陳 靜 ，何廣霞，麻勝紅，路美蘭，曾智勇＊，梁海英，張愛瓊，何小莉，咸 文，陳 娟，吳好葉

（貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

豬流行性腹瀉（Porcine Epidemic Diarrhea，簡稱PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的，一種以患病豬食欲下降、嘔吐及嚴(yán)重腹瀉等為主要臨床特征的急性、接觸性腸道傳染性疾病[1]。該病在寒冷季節(jié)多發(fā), 特別是冬春交替時節(jié)。PEDV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，豬舍的環(huán)境溫度會對豬體內(nèi)病毒的繁殖產(chǎn)生影響，在8～12℃比30～35℃的環(huán)境中所產(chǎn)生的毒力效價高, 這可能是本病在寒冷季節(jié)流行的一個重要因素[2]。PEDV僅發(fā)生于豬, 且不同年齡階段的豬只均易感本病。癥狀的輕重隨病豬年齡的大小而有差異, 年齡越小, 則其癥狀越重。感染發(fā)病的潛伏期各豬群不同，一般新生仔豬在24～36 h，育肥豬為48 h以上[3]。病豬是本病傳播的主要傳染源，主要感染途徑為消化道，臨床癥狀和病理變化與豬傳染性胃腸炎極為相似。仔豬感染PEDV后，病豬的體溫正?；蛏云?精神不振,常出現(xiàn)脫水、嘔吐和水樣腹瀉，患病豬體重下降，皮膚因脫水而干燥，被毛粗亂無光澤，繼而發(fā)病豬食欲下降，嚴(yán)重脫水等臨床癥狀[4]。本病發(fā)病急且死亡率高，主要破壞豬小腸上皮細(xì)胞，從而引起腸絨毛脫落，感染病豬多以仔豬為主，極易造成新生仔豬迅速脫水死亡。該病毒于1980年在我國分離出，近來該病已演化為世界流行趨勢且已成為全球性危害。目前，PED已經(jīng)成為導(dǎo)致世界多個養(yǎng)豬國家仔豬早期死亡的疫病之一,對世界養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成較大的經(jīng)濟(jì)損失[5]。

2018年1月，銅仁萬山某豬場部分仔豬出現(xiàn)嘔吐、消瘦及腹瀉等臨床癥狀，其中仔豬出現(xiàn)腹瀉的癥狀尤為嚴(yán)重，最終病仔豬脫水死亡。這給豬場帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，為查明仔豬腹瀉死亡原因，該豬場特將5頭病死仔豬、3份母豬糞樣和1份發(fā)病仔豬腸內(nèi)容物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室送檢。現(xiàn)將檢測過程報告如下：

1 臨床及發(fā)病特征

據(jù)現(xiàn)場人員描述，該豬場患病仔豬被毛凌亂，精神狀態(tài)不佳, 進(jìn)食量顯著降低。體溫較為正常、有時稍高。同時出現(xiàn)嘔吐、水樣腹瀉或是嘔吐與腹瀉并存等臨床癥狀，排泄淡黃色惡臭稀糞。病豬發(fā)病急、病程短，部分新生仔豬在出生3 d左右因腹瀉脫水而死亡。

2 病理解剖特征

對送檢病死仔豬進(jìn)行剖檢（見圖1），可見病豬胃內(nèi)空虛無食物，內(nèi)有黃色液體，胃底黏膜有輕度充血。剖檢病豬的主要病變位置在小腸，腸擴(kuò)張，小腸腸系膜充血。內(nèi)容物稀薄如水，呈黃色且伴有泡沫。腸壁充血變薄，腸系膜充血且淋巴結(jié)出現(xiàn)水腫現(xiàn)象，小腸絨毛縮短。

3 實(shí)驗(yàn)室檢測

取適量的脾、腎、淋巴結(jié)等組織進(jìn)行混合；取送檢病死豬腸內(nèi)容物與送檢3份仔豬腸內(nèi)容物混合；取3份母豬糞樣混合，使用MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0核酸提取試劑盒，分別提取混合組織/腸內(nèi)容物核酸/糞樣的RNA/DNA，應(yīng)用一步法RT-PCR/PCR試劑盒，根據(jù)相關(guān)送檢要求對混合組織核酸進(jìn)行豬藍(lán)耳病病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）和豬偽狂犬病毒（PRV）檢測；對仔豬混合腸內(nèi)容物和母豬糞樣進(jìn)行豬流行性腹瀉病毒（PEDV）檢測。其中PEDV反應(yīng)總體系（25.0 μL）：2×One step buffer 12.5 μL，10 μM PCV3 primer（F1/R1）各0.5 μL，核酸DNA模板4.5 μL，ddH2O 6.0 μL，一步法酶1.0 μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)椋?0 ℃ 40 min；94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，共37個循環(huán)；72 ℃ 進(jìn)行終延伸10 min。

RT-PCR/PCR 結(jié)束后，取 7 μL的PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠（1.5%）電泳檢測，結(jié)果顯示，病死仔豬混合組織中CSFV、PRRSV和PRV均呈陰性；混合糞樣和腸內(nèi)容物中PEDV均呈陽性（見圖2）。

4 討論

根據(jù)病原檢測結(jié)果表明，送檢病死仔豬及母豬糞樣中均存在PEDV，說明該豬場中母豬和仔豬均有感染PEDV的情況。PED是豬養(yǎng)殖過程中十分常見的病毒性疾病之一，可引起豬的急性傳染性腸道疾病，常發(fā)生于幼齡仔豬，病仔豬出現(xiàn)精神萎靡、食欲減退等現(xiàn)象，長期持續(xù)性腹瀉表現(xiàn)為明顯消瘦、被毛粗亂，嚴(yán)重腹瀉仔豬排水樣稀糞，常因脫水而死。該病季節(jié)性非常強(qiáng)，春冬多發(fā)，不同種類及不同日齡的豬均可感染，死亡率可高達(dá)100%[6]。對于該病，應(yīng)當(dāng)及時采取有效地防治措施。

4.1 遵循預(yù)防為主，防大于治的原則

圖1 病死仔豬內(nèi)臟

圖2 病原RT-PCR/PCR產(chǎn)物凝膠電泳檢測結(jié)果

對于PED，目前沒有針對該病的特效治療藥物，故豬場應(yīng)以預(yù)防為主。種豬帶毒散毒是引起新生仔豬感染的主要途徑。首先，發(fā)生疫情時, 疫苗免疫是預(yù)防豬傳染病的有效方式，制定合理的疫苗免疫方案進(jìn)行疫苗免疫接種，重點(diǎn)加強(qiáng)母豬的PED疫苗免疫。對全場生豬進(jìn)行緊急免疫，可有效降低豬群發(fā)病率和病死率，這也是亞洲國家PED防疫控制的主要方式之一[7]。其次，加強(qiáng)場地和環(huán)境消毒。在冬、春多發(fā)季節(jié)，應(yīng)保證豬舍干燥、整潔，做到保暖防寒，同時做好母豬進(jìn)入產(chǎn)房前的糞便排毒情況檢測以及進(jìn)入產(chǎn)房時針對母豬的清潔消毒，采取綜合性防治措施，重視免疫預(yù)防，加強(qiáng)對豬只的飼養(yǎng)管理[8]。

4.2 患病后及時采取治療措施

若PED在豬場已發(fā)生，則建議豬場飼養(yǎng)管理人員立即停止飼喂飼料，液體類飼料可能會加劇生豬的腹瀉，因此尤其注意液體類飼料的飼喂；針對已感染的病豬要及時為其提供干凈的飲水和易消化的飼料，盡可能的控制對病豬飼料的投喂量，及時對健康豬與病豬進(jìn)行隔離；對病死豬、糞尿排泄物及污染物做無害化處理，可有效控制本病的傳播?？刹扇ΠY治療措施：病初，可對患病仔豬采用口服補(bǔ)液鹽，以糾正病仔豬體內(nèi)的酸堿平衡。必要時可適當(dāng)添加土霉素堿或諾氟沙星或阿莫西林進(jìn)行灌服，每天4～5次；肥豬群和母豬可采用青鏈霉素加安痛定肌注，脫水嚴(yán)重的掛水補(bǔ)液；對于公、母豬可緊急免疫2頭份瑞普生物“維樂復(fù)康”[9]；在調(diào)理腸道菌群的同時，保持欄舍干燥，全進(jìn)全出，做好消毒工作。