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      外源激素處理對櫸樹葉片愈傷組織誘導(dǎo)技術(shù)研究

      2019-05-28 09:24:08王曉立王婷許佳明
      農(nóng)業(yè)與技術(shù) 2019年10期
      關(guān)鍵詞:愈傷組織櫸樹誘導(dǎo)

      王曉立 王婷 許佳明

      摘 要:櫸樹在秋季色彩艷麗、是觀賞價值高的園林樹種。為了建立櫸樹無性繁殖體系,探討櫸樹葉片愈傷組織的誘導(dǎo),以櫸樹葉片作為外植體,采用75%乙醇(30s)、2%次氯酸鈉溶液(25min)消毒,接種于含不同激素種類及濃度的MS培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織,觀察統(tǒng)計培養(yǎng)結(jié)果。結(jié)果表明:櫸樹葉片作為外植體可以啟動愈傷組織的形成。在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,BA濃度為0.5mg/L,2,4-D濃度0.2mg/L的條件下,愈傷組織的誘導(dǎo)率最高。為櫸樹無性繁殖體系建立奠定基礎(chǔ)。

      關(guān)鍵詞:櫸樹;外源激素;愈傷組織;誘導(dǎo)

      中圖分類號:S-3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A

      DOI:10.19754/j.nyyjs.20190530069

      基金項目:宿遷市重點研發(fā)計劃(項目編號:L201702);宿遷市科技計劃項目(項目編號:Z2018219);江蘇省宿遷學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新項目(項目編號:2018XSJ052)

      *為本文通訊作者 櫸樹(Zelkova schneideriana)名稱眾多,又被稱為毛脈櫸、紅櫸、大葉櫸、黃櫸等。櫸樹分類上為榆科(Ulmaceae)櫸樹屬(Zelkova),是我國重點保護(hù)植物[1]。櫸樹是亞熱帶常綠闊葉樹種,在環(huán)境保護(hù)中具有重要作用[2]。櫸樹因其株形高大、枝干優(yōu)美,在秋季色彩艷麗,是觀賞價值高的園林樹種[3]。櫸樹也是良好用材樹種[4]。近年來,櫸樹野生資源稀缺,對于櫸樹的保護(hù)與開發(fā)利用尤為重要[5]。本文試驗通過對櫸樹葉片在不同外源激素種類以及濃度配比的培養(yǎng)基上培養(yǎng),從而篩選出櫸樹葉片愈傷組織誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基,為進(jìn)一步研究櫸樹無性繁殖提供試驗依據(jù)。

      1 實驗材料與方法

      1.1 實驗材料

      取自校內(nèi)栽培櫸樹。以葉片作為組織培養(yǎng)外植體。

      1.2 培養(yǎng)基配方

      本試驗采用L9(34)正交設(shè)計,BA,2,4-D,NAA 3因素3水平試驗(表1)。每種培養(yǎng)基的配方如(表2)。

      1.3 試驗方法

      接種前,將櫸樹葉片外植體沖洗干凈,吸水紙吸干水分后在超凈臺上用濃度為75%的酒精浸泡30s,再用濃度為2%的Naclo浸泡25min消毒。然后無菌水洗3次,每次1min。將嫩葉分割成5mm×5mm的小塊,置于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,每瓶5片,每種培養(yǎng)基接種6瓶。培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度(25±1)℃[6]。光照培養(yǎng)16h,黑暗培養(yǎng)8h。

      1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及分析

      采SPSS、Microsoft Excel軟件進(jìn)行分析和作圖。

      2 試驗結(jié)果與分析

      2.1 正交試驗結(jié)果

      結(jié)果如表3所示。3個因素對櫸樹愈傷組織誘導(dǎo)影響的主次關(guān)系依次是B>A>C,即2,4-D>BA>NAA。根據(jù)k值各因素對櫸樹愈傷組織誘導(dǎo)的影響:BA表現(xiàn)為 0.5mg/L>4mg/L>2mg/L;2,4-D表現(xiàn)為0.2mg/L>0.5mg/L>1 mg/L;NAA表現(xiàn)為 0mg/L> 0.1mg/L> 0.5mg/L。由此可得最優(yōu)水平組合為:A1B1C1,即0.5mg/LBA+ 0.2mg/L2,4-D。

      2.2 不同濃度的BA對櫸樹愈傷組織誘導(dǎo)的影響

      BA濃度在0.5mg/L時出愈率高,有光澤,生長性良好。當(dāng)BA濃度在2mg/L時,出愈率低,顏色較暗,生長差(圖1)。當(dāng)BA濃度在4mg/L時出愈率次于0.5mg/L時(圖1)。

      2.3 不同濃度2,4-D對櫸樹愈傷組織誘導(dǎo)的影響

      從圖2可得:在2,4-D濃度為0.2mg/L 時比其它2種誘導(dǎo)培養(yǎng)基出愈情況好,愈傷組織呈翠綠色,在2,4-D濃度為0.5mg/L 時次之,2,4-D濃度為1mg/L 時出愈最差。

      2.4 不同濃度NAA對櫸樹愈傷組織的誘導(dǎo)的影響

      NAA對櫸樹愈傷組織的誘導(dǎo)由下圖NAA的效應(yīng)曲線圖(圖3)可知,無NAA時,誘導(dǎo)率最高,愈傷組織生長好,具有光澤,隨著NAA濃度的升高愈傷組織長勢逐漸降低,顏色變得暗淡,無光澤。

      3 討論與結(jié)論

      櫸樹無性繁殖技術(shù)已有很多人在研究。鐘飛霞利用櫸樹小苗的嫩莖、葉片作為外植體,成功誘導(dǎo)出愈傷組織[7]。金曉玲以嫩枝作為外植體,在MS基本培養(yǎng)基上,篩選出了誘導(dǎo)櫸樹芽萌發(fā)最佳培養(yǎng)基[8]。劉雪梅等發(fā)現(xiàn)適合櫸樹不定芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)基[9];劉海龍發(fā)現(xiàn)幼嫩葉片誘導(dǎo)愈傷組織最佳配方[10]等。櫸樹葉片愈傷組織最佳培養(yǎng)基為MS+0.5mg/LBA+0.2mg/L2,4-D,出愈率為96.7%。

      參考文獻(xiàn)

      [1] 中國樹木志編委會.中國主要樹種造林技術(shù)(上冊)[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,1976:580-583.

      [2] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志(第二十二卷)[M].北京:科學(xué)出版社,1999:382-386.

      [3] 茹雷鳴,張燕雯,姜衛(wèi)兵.櫸樹在園林綠化中的應(yīng)用[J].廣東園林,2007(6) :50-52.

      [4] 江蘇省植物研究所.江蘇植物志:下冊[M].南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社,1982:63-64.

      [5] 汪靈丹,張日清.櫸樹的研究進(jìn)展[J].廣西林業(yè)科學(xué),2005,34(4):188-191.

      [6] 彭盡暉,呂長平,周晨.四季桂愈傷組織誘導(dǎo)與繼代培養(yǎng)[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2003(02):131-133.

      [7] 鐘飛霞.櫸樹無性繁殖技術(shù)研究[D].長沙:中南林業(yè)科技大學(xué),2010:33-35.

      [8] 金曉玲,何平,張日清.櫸樹莖尖的培養(yǎng)[J].中南林學(xué)院學(xué)報,2005,25(1):38-41.

      [9] 劉雪梅,羅雪梅,王征,等.直接器官發(fā)生途徑的櫸樹微繁體系建立[J].湖南師范大學(xué)自然科學(xué)學(xué)報,2014,37(2):17-21.

      [10] 劉海龍,張日清,汪靈丹,等.櫸樹葉器官再生植株技術(shù)[J].廣西林業(yè)科學(xué),2013, 42(3):231-233.

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