謝 迪，李 潮，李嘉淇，吳 倩，趙 俊

(華南師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，廣州市亞熱帶生物多樣性與環(huán)境生物監(jiān)測重點實驗室，廣東省水產(chǎn)健康安全養(yǎng)殖重點實驗室，廣東省水產(chǎn)優(yōu)質(zhì)環(huán)保養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510631 )

連江又名小北江，位于廣東省北部，是北江最大的一條支流，發(fā)源于廣東省連州市三姐妹峰，流經(jīng)陽山、英德地區(qū)，于英德市連江口鎮(zhèn)江口咀匯入北江[1]。河流長度為275 km，河道平均坡降為0.77‰，流經(jīng)地區(qū)多為高山、峽谷，河床石礫、卵石多，特別適合急流、底層等魚類生長[2]。連江流域浮游動物種群豐度為921.00～2160.35 個/L[3]；浮游植物多樣性指數(shù)和均勻度均處于較高水平，浮游植物密度為5.38×104個/L，水域環(huán)境質(zhì)量良好[4]，在連江上游已建立廣東連江龍牙峽水產(chǎn)種質(zhì)資源省級自然保護區(qū)。

倒刺鲃(Spinibarbusdenticulatus)，屬鯉形目、鯉科、鲃亞科、倒刺鲃屬，俗稱青竹鯉、青竹柏、竹柏鯉等，主要分布于我國珠江水系北江、西江和東江的中上游，以及海南島昌化江、南渡江，是珠江水系優(yōu)質(zhì)經(jīng)濟魚類[5]。在北江流域，倒刺鲃主要分布在北江上游及其支流連江、綏江和濱江，其中連江和武江是倒刺鲃在北江具有規(guī)模產(chǎn)量的兩個主產(chǎn)區(qū)。20世紀50年代，連江陽山段的倒刺鲃捕撈量占該江段主要經(jīng)濟魚類捕撈量的5%[2]，是極其重要的特色經(jīng)濟魚類之一。自20世紀60年代起，在連江上相繼修建了11座梯級水壩，導(dǎo)致倒刺鲃等特色經(jīng)濟魚類的資源量大幅下降。20世紀80年代在連江開展的魚類資源調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)該江段倒刺鲃的資源量占主要經(jīng)濟魚類總產(chǎn)量的比例已降至3%[2]。隨后，在2006—2009年和2013—2017年開展的淡水魚類資源調(diào)查中，發(fā)現(xiàn)連江陽山段已很難捕到倒刺鲃[1]，可見其個體數(shù)量已降至非常稀少的程度。增殖放流是恢復(fù)水生生物資源的有效手段[6]，珠江水系現(xiàn)已開展了大規(guī)模增殖放流活動，放流種類有青魚(Mylopharyngodonpiceus)、草魚(Ctenopharyngodonidellus)、鰱魚(Hypophthalmichysmolitrix)、鳙魚(Aristichthysnobilis)、廣東魴(Megalobramahoffmanni)、赤眼鱒(Squaliobarbuscurriculus)、鯪魚(Cirrhinusmolitorella)、中華鱘(Acipensersinensis)等，并取得了一系列成果，一些重要經(jīng)濟魚類如草魚、廣東魴等[7]資源已經(jīng)得到一定恢復(fù)。作為珠江名優(yōu)特色魚類，倒刺鲃自然種群現(xiàn)存量極少，以人工增殖方式恢復(fù)其在北江流域的資源量，將是避免倒刺鲃資源進一步減少、重建其野生種群的有效途徑。本研究采用可視熒光色素標志法，通過在連江陽山段龍牙峽區(qū)域進行倒刺鲃標志放流試驗，對倒刺鲃標志放流技術(shù)進行評估，為科學(xué)制定倒刺鲃在連江的增殖放流規(guī)劃提供依據(jù)，同時也為倒刺鲃在珠江流域增殖放流工作提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 苗種來源、規(guī)格和數(shù)量

倒刺鲃魚種來自廣東省韶關(guān)市韶關(guān)水產(chǎn)研究所人工培育的當年魚苗，其親本來源于北江水系的野生種群。將待放流魚種運送至放流點后，置于河道中的網(wǎng)箱內(nèi)暫養(yǎng)7 d，對全部待放流魚種逐尾進行熒光標志。放流點位于連江龍牙峽江段下游(圖1)。放流魚種體質(zhì)量(1.09±0.45) g，體長(4.00±0.34) cm(隨機取樣50尾)，放流數(shù)量為3×104尾，放流時間為2014年11月14—17日。

圖1 連江倒刺鲃放流點示意

1.2 標志方法

試驗用熒光標志為可視填充硅膠染料標記(美國西北海洋技術(shù)公司)，試驗中采用標志染料顏色為紅色。

標志步驟如下：

(1)使用10～20 L容積塑料桶，裝有麻醉劑間氨基苯甲酸乙酯甲磺酸鹽的水溶液，根據(jù)已確定好的麻醉劑量和麻醉時間對倒刺鲃進行浸浴，待其達到麻醉狀態(tài)即可進行熒光標志埋植操作。

(2)將進行熒光標志的兩種成分按比例混合。一種成分為熒光染料，一種為凝固劑，根據(jù)需要按8∶1～10∶1(熒光染料∶凝固劑)的比例進行混合。

(3)將混合物吸取適量到容積為0.3 mL的小型注射器中，使用3號(0.30 mm×8 mm)針頭進行注射。

(4)將用于標志的熒光色素緩慢注入幼魚下頜的表皮中，即可在幼魚下頜留下1條長約5 mm的熒光標志細線。

(5)在標志過程中，倒刺鲃暴露在空氣中的時間不超過2 min。

(6)將標志后的倒刺鲃移入水中復(fù)蘇，待其恢復(fù)正常后即投放至連江中。

1.3 標志魚回捕

自放流后第2個月開始對放流倒刺鲃進行回捕，用流刺網(wǎng)等工具在放流江段內(nèi)進行捕撈，同時在當?shù)厥袌鲞M行走訪調(diào)查收購標志魚。將回捕魚浸泡在10%福爾馬林溶液中，帶回實驗室后對每尾回捕魚進行基礎(chǔ)生物學(xué)數(shù)據(jù)測量。標志放流前，根據(jù)本試驗室多年的野外監(jiān)測并走訪當?shù)貪O民，確認放流江段已超過10年以上未捕撈到野生倒刺鲃。因此，本研究在統(tǒng)計回捕率時假定所有回捕魚均屬于最初放流的魚種。

1.4 統(tǒng)計分析

ρ=n1/n×100%

體長和體質(zhì)量關(guān)系：m=aLb

式中，ρ為回捕率(%)，n1為回捕量(尾)，n為放流量(尾)；m為體質(zhì)量(g)，L為體長(cm)，a、b為常數(shù)。

根據(jù)Pauly[8]的方法對體長與體質(zhì)量關(guān)系式的b值進行t檢驗，以檢驗b值是否偏離3；以體長的自然對數(shù)值作為協(xié)變量進行方差分析，檢驗倒刺鲃不同群體間體長與體質(zhì)量的關(guān)系是否存在差異[9]。

數(shù)據(jù)分析采用Microsoft Excel 2007和SPSS 20.0，采用Origin 9.0作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 回捕率

截至2016年5月，共回捕放流倒刺鲃275尾，具體回捕情況見表1。回捕工具主要為3層流刺網(wǎng)，少量為電捕。由表1可見，放流后前2個月未回捕到倒刺鲃，自第3個月逐漸回捕到倒刺鲃，其中放流后第6個月(2015年5月)回捕到的倒刺鲃最多，為65尾，1年后回捕量迅速下降，后續(xù)幾個月內(nèi)回捕量均少于5尾。根據(jù)回捕率計算公式可以算出，放流倒刺鲃回捕率為0.92%。

2.2 標志保留率

回捕倒刺鲃的熒光標志保留率見圖2。隨時間增加，熒光標志保留率越來越低，在放流后8個月內(nèi)標志保留率可以維持在50%以上(第6個月除外)，自第12個月開始回捕到的倒刺鲃無熒光標志。同時標志辨別度也隨時間增加而降低，在回捕的前幾個月內(nèi)，熒光標志仍可肉眼可辨，自第7個月開始熒光標志開始變得逐漸模糊，肉眼不可辨，需要借助紫外燈才能夠辨別。

2.3 標志魚的生長

回捕標志魚生物學(xué)數(shù)據(jù)見表1和圖3。由標志魚體長和體質(zhì)量變化情況可知，在放流后前幾個月中倒刺鲃生長緩慢，自第7個月開始生長迅速，截至2016年5月回捕到的倒刺鲃最大體長為25.0 cm，最大體質(zhì)量為433 g。

表1 標志魚的回捕情況

圖2 放流后不同時間倒刺鲃的標志保留率

圖3 放流倒刺鲃體長和體質(zhì)量生長情況

根據(jù)倒刺鲃體長、體質(zhì)量數(shù)據(jù)，利用SPSS 20.0進行回歸分析得出倒刺鲃體長、體質(zhì)量之間關(guān)系符合Keys公式(圖4)。關(guān)系式為m=0.016L3.194(n=275)，相關(guān)系數(shù)為r2=0.9840，P<0.001，說明其體長和體質(zhì)量顯著相關(guān)。t檢驗表明，體長與體質(zhì)量關(guān)系指數(shù)b與3之間差異顯著(t=8.38

圖4 放流倒刺鲃體長與體質(zhì)量關(guān)系

對放流群體和珠江水系分布的自然群體[10]、養(yǎng)殖群體[11]間進行協(xié)方差檢驗。結(jié)果表明，倒刺鲃放流群體和自然群體、養(yǎng)殖群體間體長—體質(zhì)量關(guān)系存在顯著性差異(P<0.001)(表2)，倒刺鲃放流群體生長狀況明顯優(yōu)于自然群體和養(yǎng)殖群體。

表2 倒刺鲃不同群體的體長—體質(zhì)量參數(shù)值

3 討 論

3.1 回捕率

放流群體的回捕率是評價標志放流的主要指標。本研究中，倒刺鲃的回捕率為0.92%，與其他魚類如黑鯛(Sparusmacrocephalus)(3.68%)[12]、褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)(2.05%和3.38%)[13]等相比有著較低的回捕率。倒刺鲃回捕率較低，原因分析可能有以下幾個方面：(1)放流時間在初冬。本次放流時間為2014年11月，放流時已快進入冬季，此時天氣寒冷、水溫較低，倒刺鲃餌料來源減少，使倒刺鲃適應(yīng)水體時間更長、放流后初期死亡率可能會較高。(2)放流水域為開放性水域，倒刺鲃可以逆流而上或順流而下遷移到其他水域，同時由于2015年夏季連江洪水多發(fā)，導(dǎo)致放流區(qū)域內(nèi)倒刺鲃資源量減少。(3)放流魚苗的初始規(guī)格較小。Sánchez-Lamadrid[14]在金頭鯛(Sparusaurata)的增殖放流研究中發(fā)現(xiàn)，大規(guī)格苗種的回捕率要遠大于小規(guī)格苗種。因此在未來的相關(guān)研究中，綜合考慮經(jīng)濟成本等因素應(yīng)適當放流更大規(guī)格倒刺鲃魚苗。(4)統(tǒng)計誤差。雖然雇請漁民專門進行回捕和調(diào)查記錄工作，但仍不能夠完全對回捕的倒刺鲃進行統(tǒng)計，導(dǎo)致回捕統(tǒng)計數(shù)量出現(xiàn)誤差?？傊?，造成放流倒刺鲃回捕率低的因素是多方面的，其原因還需進一步研究探討。

3.2 標志方法

標志放流是評價增殖放流工作的一個重要途徑[15]，目前國內(nèi)外已開展了大量研究工作[16-18]。隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展，標志方法發(fā)展的越來越經(jīng)濟、便捷，從最初掛牌、切鰭等傳統(tǒng)標志，到現(xiàn)在金屬線編碼標志、魚類熒光標志、電子芯片標志等新型標志，以及目前正在發(fā)展，但仍不完全成熟的分子標志，截至目前應(yīng)用最廣泛的仍是魚類熒光等這些對標記對象影響小、標志保持率高且對標記對象規(guī)格要求低[19]的方法。魚類熒光標志現(xiàn)已被國內(nèi)外諸多學(xué)者應(yīng)用在魚類[17,20]和甲殼類[21-22]動物上，在漁業(yè)研究和管理上是一種可靠的標志[23]，因此筆者利用魚類熒光標志對倒刺鲃的增殖放流進行研究。熒光標志顏色會影響辨別度，根據(jù)金赤鯛(Pagrusauratus)[24]、金頭鯛[25]的顏色辨別度試驗研究，得出紅色為所有8種(紅色、橙色、黃色、綠色、粉色、黑色、藍色和紫色)標志顏色中識別度最高，故本研究采用的標志顏色為紅色。由標志保留率可知，在放流后8個月內(nèi)，仍有著50%以上的保留率，隨后標志保留率迅速降低，放流1年后已捕獲不到標志倒刺鲃，說明魚類熒光標志在短期內(nèi)對倒刺鲃進行標志放流是可行的，但從長期來看標志保留效果不甚理想。Brennan等[26]在鋸蓋魚(Centropomusundecimalis)不同位置如下頜、頭部、鰭條等部位進行魚類熒光標志，1年之后幾乎所有標志均丟失或辨別不清，最后分析得出隨著時間增加，色素的沉積會遮蓋標志顏色，同時會降低標志的辨別度，尤其是下頜和尾鰭的部位。Soula等[27]根據(jù)在赤鯛(P.pagrus)上進行短期和長期魚類熒光標志試驗得出，影響標志保留率和辨別度的因素有很多方面，第一個也是最重要的因素——時間，雖然一些魚類熒光標志可保留3年時間[28]，但通常3個月之后標志丟失率會逐漸增加[29-30]；第二個因素是魚的種類[31]；此外還有標志區(qū)域色素沉積[32]、標志魚規(guī)格[17]等因素。由此可見，影響魚類熒光標志保留率的因素是多樣的，運用魚類熒光標志對倒刺鲃進行標記在短期來看(8個月內(nèi))是可行的。

3.3 放流水域倒刺鲃與網(wǎng)箱養(yǎng)殖、自然水域的生長比較

在放流初期倒刺鲃生長緩慢，之后則生長迅速，這與黑鯛[33-34]、黃鰭鯛(S.latus)[35]的結(jié)果相似，但生長緩慢時間均要大于黑鯛和黃鰭鯛。分析原因，一方面是放流時間較晚，放流時(2014年11月)已進入初冬，溫度較低，餌料生物來源減少；另一方面，人工繁育魚苗對自然水體的適應(yīng)性明顯弱于野生個體[36-37]，對餌料資源的競爭能力弱[38]；此外，放流個體規(guī)格較小[體質(zhì)量(1.09±0.45) g]，對自然水體適應(yīng)期較長[39]。協(xié)方差分析表明，倒刺鲃不同群體體長—體質(zhì)量存在顯著性差異(P<0.001)，說明倒刺鲃放流群體生長狀況明顯優(yōu)于自然群體和養(yǎng)殖群體，這與日本囊對蝦(Marsupenaeusjaponicus)[9]、黑鯛[12]的研究結(jié)果類似。已有研究表明，連江水域整體質(zhì)量良好[3-4]，且放流區(qū)域位于廣東省省級水產(chǎn)種質(zhì)資源保護區(qū)龍牙峽，從水域環(huán)境和餌料生物基礎(chǔ)上看，放流區(qū)域適宜倒刺鲃的生長。同時應(yīng)該注意到，由于放流倒刺鲃進行體長—體質(zhì)量關(guān)系回歸的個體較小，回捕倒刺鲃最大個體僅為433 g，遠小于其性成熟后質(zhì)量，因此回歸得出的體長—體質(zhì)量有可能出現(xiàn)誤差。

綜上所述，將熒光標志技術(shù)應(yīng)用于連江的倒刺鲃增殖放流是可行的。但需要在以下幾方面加以改進并最終形成放流技術(shù)規(guī)范：(1)提高放流魚種規(guī)格。本研究放流倒刺鲃平均體長4 cm，規(guī)格偏小，建議增大放流魚種的平均體長至6～8 cm。(2)在夏秋季放流。本研究放流時間在初冬，人為延長了放流適應(yīng)期，導(dǎo)致放流魚在放流后較長時間內(nèi)生長遲緩。如提前至初夏至初秋(5—9月)放流，總體放流效果將大大提高。(3)合理的放流數(shù)量。本研究雖未對放流數(shù)量的合理性進行評估，但從實際回捕效果和放流魚的生長狀況來看，放流數(shù)量還可以適當增加。當然，合理放流數(shù)量的確定受諸多因素的影響，譬如水體承載力、原有魚類群落結(jié)構(gòu)、放流魚類的生物學(xué)特性等。但根據(jù)放流魚類的生長發(fā)育狀況調(diào)整放流數(shù)量仍可作為重要的參考因素之一。

致 謝

實驗室張少平、羅錦楨、王春輝、彭寧東、張秀霞等同志參與試驗工作，陽山縣漁政大隊在野外工作中給予大力支持，特此致謝。