中草藥復(fù)方多糖對肉雞腸道菌群及免疫功能的影響

方磊涵， 王 振， 劉詩柱， 畢玉霞*

（1.商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南商丘 476100；2.河南省中獸醫(yī)藥研究院，河南鄭州 450011）

隨著集約化養(yǎng)雞業(yè)的日益擴大，雞的疾病流行越來越復(fù)雜，各種防病促生長的抗生素及化學(xué)藥物被大量用于飼料中，造成了畜產(chǎn)品中抗生素殘留的增加，危害人類健康。尋找安全、高效、無毒、無污染的綠色添加劑成為了畜牧行業(yè)的發(fā)展趨勢（劉靜等，2013）。大量研究表明，多糖是主要生命物質(zhì)成分之一，具有廣泛的生物活性，特別是在免疫調(diào)節(jié)方面表現(xiàn)的更為突出。大多數(shù)中草藥都含有多糖的活性成分，在調(diào)整并維持腸道菌群平衡、激活免疫細胞、增強免疫功能等方面具有很好的作用（楊玉紅等，2013）。目前，單味中草藥多糖在動物生產(chǎn)上的應(yīng)用研究較多，如黃芪多糖 （王俊麗等，2010）、刺五加多糖 （趙國先等，2016）、大棗多糖（王留等，2014）、絞股藍多糖（方磊涵等，2018）、枸杞多糖（尹瑞卿，2013）、淫羊藿多糖（于紅梅，2015）等，但單味中草藥的作用效果與中草藥復(fù)方相比仍有一定的差距，其中中草藥復(fù)方多糖作為免疫增強劑來維持腸道菌群平衡的研究相對較少。為此，本試驗將在中草藥中提取的多糖成分添加在雞的日糧中，旨在探討其對雞腸道菌群、新城疫抗體效價及血清補體含量等的影響，為中草藥復(fù)方多糖在雞養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 中草藥復(fù)方多糖（CHCP）由黃芪、黨參、山楂、丹參、白術(shù)、茯苓、淫羊藿、補骨脂、生地、熟地、馬齒莧、甘草12味中草藥組成，藥材均購于商丘市天倫大藥房，中草藥復(fù)方多糖由商丘華康動物藥業(yè)有限公司提取，制得多糖含量為69.80%；雞新城疫活疫苗（Lasota株）購自商丘市動物疫病防控中心，由遼寧益康生物股份有限公司生產(chǎn)；補體C3、C4試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2 試驗動物及設(shè)計 將200羽1日齡健康商品代AA雛肉雞（由商丘科豐禽業(yè)公司提供）隨機分為4組，3個試驗組和1個對照組，每組50羽，分別于7、28 d用ND疫苗對雞進行點眼滴鼻免疫。對照組僅喂基礎(chǔ)日糧 （日糧組成及營養(yǎng)水平見表1），不添加任何藥物，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別在雞基礎(chǔ)日糧中添加200、400、600 mg/kg CHCP，試驗期為42 d。各組管理均相同，試驗雞為籠養(yǎng)，自由采食和飲水，第1周進行24 h光照，然后每天遞減1 h光照，直到正常光照。

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

表2 預(yù)混料配方

1.3 樣品的采集與處理 試驗期間，分別于14、28、42 d每組隨機選取5只雞翅下靜脈采血，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆谩５?2天，進行翅下靜脈采血后處死，無菌條件下剖開腹腔取同一部位盲腸，無菌采集盲腸內(nèi)容物，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 指標測定及方法

1.4.1 腸道菌群的測定 將無菌采集的盲腸內(nèi)容物按魏炳棟等 （2013）方法進行無菌生理鹽水稀釋、接種、培養(yǎng)及計數(shù)，計算菌落數(shù)并換算成1 g內(nèi)容物所含菌落數(shù)，1 g腸內(nèi)容物含大腸桿菌、沙門氏菌、乳酸桿菌和雙歧桿菌的菌群數(shù)量以“l(fā)g cfu/g”表示。

1.4.2 新城疫（ND-HI）抗體效價 采用血凝、血凝抑制試驗檢測血清中雞新城疫抗體效價。

1.4.3 血清補體C3、C4的測定 采用免疫比濁法，在紫外可見分光光度計上進行測定，嚴格按試劑盒說明書進行操作，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，計算出結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計分析 采用T檢驗法比較差異顯著性，P＜0.01為差異極顯著判斷標準，P＜0.05為差異顯著判斷標準。

2 結(jié)果與分析

2.1 CHCP對肉雞腸道微生物菌群的影響 由表3可知，在肉雞的日糧中添加CHCP以后，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量分別較對照組提高3.19%、9.79%、6.82%（P＜0.05）和 8.08%（P ＜ 0.05 ）、17.45%（P ＜ 0.01）、16.86%（P＜0.01），試驗Ⅱ組效果最好；與對照組相比，Ⅱ、Ⅲ組大腸桿菌、沙門氏菌數(shù)量分別降低14.34%、12.15%和 16.19%、16.61%（P ＜ 0.01），試驗Ⅰ組的大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量也顯著低于對照組（P＜0.05）。

表3 CHCP對肉雞盲腸內(nèi)容物的測定結(jié)果lg cfu/g

2.2 CHCP對肉雞血清新城疫抗體（ND-HI）的影響 由表4可見，與對照組相比，在所有的時間點，試驗組雞的ND抗體效價圴有不同程度的增高，在14 d時，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組較對照組分別提高了 9.80%、17.32%和13.56%（P ＜ 0.05）；28 d時，試驗Ⅱ、Ⅲ組較對照組分別提高了36.12%和25.79%（P ＜ 0.01），42 d時，試驗Ⅱ、Ⅲ組比對照組分別提高了 35.98%和30.18%（P＜0.01），在28、42 d時，試驗Ⅰ組與對照組沒有顯著性差異（P＞0.05）；在所有的時間點內(nèi)，試驗Ⅱ組的抗體效價最高，在28 d時達到了13.83 log2，42日齡試驗各組的抗體效價開始降低。

表4CHCP對肉雞血清ND-HI的測定nlog2

2.3 CHCP對肉雞血清補體C3、C4的影響 由表5可見，在肉雞日糧中添加CHCP與對照組相比，血清中補體C3、C4的含量均有提高，C3在14、28 d時，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組的含量分別較對照組提高 7.87%、12.24%、12.52%（P＜0.05） 和 8.30%、14.78%、15.00%（P ＜ 0.05），42 d各組之間沒有顯著性差異（P ＞ 0.05）；在 28、42 d 時，Ⅱ、Ⅲ組 C4的含量分別較對照組提高39.11%、38.69%（P＜0.05）和 35.64%、37.28%（P ＜ 0.05），Ⅰ組沒有顯著性差異 （P＞0.05），14 d時試驗各組與對照組差異不顯著（P＞0.05）。

表5 CHCP對肉雞血清補體C3、C4的測定 mg/L

3 討論

腸道微生態(tài)環(huán)境的穩(wěn)定是機體健康、預(yù)防疾病的重要因素，腸道微生態(tài)平衡對機體抵御外來致病因素起到屏障作用，對機體的保護、營養(yǎng)、消化吸收和免疫等方面發(fā)揮著重要作用。腸道正常菌群的失調(diào)，就會失去機體的健康和穩(wěn)定的運行（黃皓等，2018）。研究顯示，中草藥有效成分對腸道菌群和腸道黏膜屏障功能有一定的影響及保護作用（段智璇等，2016）。 趙娟等（2011）利用黃芪、黨參等十幾味中草藥制成中草藥復(fù)方顆粒劑，以2%的量添加在肉雞的日糧中，連續(xù)飼喂14 d，結(jié)果表明，該中草藥復(fù)方在促進腸道有益菌的生長，抑制有害菌的繁殖方面起到了很好的作用。李平蘭等（2003）研究中草藥對肉雞腸道主要微生物菌群影響的試驗結(jié)果表明，中草藥能顯著調(diào)節(jié)肉雞腸道的微生態(tài)平衡，有害腸桿菌的數(shù)量極顯著降低，有益菌（乳桿菌和雙歧桿菌）的數(shù)量顯著升高。魏炳棟等（2013）試驗表明，黃芪多糖在促進雞盲腸內(nèi)雙歧桿菌、乳酸桿菌的增殖和抑制大腸桿菌、沙門氏菌的生長方面具有明顯的效果。本試驗結(jié)果表明，在肉雞的日糧中添加不同劑量的中草藥復(fù)方多糖，雞盲腸內(nèi)有益菌（雙歧桿菌和乳酸桿菌）的含量顯著增加，有害菌（大腸桿菌和沙門氏菌）的數(shù)量極顯著降低，使肉雞腸道微生態(tài)保持平衡，這與上述文獻報道的結(jié)果相一致。說明CHCP對有益菌的增殖有一定的效果，在一定程度上改善了肉仔雞的腸道內(nèi)環(huán)境，但其作用機理還有待于進一步的研究。

雞新城疫免疫抗體水平可反映出雞特異性體液免疫的情況，與血液中抗體水平關(guān)系密切，在一定范圍內(nèi)機體的抗體水平越高，其免疫能力就越強，禽群健康得到保障，利于雞的生長。郝桂英等（2013）研究表明，以0.5 mg/只量的黃芪多糖注射雞后，對雞新城疫免疫效果有明顯的促進作用，與對照組差異顯著。楊紅洋等（2017）利用中草藥復(fù)方多糖（當歸、黨參等 11味中草藥組成）對新城疫疫苗免疫后的雞進行不同劑量注射，檢測不同日齡雞新城疫抗體。結(jié)果顯示，各試驗組雞新城疫抗體含量均顯著提高 （P＜0.05）；其免疫效果為中劑量組＞高劑量組＞低劑量組。靳錄洋等（2009）用補益類組成提取的中草藥復(fù)方多糖與黃芪多糖（APS）、當歸多糖（ASP）、淫羊藿多糖（EPS）在增強機體免疫功能方面進行了對比試驗，結(jié)果表明，各試驗組外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率和ND-HI抗體效價明顯升高，以CHCP組的效果最好。本試驗結(jié)果表明，在所有的時間點內(nèi)，試驗各組雞血清中的ND抗體效價圴有不同程度的增加，28 d達到高峰，42日齡試驗各組的抗體效價開始降低，中劑量CHCP組的抗體效價最高，在28 d時達到了13.83 log2。試驗結(jié)果提示了CHCP能顯著（P＜0.05）或極顯著（P＜0.01）提高肉雞血清新城疫抗體效價，增強肉雞的免疫力。尤其是在肉雞生產(chǎn)上使用該免疫增強劑，可減少雞新城疫的免疫次數(shù)，避免因注射疫苗時引起雞的應(yīng)激反應(yīng)，更利于雞的生長。

補體是特異性免疫的主要組成成分，可協(xié)助抗體和吞噬細胞殺滅病原微生物和加強細胞免疫功能，是體內(nèi)重要的免疫效應(yīng)和免疫效應(yīng)放大系統(tǒng)，參與機體抗微生物防御反應(yīng)以及免疫調(diào)節(jié)，發(fā)揮機體特異性和非特異性的抗感染作用。其中C3、C4為補體系統(tǒng)的固有成分，在體液免疫中發(fā)揮重要作用。天然中草藥具有調(diào)節(jié)增強補體功能作用。雷紅等（2007）研究表明，8種中草藥方劑按1.5%的量分別添加在雛雞飼料中，在7、14、21、28 日齡 ，第 1、3 組 C3的水平較高；第 6、2、4組的 C4水平較高，說明中草藥方劑具有促進補體C3、C4形成的作用。李杰（2011）試驗證明，以1%量的酒蒸女貞子原粉添加在日糧中可使肉雞生長前期的血清補體C3、C4含量提高（P＜0.05）。黃志堅等（2007）選用絞股藍、茵陳、甘草、板藍根等藥用植物提取其有效生物活性物質(zhì)，按不同的比例組合并精制成飼料添加劑添加到斷奶仔豬飼糧中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加中草藥的試驗組與添加抗生素的對照組相比較，補體C3、C4含量分別提高 40%（P＜0.05）。肖嘯等（2009）利用黃芪多糖注射液給犬注射后，可明顯提高血清補體C3、C4的含量，以0.5 mL/kg的量注射效果最好。李清豐等（2018）研究表明，利用中草藥“激飲康”飲水后，可提高肉兔血清C3、C4的含量，增強肉兔熱應(yīng)激狀態(tài)下的免疫能力。本試驗結(jié)果表明，在肉雞日糧中添加CHCP，血清中補體C3、C4的含量均有提高，C3在14、28日齡時試驗各組的含量與對照組差異顯著（P＜0.05）；在 28、42日齡時，中、高劑量組C4的含量提高較為明顯。

4 結(jié)論

日糧中添加CHCP可促進有益菌的增殖，在一定程度上改善肉仔雞的腸道內(nèi)環(huán)境，另外，可顯著提高雞血清新城疫抗體效價，增強雞的免疫功能，且日糧中添加400 mg/kg和600 mg/kg CHCP效果最佳，從經(jīng)濟角度考慮，以400 mg/kg的量添加CHCP為最佳添加量。