唐成芳，左艷萍，曾輝，周芳，楊黎燕，馬新?lián)P，朱勇

作者單位：西安醫(yī)學(xué)院,a口腔醫(yī)學(xué)院,b藥學(xué)院，陜西 西安 710021

牙本質(zhì)過(guò)敏癥(Dentin hypersensitivity，DH)是指牙齒在受到外界刺激，如溫度冷熱、化學(xué)物質(zhì)酸甜以及機(jī)械作用摩擦或咬硬物等所引起的一種異常酸痛癥狀，是中老年甚至青少年的口腔多發(fā)常見(jiàn)癥，具有發(fā)作迅速、疼痛尖銳、時(shí)間短的特點(diǎn)，是困擾醫(yī)患雙方的非齲難題[1-3]。牙本質(zhì)過(guò)敏癥的發(fā)生主要與牙本質(zhì)暴露、牙本質(zhì)小管呈開(kāi)放狀態(tài)有關(guān)，鏡下觀察表明牙本質(zhì)敏感程度取決于牙本質(zhì)小管的數(shù)量、開(kāi)放比例以及小管開(kāi)放程度[4-5]。因而，封閉牙本質(zhì)小管被認(rèn)為是減小牙本質(zhì)通透率，緩解牙本質(zhì)敏感的重要措施[1,3,6]。

松香為松科植物馬尾松、油松或同屬種植物的樹脂除去揮發(fā)油后，所留存的成分為松香酸酐、游離松香酸及少量槲皮素、α-及β-蒎烯等樹脂烴、揮發(fā)油的固體樹脂[7-8]。自古記載，松香具有祛風(fēng)燥濕，排膿拔毒，生肌止痛及治風(fēng)蟲牙痛等功效[8]。據(jù)此推測(cè),松香具有封閉牙本質(zhì)小管和抗炎鎮(zhèn)痛的潛能，可能為DH的防治提供簡(jiǎn)便易得的方法或措施。松香在抗病毒、抗腫瘤等方面已被證實(shí)有確切療效[8,9-10]，以松香為基質(zhì)含氟防齲涂料也被應(yīng)用到DH，然單獨(dú)應(yīng)用松香防治DH的效果還不明確，也尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)自2017年1—12月觀察不同濃度松香乙醇液口腔局部涂刷應(yīng)用對(duì)牙本質(zhì)小管封堵形貌，并測(cè)量樹脂突的深度以及牙本質(zhì)小管口開(kāi)放面積，為松香防治DH提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以期為臨床DH防治提供簡(jiǎn)便可行的方式。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備松香,無(wú)水乙醇，37%磷酸凝膠(DenFilTM，韓國(guó))，柯伯脂氟保護(hù)漆(PULDENT，美國(guó)Puldent公司,美國(guó))，源于20～30歲病人拔除的第三磨牙(收集于西安交通大學(xué)口腔醫(yī)院)，慢速切割機(jī)(UNIPOL-830，科晶有限公司，沈陽(yáng))，場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡(FESEM S-4800，Hitachi，日本)，分析天平(塞多利斯,塞多利斯斯泰帝公司，德國(guó))。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1樣本制備及溶液制備 取新近拔除完整無(wú)隱裂、齲壞等病變的第三磨牙40顆，按照文獻(xiàn)描述方法制備牙本質(zhì)塊80個(gè)[12]。此外，室溫下以無(wú)水乙醇為溶劑配制10%，20%，30%，40%，50%及60%的松香乙醇溶液，避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2分組及處理 將80個(gè)試件隨機(jī)分到無(wú)水乙醇，氟保護(hù)漆，10%，20%,30%,40%,50%及60%松香組等8個(gè)組，每組10個(gè)。各組試件超聲清洗干凈，試件咬合面用37%磷酸凝膠酸蝕30 s,蒸餾水沖洗3次，第次10 s,氣槍輕吹去除多余水分后，分別用無(wú)水乙醇、氟保護(hù)漆，10%，20%,30%,40%,50% 及60%松香乙醇溶液均勻涂刷2次，每次10 s,自然干燥。

1.3 指標(biāo)觀察與測(cè)定

1.3.1表面及剖面形貌觀察 沿制備的引導(dǎo)凹槽將各牙本質(zhì)標(biāo)本一剖為二，噴金，用FE-SEM觀察牙本質(zhì)表面牙本質(zhì)小管口封堵情況,以及剖面松香滲入牙本質(zhì)小管的狀況；每個(gè)試樣表面和剖面分別采集3組圖像，以便圖像分析。

1.3.2牙本質(zhì)小管開(kāi)口面積百分比及小管樹脂突滲入深度測(cè)定 按照文獻(xiàn)的描述方法[11]應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0 圖像分析軟件測(cè)量試樣表面的牙本質(zhì)小管開(kāi)口面積(area of dentin tubular openings，ADTO)和剖面的樹脂突長(zhǎng)度(length of resin tag,LRT)，并計(jì)算牙本質(zhì)小管開(kāi)口相對(duì)面積(percentage area of dentin tubular openings，PADTO)。

2 結(jié)果

2.1 表面及剖面形貌乙醇組牙本質(zhì)表面見(jiàn)牙本質(zhì)小管完全開(kāi)放，呈圓形或類圓形，剖面牙本質(zhì)小管清晰可見(jiàn)，管壁光滑，管口處管壁疏松多孔；氟保護(hù)漆組表面牙本質(zhì)小管口完全封閉，牙本質(zhì)表面基本被膜狀物覆蓋；剖面見(jiàn)管壁內(nèi)被覆厚薄不一的膜狀物，但未形成明顯的樹脂突。

松香乙醇組依據(jù)濃度不同牙本質(zhì)小管呈不同程度封閉，剖面可見(jiàn)樹脂突形成。10%松香乙醇組觀察到小管口明顯的變小，少數(shù)完全封閉但仍隱約可見(jiàn)小管的輪廓，剖面見(jiàn)自管口向下約10～70 μm長(zhǎng)度的管壁被覆致密膜狀物；20%松香乙醇組牙本質(zhì)小管大部分被封閉且被封閉的管口處較牙本質(zhì)其余部分略凹陷，少數(shù)管口變小，剖面致密膜狀物較10%組長(zhǎng)，少量樹脂突形成；30%松香乙醇組表面牙本質(zhì)小管完全封閉，小管輪廓隱約可見(jiàn)，樹脂突明顯增多；40%～60%松香乙醇涂膜組牙本質(zhì)被覆致密膜狀物，牙本質(zhì)小管輪廓不清，剖面見(jiàn)牙本質(zhì)小管內(nèi)充滿15～60 μm的樹脂突，管壁的裸露膠原被樹脂包裹。見(jiàn)圖1，2。

2.2 ADTO、PADTO、LRT結(jié)果ADTO、PADTO、LRT資料及數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。整體比較(單因素方差分析)知：各指標(biāo)整體均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。多重比較并結(jié)合主要數(shù)據(jù)分析：ADTO乙醇組最大，顯著高于氟保護(hù)漆組，兩組間ADTO、PADTO差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。松香乙醇10%至30%組，ADTO、PADTO隨濃度增加呈減少趨勢(shì)，至30%組及以上牙本質(zhì)小管完全封閉。10%組松香乙醇組ADTO、PADTO顯著低于乙醇溶劑組，高于氟保護(hù)漆組(P<0.05)；30%～60%松香組牙本質(zhì)小管口完全封閉，與氟保護(hù)漆組相當(dāng)(P>0.05)；20%松香乙醇組ADTO、PADTO低于10%組且高于30%松香乙醇組，但與兩者均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

乙醇組、氟涂膜10%松香乙醇組無(wú)明顯樹脂突。20%～50%松香乙醇組LRT逐漸增加，且組間兩兩比較均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，50%松香乙醇組LRT略高于到60%松香乙醇組，但兩組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 各組牙本質(zhì)小管開(kāi)口面積、開(kāi)口相對(duì)面積及樹脂突長(zhǎng)度

3 討論

作為口腔常見(jiàn)多發(fā)癥的DH發(fā)病機(jī)制還不十分明確，目前普遍接受的學(xué)說(shuō)是液體流動(dòng)學(xué)說(shuō)，當(dāng)暴露的牙本質(zhì)受到外界溫度機(jī)械等刺激時(shí)引起牙本質(zhì) 小管內(nèi)的液體異常流動(dòng)，從而將外界的刺激傳遞至牙髓內(nèi)神經(jīng)纖維進(jìn)而產(chǎn)生一過(guò)性的尖銳疼痛[1-2]?；谠搶W(xué)說(shuō)，認(rèn)為可采用抑制牙髓神經(jīng)或牙本質(zhì)神經(jīng)纖維，提高閾值來(lái)降低敏感性或機(jī)械的封閉/減小開(kāi)放的牙本質(zhì)小管來(lái)降低牙本質(zhì)通透性并阻止小管液的流動(dòng)的方式防治DH[1,12]。目前氟化物誘導(dǎo)礦化法、磷酸鈣/草酸鈣等鈣鹽局部沉積、粘結(jié)覆蓋法，激光熔融等封閉牙本質(zhì)小管[12-13]。蜂膠、地骨皮等也被用于牙本質(zhì)過(guò)敏癥的治療，結(jié)果均表明蜂膠、地骨皮等對(duì)牙本質(zhì)過(guò)敏具有較好的治療效果[14-15]。本實(shí)驗(yàn)探討了松樹分泌的天然樹脂—松香單獨(dú)用于開(kāi)放牙本質(zhì)小管的封閉效果觀察，并對(duì)比了不同濃度松膠溶液的封閉效果。

切割牙本質(zhì)會(huì)在牙本質(zhì)表面形成一層由牙本質(zhì)碎屑等組成的玷污層從而封堵牙本質(zhì)小管，研究表明磷酸酸蝕可去除牙本質(zhì)表面形成的玷污層[16]，因而本實(shí)驗(yàn)結(jié)合前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用了37%磷酸凝膠酸蝕30 s去除玷污層并使牙本質(zhì)小管完全開(kāi)放作為因酸致牙本質(zhì)敏感的體外模型。氟保護(hù)漆是以樹脂為基質(zhì)的含氟緩釋劑，能在口腔內(nèi)快速成膜，對(duì)牙體組織具有良好保護(hù)作用，并在局部緩慢釋放氟與牙本質(zhì)中大量存在的鈣離子產(chǎn)生氟化鈣晶體，形成被用于防齲和牙本質(zhì)過(guò)敏防治[14，17]。柯伯脂氟保護(hù)漆是從熱帶樹木分泌的柯伯樹脂為基質(zhì)生產(chǎn)的氟保護(hù)漆，因松香與柯伯脂皆為天然樹脂，故本實(shí)驗(yàn)選柯伯脂氟保護(hù)漆作為對(duì)照分析松香對(duì)暴露牙本質(zhì)的封閉效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：各組松香均與氟保護(hù)漆一樣能在暴露牙本質(zhì)上快速形成涂膜，并減小/封閉暴露的牙本質(zhì)小管；此外，30%濃度以上的松香還可在牙本質(zhì)管腔形成明顯的樹脂突，與乙醇溶液對(duì)照組和氟保護(hù)漆組有顯著差異(P<0.05)，結(jié)果表明松香能在牙本質(zhì)表面形成涂膜和小管內(nèi)樹脂突，具備優(yōu)于氟保護(hù)漆的即刻封閉效果。

本實(shí)驗(yàn)松香封閉牙本質(zhì)的功效，可能與天然樹脂——松香及乙醇溶劑的特性有關(guān)。(1)松香是從松樹生物分泌的“固態(tài)液體”去除揮發(fā)油后的以樹脂酸為主并含少量脂肪酸、萜類的固形成分[7-8,18]。松香具有可溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑，遇熱融化，不溶于水的特點(diǎn)；溶劑無(wú)水乙醇無(wú)毒，具有較好的滲透性和揮發(fā)性，因而涂布于牙本質(zhì)表面的具有良好流動(dòng)性的松香乙醇溶液可快速滲透入小管和牙本質(zhì)表面，包裹脫礦的膠原纖維，并在牙本質(zhì)表面形成一層保護(hù)層并可在牙本質(zhì)小管內(nèi)形成粗大樹脂突，從而封閉牙本質(zhì)小管。其作用原理與由雙酚甲基丙烯酸縮水甘油酯二甲基丙烯酸三甘醇酯，光引發(fā)劑和溶劑乙醇組成的低黏度樹脂被用于齲病和封閉牙本質(zhì)小管相似，其借助高滲透性及流動(dòng)性滲入到病損微孔或牙本質(zhì)小管內(nèi)，進(jìn)而堵塞和充填微孔或牙本質(zhì)小管，在齲損內(nèi)或牙本質(zhì)表面形成屏障，發(fā)揮功效[19]。(2)據(jù)《本草綱目》松脂性味苦、甘、溫、無(wú)毒，主治癰疽惡瘡，頭瘍白禿，排膿拔毒，生肌止痛，塞牙孔、殺蟲的功效。風(fēng)蟲牙痛，刮松上脂，滾水泡化，一漱即止。古方提示，松膠軟化后漱口具有治療齲齒或牙疼、抗病毒、抗癌及皮膚病等功效。松香用于抗癌，牙周塞治，抗病毒等與其具有提高免疫，收濕斂瘡、去腐生肌的作用有關(guān)[8,9-10]。本法采用乙醇作為溶劑使松香呈流動(dòng)的液態(tài)獲得封閉牙本質(zhì)小管的效果與古法開(kāi)水泡化松香治療風(fēng)熱牙疼可能都與液態(tài)松脂溶液滲入暴露牙本質(zhì)封閉了齲洞或開(kāi)放的牙本質(zhì)小管有關(guān)。此外，據(jù)《本草綱目》，松脂/松香可能還具有抑制/殺滅致齲菌或鎮(zhèn)靜牙髓神經(jīng)的作用，但其科學(xué)功效及機(jī)理需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

本實(shí)驗(yàn)表面形貌還提示松香濃度越高，其封閉牙本質(zhì)的小管的效果越強(qiáng)?？赡茉?yàn)樗赡z乙醇溶液的濃度越低，流動(dòng)性和滲透性越強(qiáng)，更易順著空隙滲入膠原纖維和牙本質(zhì)小管，單位體積低濃度松膠溶液中溶劑揮發(fā)后被覆于牙本質(zhì)表面和管腔內(nèi)的固形成分較少，因而僅縮小了牙本質(zhì)開(kāi)口的管徑或封閉后仍可見(jiàn)小管輪廓；反之，松膠乙醇溶液濃度越高，流動(dòng)性則相對(duì)較弱，則能在牙本質(zhì)表面形成致密膜狀物和樹脂突。FE-SEM剖面形貌也證實(shí)了上述觀點(diǎn)，在10%及20%低濃度松香組剖面僅見(jiàn)小管內(nèi)壁覆蓋致密膜狀物，30%及40%松膠組剖面管腔內(nèi)則可見(jiàn)樹脂突形成，且40%組樹脂突相對(duì)粗大。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)中的TADTO，PADTO及LRT結(jié)果，認(rèn)為50%松膠組效果較佳，其既能完全封閉牙本質(zhì)小管，又能形成粗大樹脂突，且樹脂突長(zhǎng)度可達(dá)40 μm。

本實(shí)驗(yàn)證實(shí)松膠乙醇溶液局部涂布可在牙本質(zhì)表面形成保護(hù)膜和小管內(nèi)樹脂突，封閉開(kāi)放的牙本質(zhì)小管，且50%松膠溶液即可達(dá)到較好即刻封堵效果。然而其能否經(jīng)受刷牙等磨損及長(zhǎng)期封堵效果還有待進(jìn)一步研究。

(本文圖1，2見(jiàn)插圖7-4)