文優(yōu)芬

（廣州白云山光華制藥股份有限公司 廣東 廣州 510285）

潔凈區(qū)是在藥品生產(chǎn)企業(yè)最為常見的生產(chǎn)廠房設(shè)施，一般用于原輔料的取樣、產(chǎn)品的生產(chǎn)、產(chǎn)品的微生物限度檢驗等。2010年版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》[1]中潔凈區(qū)的定義為“需要對環(huán)境中塵粒及微生物數(shù)量進行控制的房間（區(qū)域），其建筑結(jié)構(gòu)、裝備及其使用應(yīng)當(dāng)能夠減少該區(qū)域內(nèi)污染物的引入、產(chǎn)生和滯留?！保诙俣粭l條款中還規(guī)定“必要的環(huán)境監(jiān)測操作規(guī)程、記錄和報告”、“（三）宜采用便于趨勢分析的方法保存某些數(shù)據(jù)（如檢驗數(shù)據(jù)、環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)、制藥用水的微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)）；”。因此有必要建立相關(guān)的操作規(guī)程及控制標(biāo)準對潔凈區(qū)環(huán)境進行監(jiān)測，一般稱潔凈區(qū)潔凈度監(jiān)測。

在2015年版中國藥典四部《9205藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則》[2]和2010年版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》指南中，也提到潔凈區(qū)潔凈度監(jiān)測的項目和周期要求，一般包括懸浮粒子、沉降菌、浮游菌、表面微生物檢測的全部項目或部分項目檢測。

浮游菌的監(jiān)測執(zhí)行中華人民共和國國家標(biāo)準GB/T16293-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法》[3]和2015年版中國藥典四部《9205藥品潔凈實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原則》。浮游菌的監(jiān)測規(guī)程及控制標(biāo)準應(yīng)包括采樣、檢測、計算和評定、注意事項等等。

1.采樣

一般使用空氣浮游菌采樣儀和培養(yǎng)皿進行采樣，培養(yǎng)皿規(guī)格需與采樣儀匹配、合適，培養(yǎng)基為胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，按要求配好后備用。潔凈區(qū)不同潔凈度級別的最小采樣量法規(guī)也有相應(yīng)規(guī)定，見表1，應(yīng)根據(jù)浮游菌檢測的潔凈區(qū)潔凈度級別選擇相應(yīng)的采樣量，并設(shè)置合適的采樣儀空氣流量。采樣操作者應(yīng)注意消毒采樣儀的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，應(yīng)檢查培養(yǎng)皿的質(zhì)量，放入和取出過程要注意人員衛(wèi)生并避免粗放操作，以免影響檢測結(jié)果。

表1 不同潔凈度級別的浮游菌的最小采樣量

2.檢測

浮游菌的檢測是將取樣后的培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，在30～35℃培養(yǎng)不少于72小時。培養(yǎng)完后，取出，用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。注意每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照實驗，一般每批可選定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。

3.計算和評定

3.1 法規(guī)規(guī)定

中華人民共和國國家標(biāo)準GB/T16293-2010《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法》規(guī)定的浮游菌的評定指標(biāo)為浮游菌平均濃度，而不同潔凈度級別有不同的判定標(biāo)準，見表2，評定標(biāo)準為每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定評定標(biāo)準（即相應(yīng)潔凈度級別）中的界限。

表2 不同潔凈度級別的浮游菌平均濃度評定標(biāo)準

每個測點的浮游菌平均濃度的計算公式見公式1：

浮游菌平均濃度（cfu/m3）=菌落數(shù)/采樣數(shù)×1000…………公式1。

示例1：某檢測點為潔凈度D級的潔凈區(qū)，按表1規(guī)定采樣量為250L，培養(yǎng)皿檢測出的菌落數(shù)為3，套用公式1，該檢測點浮游菌平均濃度則為：浮游菌平均濃度（cfu/m3）=3/250×1000=12cfu/m3。

該結(jié)果按表2評定，結(jié)果符合D級潔凈度要求。

3.2 存在不足

通過以上的計算和評定過程，可以看出此過程較為復(fù)雜，存在一些不足。

（1）不能直接從培養(yǎng)皿檢測出的菌落數(shù)判斷檢測結(jié)果是否符合評定標(biāo)準（即表2），不夠直觀；

（2）對于每個檢測點，都需要套用表1、公式1計算，再判斷結(jié)果是否符合表2，計算工作量大，容易出錯；

（3）計算和評定過程較為復(fù)雜，不利于人員培訓(xùn)，檢測人員難以掌握，出錯率增大。

（4）使用浮游菌平均濃度數(shù)據(jù)進行趨勢分析，不夠直觀，不便于指導(dǎo)日常檢測工作。

4.評定方法優(yōu)化

為了減少計算工作，減少出錯率，提高工作效率，本作者思索是否可以建立一個從每個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)結(jié)果直接判斷是否符合規(guī)定的控制標(biāo)準呢？而不同潔凈度級別的最小采樣量（表1）和評定標(biāo)準（表2）及計算公式（公式1）都已固定，每次采樣為一個培養(yǎng)皿，經(jīng)過思考和探索，可以將這些因素套入公式，進行轉(zhuǎn)換，將浮游菌結(jié)果轉(zhuǎn)換為cfu/皿，見示例2，得出一個新的、直觀的不同潔凈度級別的浮游菌菌落數(shù)判斷標(biāo)準，見表3。

示例2：

某檢測點為潔凈度D級的潔凈區(qū)，按表1規(guī)定采樣量為250L，按表2規(guī)定浮游菌平均濃度≤200（cfu/m3），套用公式1后如下公式2，計算出每個培養(yǎng)皿可檢測出的菌落數(shù)限度為≤50cfu/皿。

菌落數(shù)/250×1000=浮游菌平均濃度（cfu/m3）≤200（cfu/m3）…………公式2。

表3 不同潔凈度級別的浮游菌菌落數(shù)判斷標(biāo)準

5.結(jié)論

浮游菌控制標(biāo)準將浮游菌平均濃度轉(zhuǎn)化為每個培養(yǎng)皿可檢測出的菌落數(shù)限度后，潔凈度檢測人員可以從每個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)，直接判斷該檢測點是否符合相應(yīng)的潔凈度級別，不需要再套入公式計算，直觀、便捷。且在年度潔凈度趨勢分析時，使用浮游菌菌落數(shù)數(shù)據(jù)進行趨勢分析，在日常檢測時能初步判斷菌落數(shù)是否偏離趨勢，更有利于指導(dǎo)潔凈區(qū)潔凈度監(jiān)測，也符合2010年版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》條款“宜采用便于趨勢分析的方法保存某些數(shù)據(jù)”的要求。