吸煙對(duì)肺腺癌患者肺功能、生存期及miR-373、BRF2基因表達(dá)的影響觀察*

李偉堅(jiān) 林常青 陳中紅

惠州市中心人民醫(yī)院，廣東 惠州 516000

肺癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)，隨著我國(guó)工業(yè)化速度加快和環(huán)境污染日益嚴(yán)重，我國(guó)肺癌發(fā)病率及死亡率均呈上升趨勢(shì)[1]。預(yù)計(jì)到2025年，我國(guó)肺癌人數(shù)將達(dá)到100萬(wàn)，成為世界上肺癌患病人數(shù)最多的國(guó)家[2]。肺腺癌是肺癌常見(jiàn)的組織學(xué)類(lèi)型，約占肺癌的50%，不同分型的肺腺癌在臨床、影像學(xué)、遺傳學(xué)及病理學(xué)上都有較大的差異[3]。肺腺癌的發(fā)病年齡較小，且多見(jiàn)于女性，臨床治療效果不如鱗癌，通常術(shù)后5年生存率小于10%[4]。目前，大眾對(duì)吸煙和肺癌之間的關(guān)聯(lián)均有所了解，越來(lái)越多的人通過(guò)戒煙來(lái)保護(hù)自己的身體健康，但與吸煙密切相關(guān)的鱗癌的患病率明顯低于與吸煙相關(guān)性不高的腺癌。有研究發(fā)現(xiàn)戒煙可延長(zhǎng)肺腺癌患者的生存期，對(duì)患者的預(yù)后具有極其重要的意義[2]。因此，本研究探究吸煙對(duì)肺腺癌患者肺功能、生存期及miR-373、BRF2基因表達(dá)的影響，旨在研究吸煙對(duì)肺腺癌患者的影響，為臨床提供更多的科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年2月—2017年2月于我院就診并確診為肺腺癌患者86例，所有患者均經(jīng)組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)檢查確診為肺腺癌，根據(jù)患者是否吸煙將其分為吸煙組(n=48)和非吸煙組(n=38)。吸煙組男21例，女27例，年齡32～81歲，平均年齡(56.87±15.35)歲，按最新國(guó)際肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)(第八版)分為Ⅰ期3例，Ⅱ期5例，Ⅲa期14例，Ⅲb期12例，Ⅳ期14例；非吸煙組男16例，女22例，年齡31～81歲，平均年齡(57.29±16.04)歲，按最新國(guó)際肺癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)(第八版)分為Ⅰ期2例，Ⅱ期5例，Ⅲa期11例，Ⅲb期9例，Ⅳ期11例。兩組患者的年齡、性別和TNM分期等一般資料無(wú)明顯差異(P<0.05)，具有可比性。

1.2 方法

采用肺功能儀(型號(hào)：Masterscreen系列，德國(guó)耶格公司制備)對(duì)兩組患者進(jìn)行肺功能測(cè)定。檢測(cè)指標(biāo)包括：肺活量(VC)、第一秒用力呼出量(FEV1)、用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼出量/用力肺活量(FEV1/FVC)、最大呼氣流速(PEF)、最大通氣量(MVV)、殘氣量/肺總量(RV/TLC)、一氧化碳彌散量(DLCO)及彌散系數(shù)(DLCO/VA)，測(cè)試前輸入患者身高、體重、性別、年齡等指標(biāo)，由電腦自動(dòng)生成預(yù)測(cè)值，結(jié)果由實(shí)際值/預(yù)測(cè)值×100%表示。以電話隨訪的方式統(tǒng)計(jì)患者生存期，生存期截止統(tǒng)計(jì)至2018年4月30日。分別統(tǒng)計(jì)生存期≤6個(gè)月，6～12個(gè)月，及>12個(gè)月的患者例數(shù)。取患者癌組織，樣品儲(chǔ)存于-80℃。樣品冰上研磨成粉末狀后加入Trizol提取總RNA，應(yīng)用Prime Script? miRNA cDNA Synthesis Kit(寶生物工程有限公司制備)將microRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用RT-PCR法測(cè)定miR-373和BRF2的相對(duì)表達(dá)水平。miR-373的引物為：5’-GTAGCAGGATGGCCCTAGAC-3’(正向)；5’-CGCCCTCTGAACCTTCTCTT-3’(反向)。BRF2的引物為：5’-GTGAAGCTCCTGGGACTGGAT-3’(正向)；5’-GTATTTGGCTGGCACAGAAGG-3’(反向)。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳分析。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比兩組患者的肺功能情況；對(duì)比兩組患者生存期；對(duì)比兩組患者病變組織的miR-373和BRF2表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者肺功能對(duì)比

吸煙組的肺通氣功能指標(biāo)RV及RV/TCL均明顯高于非吸煙組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；吸煙組的小氣道功能指標(biāo)V25、V25%、V50及V50%均明顯低于非吸煙組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；吸煙組的肺彌散功能指標(biāo)DLCO、DLCO/VA、DLCO%及DLCO/VA%均低于非吸煙組，其中DLCO、DLCO/VA及DLCO%指標(biāo)與非吸煙組對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 兩組患者生存期對(duì)比

吸煙組生存期>12個(gè)月有8例(16.67%)，非吸煙組生存期>12個(gè)月有8例(36.84%)，吸煙組>12個(gè)月生存率明顯低于非吸煙組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 兩組患者病變組織的miR-373和BRF2表達(dá)水平對(duì)比

兩組患者的miR-373表達(dá)見(jiàn)圖1a-b，BRF2表達(dá)見(jiàn)圖1c-d，吸煙組患者病變組織中的miR-373和BRF2表達(dá)水平均高于非吸煙組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(miR-373：t=10.392，P=0.000<0.05，BRF2：t=7.258，P=0.000<0.05)。

表1 兩組患者肺功能對(duì)比

表2 兩組患者生存期對(duì)比[n(%)]

a)miR-373 RT-PCR電泳圖

b)miR-373相對(duì)表達(dá)量

c)BRF2 RT-PCR電泳圖

d)BRF2相對(duì)表達(dá)量

3 討 論

肺癌屬于惡性呼吸系統(tǒng)腫瘤，且近年來(lái)發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，肺癌的治愈率較低，主要原因?yàn)榇蠖鄶?shù)肺癌患者發(fā)現(xiàn)時(shí)肺癌已發(fā)展為中晚期，僅有15%患者診斷為早期，且肺癌的五年生存率僅為20%左右[6]。肺癌可非為鱗癌、腺癌、未分化癌及肺泡細(xì)胞癌，其中，肺腺癌約占肺癌的50%[7]，腺癌起源于支氣管粘膜上皮，也有少數(shù)起源于大支氣管的粘液腺，腺癌的發(fā)病年齡較小，女性發(fā)病率高[8]，早期一般沒(méi)有明顯的臨床癥狀。1912年，Adler提出吸煙與肺癌之間存在密切關(guān)系，現(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，吸煙易導(dǎo)致肺鱗癌和小細(xì)胞肺癌[9]，但腺癌多發(fā)于不吸煙女性[10]，有探究提示女性肺腺癌發(fā)病可能與廚房油煙及被動(dòng)吸煙有關(guān)[11-12]。尹惠敏等[2]研究發(fā)現(xiàn)，戒煙可延長(zhǎng)肺腺癌患者的生存期，對(duì)患者的預(yù)后具有極其重要的意義。因此，本研究探究吸煙對(duì)肺腺癌患者肺功能和生存期的影響，旨在研究吸煙對(duì)肺腺癌患者的影響，為臨床提供更多的科學(xué)依據(jù)。研究發(fā)現(xiàn)，吸煙組的肺通氣功能指標(biāo)RV及RV/TCL均明顯高于非吸煙組(P<0.05)；小氣道功能指標(biāo)V25、V25%、V50及V50%均明顯低于非吸煙組(P<0.05)。由此提示，吸煙會(huì)進(jìn)一步影響肺癌患者的肺通氣功能，加重肺癌患者肺通氣功能障礙。肺彌散功能是指氧氣和二氧化碳通過(guò)肺泡和肺毛細(xì)血管進(jìn)行氣體交換的過(guò)程，評(píng)價(jià)肺泡和肺毛細(xì)血管進(jìn)行氣體交換的效率，是肺換氣功能組成的重要部分[13]。正常情況下，人的實(shí)際肺彌散功能/預(yù)測(cè)值>80%。本研究結(jié)果顯示，兩組患者的實(shí)際肺彌散功能/預(yù)測(cè)值均小于80%，吸煙組的肺彌散功能指標(biāo)DLCO、DLCO/VA、DLCO%及DLCO/VA%均低于非吸煙組，其中DLCO、DLCO/VA及DLCO%指標(biāo)與非吸煙組對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示，肺腺癌會(huì)導(dǎo)致患者的肺彌散功能下降，且吸煙會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致患者的肺彌散功能下降。本研究還發(fā)現(xiàn)，吸煙組生存期>12個(gè)月有8例(16.67%)，非吸煙組生存期>12個(gè)月有8例(36.84%)，吸煙組>12個(gè)月生存率明顯低于非吸煙組(P<0.05)，與尹惠敏等[2]研究相一致，由此可得，吸煙不利于肺腺癌患者，可能會(huì)縮短患者的生存期。

研究發(fā)現(xiàn)，miRNA與癌癥發(fā)生密切相關(guān)[14]，在腫瘤發(fā)生中起重要的作用，現(xiàn)已在卵巢癌[15]、胃癌[16]、宮頸癌[17]及肺癌[18]等腫瘤中被證實(shí)。研究發(fā)現(xiàn)，miR-373與腫瘤發(fā)生具有關(guān)聯(lián)性，在人胃癌細(xì)胞系MKN-45細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)miR-373表達(dá)水平明顯升高，miR-373還對(duì)腫瘤細(xì)胞周期具有調(diào)節(jié)性，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞繁殖[19]。TFⅡB相關(guān)因子2(BRF2)為編碼BRF2蛋白的基因，在miRNA產(chǎn)生的過(guò)程中起重要作用。因此，本研究還探究了吸煙對(duì)肺腺癌患者miR-373和BRF2基因表達(dá)的影響，研究發(fā)現(xiàn)，吸煙組患者病變組織中的miR-373和BRF2基因表達(dá)水平均高于非吸煙組(P<0.05)。由此說(shuō)明，吸煙能使miR-373和BRF2基因水平升高，不利于肺腺癌患者。

綜上所述，吸煙會(huì)影響肺腺癌患者的肺功能，會(huì)縮短肺腺癌患者的生存期，不利于患者預(yù)后，應(yīng)鼓勵(lì)吸煙的肺腺癌患者戒煙。