岑琴　趙卉　胡夢(mèng)坤

摘要：為提高食品中抗氧化劑BHA，BHT，TBHQ的檢測(cè)效率，利用固相萃取-超高效液相色譜進(jìn)行檢測(cè)試驗(yàn)。結(jié)果表明：3種抗氧化劑在1.6～160 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.99，方法檢出限分別為10，10，4 mg/kg；添加水平為10倍檢出限，回收率為96.0 %～101.4 %，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9 %～3.9 %。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜；檢測(cè)方法；檢出限；抗氧化劑

中圖分類(lèi)號(hào)：TS207.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-1161（2019）02-0049-03

叔丁基對(duì)羥基茴香醚（BHA）和2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）是食品加工行業(yè)較常使用的抗氧化劑，將其添加于油脂和含脂肪高食品中，可穩(wěn)定食品中的營(yíng)養(yǎng)成分和脂溶性維生素。特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）是一種新型脂溶性抗氧化劑，低毒，用量少，抗氧化能力大于BHA和BHT，在延遲食品中油脂氧化變質(zhì)方面應(yīng)用廣泛。采用固相萃取凈化結(jié)合超高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中的BHA，BHT和TBHQ，簡(jiǎn)化樣品前處理方法，提高結(jié)果準(zhǔn)確性和靈敏度，旨為為日常檢測(cè)及檢驗(yàn)方法驗(yàn)證提供適用方法。

1 材料與方法

1.1 試劑

叔丁基對(duì)羥基茴香醚（BHA）、2，6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）、特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液

（1 000 mg/L），由美國(guó)O2Si生產(chǎn)；甲醇（色譜純）由美國(guó)fisher公司生產(chǎn)；乙腈（色譜純）由美國(guó)fisher公司生產(chǎn)；正己烷（分析純）由國(guó)藥試劑有限公司生產(chǎn)；甲酸（分析純）由天津試劑廠生產(chǎn)；色譜用水為符合《GB/T 6682-2008》規(guī)定的一級(jí)水。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters H-Class超高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測(cè)器）：美國(guó) waters公司；色譜柱Waters BEH RP18 （2.1 mm ×50 mm，1.7 μm）；電子天平：北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；超純水制備系統(tǒng)：美國(guó)Milli-Q公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 移取適量體積的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋成濃度為20，50，100，200，400 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3.2 樣品前處理 準(zhǔn)確稱取1.0 g（精確至0.01 g）試樣于離心管中，加入5 mL乙腈飽和的正己烷溶液，渦旋1 min充分混勻，浸泡10 min。加入5 mL飽和氯化鈉溶液，用5 mL正己烷飽和的乙腈溶液渦旋2 min，3 000 r/min離心5 min，收集乙腈層于試管中。重復(fù)提取2次，收集3次提取液，加入0.1 %甲酸溶液調(diào)節(jié)pH為4，待凈化。

1.3.3 凈化 在C18固相萃取柱中裝入2 g無(wú)水硫酸鈉，用5 mL甲醇活化萃取柱，再以5 mL乙腈平衡，棄去流出液。將所有提取液傾入柱中，棄去流出液，再以5 mL乙腈和甲醇的混合溶液洗脫。收集所有洗脫液，旋蒸至干，加2 mL乙腈定容，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，待測(cè)。

1.3.4 色譜條件 流動(dòng)相的選擇：選擇0.5 %甲酸水溶液及甲醇溶液為流動(dòng)相，配合梯度洗脫。流速：0.3 mL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：0.4 μL。

對(duì)3種抗氧化劑在190～400 nm之間進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，確定檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm。為實(shí)現(xiàn)3種抗氧化劑完全分離，采用梯度洗脫方式，具體條件見(jiàn)表1。

在以上色譜條件下進(jìn)樣0.4 μL，以色譜峰面積外標(biāo)法定量，色譜如圖1所示。

1.3.5 方法回收率及精密度 為考察方法的可靠性，對(duì)3種合成著色劑進(jìn)行加標(biāo)回收率測(cè)定。將加標(biāo)量定為檢出限（10，4 mg/kg）及10倍檢出限（100，40 mg/kg），按照1.3.2提取方法提取6份，計(jì)算回收率及精密度。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍及檢出限

噪聲高3倍（S/N=3）相對(duì)應(yīng)的濃度為檢出限。線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢出限見(jiàn)表2。

從表2可以看出，3種抗氧化劑在線性范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。

2.2 方法回收率及精密度

通過(guò)加標(biāo)回收率試驗(yàn)，對(duì)方法進(jìn)行回收率和精密度測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可知：抗氧化劑的平均回收率為96.0%～101.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%～3.9%（n=6），滿足《GB/T27404-2008實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》對(duì)精密度和準(zhǔn)確度的要求。

3 結(jié)論與討論

建立固相萃取凈化結(jié)合超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定食品中3種抗氧化劑（BHA、BHT、TBHQ）的分析方法。樣品用正己烷溶解后用乙腈提取，經(jīng)C18固相萃取小柱凈化后，以0.5 %甲酸水溶液-甲醇為流動(dòng)相，采用Waters ACQUITY UPLC BEH RP18色譜柱實(shí)現(xiàn)待測(cè)物分離，以二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。前處理簡(jiǎn)單，回收率高，精密度好，檢測(cè)速度快，適用于食品中此3種抗氧化劑的檢測(cè)。

建立的UPLC法具有以下特點(diǎn)：1） 分析速度快。分離3種抗氧劑僅需4.2 min，而國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GB5009.32-2016食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中9種抗氧化劑的測(cè)定》中第一法高效液相色譜法測(cè)定需30 min，其他方法需時(shí)大于15 min。2） 抗氧化劑分離效果好。由于采用小顆粒填充的短柱，因此具有較高的柱效和較低擴(kuò)散體積。

參考文獻(xiàn)

[1] 林捷，張彩云，鄭申西，等.凝膠滲透色譜-高效液相色譜法測(cè)定食品中抗氧化劑BHA、BHT、TBHQ[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（7）：1 694-1 696.

[2] 冼燕萍，郭新東，羅海英，等.固相萃取-超高效液相色譜分離測(cè)定洗滌用品中4種熒光增白劑[J].色譜，2013，31（2）：162-169.

[3] 李興根，喬勇升，韓芷玲，等.高效液相色譜測(cè)定食品中的7種抗氧化劑[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2012，31（10）：1 319-1 324.

[4] 郝媛媛，丁軼聰，張巖巖.HPLC-UV法測(cè)定食品中抗氧化劑特丁基對(duì)苯二酚（TBHQ）[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（4）：748-749.

[5] 左玉，張國(guó)娟，惠芳，郭玉晶.食品抗氧化劑的研究進(jìn)展[J].糧食與油脂，2018，31（05）：1-3.

[6] 馬滕霞.淺析高效液相色譜在食品添加劑檢測(cè)中的應(yīng)用[J].食品安全導(dǎo)刊，2018（36）：91.