高，特異性更強(qiáng)，但檢測(cè)成本較高，且對(duì)實(shí)驗(yàn)人員操作技能的要求更高。

由于食品中維生素D和25-羥基維生素D的前處理方法非常繁瑣，因此采用內(nèi)標(biāo)法能夠更精確的定量。維生素D2和維生素D3的化學(xué)結(jié)構(gòu)非常相似，在進(jìn)行液相色譜法測(cè)定時(shí)，可采用維生素D2和維生素D3、25-羥基維生素D2和D3互為內(nèi)標(biāo)的方法[14]。液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定時(shí)，常使用同位素內(nèi)標(biāo)，因?yàn)槌松V分離以外，質(zhì)譜檢測(cè)器還可根據(jù)分子量信息將同位素內(nèi)標(biāo)和目標(biāo)物提取分離。同位素內(nèi)標(biāo)與目標(biāo)物具有相似的分子結(jié)構(gòu)，色譜行為更為相似，可有效校正前處理造成的損失，因此能夠獲得更好的精密度和準(zhǔn)確度[15-16]。

2.1 液相色譜法

液相色譜(主要包括正相高效液相色譜、反相高效液相色譜、二維液相色譜和超高效液相色譜)因其良好的分離能力被廣泛用于食品中維生素D和25-羥基維生素D的分析。由于正相色譜需使用大量環(huán)境不友好的溶劑，因此現(xiàn)在多采用配備C18色譜柱的反相液相色譜對(duì)食品中維生素D進(jìn)行測(cè)定[16]，隨著色譜填料技術(shù)的不斷發(fā)展，也有采用其他色譜柱分離維生素D的報(bào)道，如Pokkanta等[17]使用PFP色譜柱在30 min內(nèi)分離了米糠、植物油中維生素D3等18種化合物。近年來(lái)，配備亞2 μm直徑填料色譜柱的超高效液相色譜發(fā)展迅速，因其具有分離度高、分析速度快的特點(diǎn)，逐漸在食品中維生素D的檢測(cè)方面發(fā)揮重要作用[18]。由于樣品中維生素D的含量很低，且基質(zhì)干擾嚴(yán)重，因此常規(guī)的檢測(cè)方法先使用正相半制備色譜凈化，收集餾分濃縮后再采用反相色譜分離測(cè)定，需兩臺(tái)色譜系統(tǒng)，操作繁瑣費(fèi)時(shí)。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的二維液相色譜，可以在線使用第一根色譜柱對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行初步分離，再將目標(biāo)物切割進(jìn)入第二根色譜柱進(jìn)一步分離，不僅實(shí)現(xiàn)了在線凈化，還減少了前處理步驟，縮短了前處理時(shí)間、提高了分析效率。二維液相色譜儀器條件的選擇需考慮色譜柱的差異性和流動(dòng)相的兼容性。張艷海等[19]采用在線二維液相色譜法測(cè)定維生素AD制劑中維生素A和D的含量，分別選擇C8柱和極性嵌合的C18柱作為一維和二維色譜柱，以乙腈-甲醇-水作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，得到維生素D的回收率為90.0%～98.9%,RSD為1.1%，定量下限為0.015 mg/L，方法的準(zhǔn)確度和精密度良好，大大提高了實(shí)際樣品的分析效率；林玉宙等[20]采用在線二維液相色譜測(cè)定了嬰幼兒配方乳品和嬰幼兒米粉中維生素A、D3、E的含量，該方法以超高效C18柱和聚合鍵合的C18鍵合相PHA柱分別作為一維和二維色譜柱，分別以甲醇-水和乙腈-異丙醇為一維和二維的流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，得維生素D3的回收率為90.1%～99.7%，RSD為0.97%，定量下限為0.005 3 mg/L。且該法與國(guó)標(biāo)10769-2010方法檢測(cè)結(jié)果相一致，可用于實(shí)際樣品的測(cè)定。岑建斌等[21]采用正相二維液相色譜測(cè)定了嬰幼兒乳粉中維生素A、D3、E的含量，采用NH2柱和Silica柱作為一維和二維色譜柱，均以異丙醇-環(huán)己烷(2∶98)和正己烷為流動(dòng)相，方法的平均回收率為86.7%～90.6%，RSD為3.50%～3.83%，定量下限為0.07 mg/kg，此方法與國(guó)標(biāo)方法GB5413.9測(cè)定的結(jié)果不存在顯著性差異，可滿足日常乳粉檢測(cè)的定量需求。

2.2 液相色譜-質(zhì)譜法

高效液相色譜-質(zhì)譜法可通過(guò)色譜分離目標(biāo)物，還可根據(jù)目標(biāo)物的質(zhì)荷比進(jìn)行定性，具有靈敏度高、選擇性好的優(yōu)點(diǎn)，已成為維生素D和25-羥基維生素D的重要分析手段。張潔等[12]采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定畜禽肉中的維生素D3和25-羥基維生素D3，方法的加標(biāo)回收率為75.0%～97.1%，RSD為1.9%～5.6%，檢出限均為0.60 μg/kg。并且比較了高效液相色譜和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的測(cè)定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)后者的靈敏度和特異性均優(yōu)于前者，且線性和重現(xiàn)性均更好。Huang等[22]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定奶粉中維生素D2和D3，兩者的加標(biāo)回收率為100%～108%，RSD為3.7%～8.2%，定量下限為0.11、0.086 IU/mL。該研究還比較了超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的測(cè)定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)前者能夠?qū)⒈Ａ魰r(shí)間從20 min縮短至10 min，且可以更好地將干擾物與目標(biāo)物分離，結(jié)果準(zhǔn)確度更高。

研究表明，衍生可以提高維生素D的離子化效率，降低背景干擾，常用的衍生劑為4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)。Gomes等[23]采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定了母乳、牛奶、羊奶、馬奶中的維生素D2/D3、25-羥基維生素D2/D3、1,25-二羥基維生維D2/D3以及24,25-二羥基維生維D2/D3，方法的回收率為88.2%～105%，RSD為4.8%～14%。并對(duì)比了皂化和沉淀蛋白對(duì)萃取的影響，確認(rèn)沉淀蛋白的效果更好。該研究還優(yōu)化了使用PTAD進(jìn)行柱前衍生的方法，發(fā)現(xiàn)對(duì)5種維生素D類似物，當(dāng)PTAD與其物質(zhì)的量之比為10 000∶1、反應(yīng)1 h時(shí)產(chǎn)物的靈敏度均最佳。并通過(guò)對(duì)前端液相色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，有效降低了基質(zhì)效應(yīng)，使25-羥基維生素D及其異構(gòu)體得到了良好的分離。Gill等[24]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和PTAD衍生的方法測(cè)定了牛奶和奶粉中的維生素D3，方法的回收率為94.7%～105%，RSD為1.4%～4.5%，該研究表明經(jīng)PTAD衍生后的產(chǎn)物具有良好的靈敏度和選擇性，有效減少了樣品前處理時(shí)間和液相色譜分離時(shí)間。在多家實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證研究中[25]，9家實(shí)驗(yàn)室采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和PTAD衍生法對(duì)嬰兒奶粉和營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中維生素D2和D3進(jìn)行了測(cè)定，重復(fù)性RSD為1.9%～5.8%，重現(xiàn)性RSD為6.4% ～ 13%，采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)NIST 1849a進(jìn)行準(zhǔn)確度試驗(yàn)，P值為0.32，表明該方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度。Nestola等[26]采用在線高效液相色譜-氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)食品中維生素D2和D3進(jìn)行了測(cè)定，定量下限分別為128、157 pg，重復(fù)性RSD為1.0%～1.3%，與高效液相色譜/紫外檢測(cè)器法和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法需使用半制備色譜和固相萃取凈化相比，該方法簡(jiǎn)化了樣品前處理步驟，是一種高通量檢測(cè)方法。

2.3 超臨界流體色譜法

超臨界流體色譜采用二氧化碳和少量有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，具有綠色環(huán)保的特點(diǎn)，與高效液相色譜相比，可以在更短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)化合物的良好分離，是近年來(lái)快速發(fā)展的分析技術(shù)。由于二氧化碳屬于非極性物質(zhì)，因此超臨界流體色譜非常適合分析疏水性化合物，且可添加不同極性的有機(jī)溶劑作為助溶劑，使流動(dòng)相的極性十分靈活多樣，能滿足不同極性化合物的分離需要。超高效超臨界流體色譜是基于超臨界流體色譜的新型分離儀器，與亞2 μm粒徑色譜柱聯(lián)用可進(jìn)一步提高其分離效率。本實(shí)驗(yàn)室采用超高效超臨界流體色譜對(duì)保健食品中類胡蘿卜素和動(dòng)物肝臟中的維生素A異構(gòu)體進(jìn)行分離測(cè)定，獲得了良好的分離效果[27-28]。Oberson等[29]采用超高效超臨界流體色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定了食品中多種脂溶性維生素，以Acquity UPC21-AA(3.0 mm×100 mm,1.8 μm)為色譜柱，含有10 mmol/L甲酸銨的甲醇-水(98∶2)溶液為助溶劑，在柱溫為45 ℃，背壓1 856 psi條件下，于7 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了視黃醇乙酸酯、視黃醇棕櫚酸酯、視黃醇、α-生育酚、α-生育酚醋酸酯、維生素D2、維生素D3、維生素K1、維生素K2的分離。所有脂溶性維生素的回收率為90.0%～110%，采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)NIST 1849a進(jìn)行準(zhǔn)確度試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果與參考值沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Rathi等[30]以Acquity UPC2BEH Column(3.0 mm×100 mm,1.7 μm)為色譜柱，異丙醇為助溶劑，在柱溫為50 ℃，背壓1 800 psi條件下采用超高效超臨界流體色譜對(duì)食用油中多種脂溶性維生素進(jìn)行了測(cè)定，在8 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)了視黃醇、視黃醇乙酸酯、維生素D2、維生素D3、生育酚、維生素K1、維生素K2的分離。所有目標(biāo)物的回收率為69.5%～98.6%，RSD為0.01%～1.8%，定量下限為0.05～3.59 μg/mL。Hamada等[31]采用超臨界流體色譜-反相高效液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定了油和脂肪樣品中的維生素D，樣品經(jīng)正己烷提取后直接進(jìn)樣分析，超臨界流體色譜在線凈化，反相高效液相色譜-質(zhì)譜測(cè)定，回收率為84.3%～110%，RSD為5.8%～7.1%，方法顯著減少了樣品前處理時(shí)間，提高了分析效率。

2.4 放射免疫與薄層色譜法

Purchas等[4]采用Biosource公司的放射免疫分析試劑盒對(duì)牛羊肉中25-羥基維生素D3進(jìn)行了測(cè)定。取1.5 g樣品，切碎后以2.5 mL乙腈-水(10∶4)萃取3 h，離心后測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)生肉樣品和烹飪后樣品中25-羥基維生素D3的變異系數(shù)分別為8.5%(n=48)和7.7%(n=72)，檢出限為0.6 ng/mL。Trineeva等[32]以梯度薄層色譜法測(cè)定了食品中維生素A、D2、E、β-胡蘿卜素，維生素D2的檢出限為7×10-9g，RSD為4.9%。結(jié)果表明薄層色譜具有簡(jiǎn)單易操作，低成本的特點(diǎn)，可用于植物樣品、保健食品中多種維生素的測(cè)定。

近年來(lái)食品中維生素D的部分檢測(cè)方法見表1。

表1 食品中維生素D的檢測(cè)方法Table 1 Determination methods of vitamin D in foods

3 食品中維生素D與25-羥基維生素D含量分布研究進(jìn)展

近年來(lái)歐洲、美國(guó)、韓國(guó)等國(guó)家和地區(qū)都建立了維生素D和25-羥基維生素D的食物成分表[2,38-39]。Yoo等[39]的研究表明韓國(guó)人維生素D主要膳食來(lái)源為魚和貝類(71.34%)、蛋類(14.89%)。劉琰等參照《日本食品標(biāo)準(zhǔn)成分表》中維生素D的數(shù)據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，銀耳是中國(guó)北京、蘇州等八地區(qū)學(xué)齡前兒童維生素D最重要的膳食來(lái)源(48.16%)，其次是奶類及奶制品(36.16%)和木耳(5.27%)。并指出我國(guó)學(xué)前兒童維生素D攝入水平不容樂觀，建議適量增加維生素D的攝入，同時(shí)避免攝入過(guò)量[40]。

3.1 動(dòng)物性食品中維生素D和25-羥基維生素D分布研究進(jìn)展

Liu等[43]考察了澳大利亞市場(chǎng)上紅肉(羊肉、牛肉等)中維生素D3和25-羥基維生素D3的含量，以及緯度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)羊瘦肉中維生素D3和25-羥基維生素D3的含量分別為0.10 μg/100 g和0.20 μg/100 g；羊肉脂肪中分別為0.88 μg/100 g和<0.20 μg/100g；牛瘦肉中分別為0.12 μg/100 g和0.27 μg/100 g；牛肉脂肪中分別為0.76 μg/100 g和0.40 μg/100 g。緯度對(duì)于瘦牛肉中二者的含量幾乎沒有影響，但低緯度的牛肉脂肪中維生素D3的含量要比高緯度的牛肉高。

Guo等[44]測(cè)定了雞蛋中維生素D3和25-羥基維生素D3的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)散養(yǎng)和有機(jī)飼養(yǎng)的雞蛋中維生素D3的含量均高于室內(nèi)飼養(yǎng)，且25-羥基維生素D3的含量在有機(jī)雞蛋中的含量最高，可能與其在飼養(yǎng)過(guò)程中受到更多陽(yáng)光照射相關(guān)。研究結(jié)果表明雞蛋中維生素D的含量約為2 μg/個(gè),約為英國(guó)65歲以上居民膳食維生素D推薦攝入量的20%。Jakobsen等[45]測(cè)定了奶制品中的維生素D2/D3和25-羥基維生素D2/D3的含量。牛奶、奶油、黃油中維生素D3和25-羥基維生素D3的含量為4.6～196 ng/100 g和4.2～96 ng/100 g，牛奶和黃油中維生素D2分別為3.4、61 ng/100 g,25-羥基維生素D2分別為3.1、58 ng/100 g。Martini等[46]測(cè)定了食用驢奶中維生素D的含量，測(cè)得生驢奶中維生素D2和維生素D3的含量分別為1.68、0.60 μg/100 mL，經(jīng)巴氏殺菌處理后二者的含量為1.38、0.30 μg/100 mL。研究表明驢奶中二者的含量高于其在牛奶和母乳中的含量，因此食用驢奶可增加維生素D攝入量。Gill等[47]比較了不同季節(jié)牛奶中維生素D3和25-羥基維生素D3的含量，發(fā)現(xiàn)維生素D3的含量范圍為167～615 ng/L，而25-羥基維生素D3的含量變化不大，均小于50 ng/L。

3.2 植物中維生素D的含量分布研究進(jìn)展

Hughes等[48]測(cè)定了13種澳大利亞食用植物和海藻中的維生素D2/D3、25-羥基維生素D2/D3，結(jié)果在5種樣品中檢出維生素D2，含量為0.03～0.67μg/100 g干重，1種樣品中檢出維生素D3，含量為0.01 μg/100 g干重。Kühn等[49]對(duì)可可豆及其制品中維生素D含量進(jìn)行了測(cè)定，測(cè)得黑巧克力中維生素D2含量為1.90～5.48 μg/100 g，白巧克力中維生素D2含量為0.19～1.91 μg/100 g，巧克力堅(jiān)果醬中維生素D2含量為0.15 μg/100 g。N?lle等[50]研究了光照和干燥方式對(duì)于蘑菇中維生素D2含量的影響。結(jié)果顯示，不切和切片蘑菇經(jīng)紫外光照射后維生素D2含量分別為45、406 μg/g干重。蘑菇經(jīng)日曬干燥和太陽(yáng)能干燥器干燥后維生素D2含量分別為36、39 μg/g干重。由此可見，經(jīng)紫外光照射、日曬干燥、太陽(yáng)能干燥器干燥后的蘑菇中均含有較高的維生素D2。

4 結(jié)論與展望

維生素D是維持人體健康的重要脂溶性維生素，食品是其攝入的重要來(lái)源之一，因此建立我國(guó)維生素D食品成分?jǐn)?shù)據(jù)庫(kù)對(duì)其攝入量研究具有重要意義，而準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)方法是研究的前提和基礎(chǔ)。由于食品中維生素D和25-羥基維生素D含量較低，且基質(zhì)干擾較多，因此已有前處理方法多采用繁瑣復(fù)雜的前處理步驟(如皂化、液液萃取、半制備液相色譜凈化等)，存在有機(jī)溶劑用量大、耗時(shí)長(zhǎng)、耗費(fèi)人力物力的缺點(diǎn)，因此研究開發(fā)簡(jiǎn)單快速的前處理方法可以極大地提高樣品的檢測(cè)效率。由于維生素D2/D3、25-羥基維生素D2/D3在樣品中的含量較低，并且其結(jié)構(gòu)較為相似，因此開發(fā)具有高靈敏度、高特異性的檢測(cè)方法是今后的研究方向。目前食物中維生素D的研究多關(guān)注肉類食物，對(duì)于植物中維生素D的研究較少。而我國(guó)是植物性食品的消費(fèi)大國(guó)，研究植物中的維生素D含量對(duì)于提高我國(guó)居民的維生素D營(yíng)養(yǎng)水平具有重要意義。