李才武，李果，王一，胡正泉，成彥曦，王群，何鳴，周宇，曾文，周繼秋，瞿祖鳳，張志忠，4*，楊光友，謝約

(1. 中國(guó)大熊貓保護(hù)研究中心，四川都江堰611830； 2. 大熊貓國(guó)家公園珍稀動(dòng)物保護(hù)生物學(xué)國(guó)家林業(yè)和草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川都江堰611830； 3. 沈陽(yáng)森林動(dòng)物園管理有限公司，沈陽(yáng)110000；4. 國(guó)家林業(yè)和草原局野生動(dòng)植物保護(hù)司，北京100714； 5. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，成都611130)

大熊貓Ailuropodamelanoleuca是中國(guó)特有珍稀瀕危動(dòng)物，是全球最具觀賞價(jià)值和科學(xué)研究?jī)r(jià)值的動(dòng)物之一。盡管中國(guó)大熊貓遷地保護(hù)已取得了可喜成績(jī)，圈養(yǎng)種群數(shù)量持續(xù)增加，但疾病依然嚴(yán)重威脅其種群安全(鐘志軍等，2014)。在各類疾病中，寄生蟲(chóng)病占有極其重要的位置(張華等，2010)。西氏貝蛔蟲(chóng)Baylisascarisschroederi是圈養(yǎng)大熊貓?bào)w內(nèi)寄生蟲(chóng)病中感染率最高的(賴從龍等，1993；Wangetal.，2018)，野生個(gè)體感染率幾乎達(dá)100%(葉志勇，1989；馮文和，張安居，1991；Pengetal.，2017)?；紫x(chóng)通過(guò)掠奪宿主的營(yíng)養(yǎng)以及大量蟲(chóng)體寄生引起胃腸道阻塞并可進(jìn)入膽管、肝管及胰管等對(duì)宿主產(chǎn)生機(jī)械性損害?；紫x(chóng)病對(duì)大熊貓健康影響嚴(yán)重，嚴(yán)重感染時(shí)可致死(楊光友，1998；李德生等，2014)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，由蛔蟲(chóng)病引起的大熊貓直接、間接死亡率高達(dá)66.67%(張華等，2010)。在圈養(yǎng)大熊貓蛔蟲(chóng)的防治中，伊維菌素和雙羥萘酸噻嘧啶等是常用的驅(qū)蟲(chóng)藥物(李德生等，2015)。西氏貝蛔蟲(chóng)產(chǎn)卵量大，蟲(chóng)卵在外環(huán)境中的生存能力強(qiáng)，大熊貓?jiān)谌︷B(yǎng)環(huán)境下重復(fù)感染率很高。雖然獸醫(yī)使用常用藥物每月驅(qū)蟲(chóng)，但大熊貓仍呈現(xiàn)蛔蟲(chóng)反復(fù)感染的現(xiàn)象，驅(qū)蟲(chóng)藥物有待進(jìn)一步優(yōu)化篩選。同時(shí)，長(zhǎng)期使用某種藥物導(dǎo)致蟲(chóng)體耐藥性增加，因此，對(duì)一些驅(qū)蟲(chóng)藥的驅(qū)蟲(chóng)效果進(jìn)行評(píng)價(jià)并篩選出高效的藥物及有效劑量對(duì)預(yù)防和治療圈養(yǎng)大熊貓蛔蟲(chóng)病具有重要意義。阿苯達(dá)唑和甲苯咪唑被廣泛應(yīng)用在人身上，安全性較高。目前在大熊貓感染蛔蟲(chóng)的臨床治療中，也選用阿苯達(dá)唑、芬苯達(dá)唑和甲苯咪唑3種藥物，但是缺乏對(duì)這3種藥物驅(qū)蟲(chóng)效果的有效評(píng)估。因此，本試驗(yàn)選用這3種苯并咪唑類藥物對(duì)圈養(yǎng)大熊貓進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)，并對(duì)驅(qū)蟲(chóng)效果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以期為圈養(yǎng)大熊貓西氏貝蛔蟲(chóng)病的防控提供新的策略。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)動(dòng)物為中國(guó)大熊貓保護(hù)研究中心臥龍神樹(shù)坪基地的圈養(yǎng)大熊貓。試驗(yàn)藥物包括阿苯達(dá)唑(片劑，批號(hào)：17020410，中美天津史克制藥有限公司)、芬苯達(dá)唑(膏劑，批號(hào)：16280356，Merck Animal Health)、甲苯咪唑(片劑，批號(hào)：160328505，西安楊森制藥有限公司)。主要試劑有飽和硫酸鎂溶液(440 g無(wú)水硫酸鎂溶解于1 000 mL水)。主要儀器有光學(xué)顯微鏡(日本奧林巴斯)和離心機(jī)(Werk Nruniversal)等。

1.2 試驗(yàn)方法

阿苯達(dá)唑按10 mg·kg-1體質(zhì)量，芬苯達(dá)唑按5 mg·kg-1、10 mg·kg-1體質(zhì)量，甲苯咪唑按10 mg·kg-1體質(zhì)量每天口服1次，連續(xù)服用 2 d。分別在驅(qū)蟲(chóng)前3 d和驅(qū)蟲(chóng)后的第10天、第20天用一次性自封袋收集大熊貓排出的新鮮糞便約200 g，逐一登記編號(hào)后帶回實(shí)驗(yàn)室，4 ℃保存待檢。采用飽和硫酸鎂離心漂浮法檢查蟲(chóng)卵。投藥后觀察供試大熊貓的采食、排糞、精神狀態(tài)及活動(dòng)情況等。在投藥前后觀察供試動(dòng)物糞樣中的排蟲(chóng)情況，并進(jìn)行記錄與統(tǒng)計(jì)。根據(jù)投藥后大熊貓的排蟲(chóng)情況及蟲(chóng)卵轉(zhuǎn)陰率判定驅(qū)蟲(chóng)效果。蟲(chóng)卵轉(zhuǎn)陰率(%)=(驅(qū)蟲(chóng)前蟲(chóng)卵陽(yáng)性糞樣數(shù)-驅(qū)蟲(chóng)后蟲(chóng)卵陽(yáng)性糞樣數(shù))/驅(qū)蟲(chóng)前蟲(chóng)卵陽(yáng)性糞樣數(shù)×100%。

2 結(jié)果

2.1 阿苯達(dá)唑片劑組

口服阿苯達(dá)唑后，13只供試大熊貓的采食、排糞、精神狀態(tài)及活動(dòng)情況等未見(jiàn)異常。

5只投藥前糞檢蛔蟲(chóng)卵為陽(yáng)性的大熊貓(冰華、發(fā)發(fā)、思嘉、蘇星、禧禧)在投藥后排出大量蛔蟲(chóng)(最高達(dá)89條)，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲(chóng)卵為陰性，蟲(chóng)卵轉(zhuǎn)陰率為100%。其余8只大熊貓?jiān)谕端幥凹S便中自然排出蛔蟲(chóng)幼蟲(chóng)(香琳、紫煙)或糞檢蛔蟲(chóng)卵為陰性者(傲傲、華虎、蒲蒲、森森、希望、香琳、鑫鑫、紫煙)在投藥后均排出了數(shù)量不等(1～50條)的蛔蟲(chóng)幼蟲(chóng)，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲(chóng)卵均為陰性(表1)。

2.2 芬苯達(dá)唑膏劑組

口服芬苯達(dá)唑后，10只供試大熊貓的采食、排糞、精神狀態(tài)及活動(dòng)情況等未見(jiàn)異常。

1只投藥前糞檢蛔蟲(chóng)卵為陽(yáng)性的大熊貓(正正)，按5 mg·kg-1體質(zhì)量口服，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲(chóng)卵仍為陽(yáng)性；而2只投藥前糞檢蛔蟲(chóng)卵為陽(yáng)性的大熊貓(華美、森森)按10 mg·kg-1體質(zhì)量口服，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲(chóng)卵為陰性，蟲(chóng)卵轉(zhuǎn)陰率為100%。其余7只大熊貓?jiān)谕端幥凹S便中自然排出蛔蟲(chóng)幼蟲(chóng)(森森、珍珍)或糞檢蛔蟲(chóng)卵為陰性者(冰華、回回、彤彤、優(yōu)優(yōu))在投藥后均排出了數(shù)量不等(1～13條)的幼蟲(chóng)，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲(chóng)卵均為陰性(表2)。

表1 阿苯達(dá)唑片劑對(duì)大熊貓蛔蟲(chóng)的驅(qū)蟲(chóng)效果Table 1 The deworming effect of albendazole tablets on Ailuropoda melanoleuca

表2 芬苯達(dá)唑膏劑對(duì)大熊貓蛔蟲(chóng)的驅(qū)蟲(chóng)效果Table 2 The deworming effect of fenbendazole ointments on Ailuropoda melanoleuca

2.3 甲苯咪唑片劑組

口服甲苯咪唑后，16只供試大熊貓的采食、排糞、精神狀態(tài)及活動(dòng)情況等未見(jiàn)異常。

這16只大熊貓?jiān)谕端幥凹S檢蛔蟲(chóng)卵為陰性者，在投藥后均排出了數(shù)量不等(1～171條)的幼蟲(chóng)，投藥后第10天、第20天糞檢蛔蟲(chóng)卵均為陰性(表3)。

3 討論

蛔蟲(chóng)病是大熊貓的一種常見(jiàn)寄生蟲(chóng)病，嚴(yán)重威脅著大熊貓的健康(葉志勇，1989；馮文和，張安居，1991；楊光友，1998；張華等，2010；李德生等，2014)。針對(duì)蛔蟲(chóng)病的藥物治療和驅(qū)蟲(chóng)已開(kāi)展了一些初步研究與篩選，葉志勇和張安居(1981)應(yīng)用驅(qū)蟲(chóng)凈、驅(qū)蛔靈、山道年酚酞及獸用敵百蟲(chóng)4種藥物對(duì)8只大熊貓進(jìn)行了驅(qū)蟲(chóng)試驗(yàn)，驅(qū)蟲(chóng)凈、驅(qū)蛔靈和獸用敵百蟲(chóng)效果較好，但研究未做定量分析。雙羥萘酸噻嘧啶和伊維菌素是廣譜、高效、低毒的腸道寄生蟲(chóng)驅(qū)蟲(chóng)藥物，普遍用于圈養(yǎng)大熊貓腸道驅(qū)蟲(chóng)(張均利，蔡蓉根，1987；李德生等，2014)。對(duì)馬蛔蟲(chóng)Parascarisequorum的驅(qū)蟲(chóng)效果研究表明，雙羥萘酸噻嘧啶的有效率為97.6%，而伊維菌素的驅(qū)蟲(chóng)效果差，僅為33.5%(Slocombeetal.，2007)。李德生等(2014)定量分析了2種藥物對(duì)大熊貓的驅(qū)蟲(chóng)效果，得到了類似的結(jié)果，雙羥萘酸噻嘧啶的蟲(chóng)卵轉(zhuǎn)陰率為80.00%，而伊維菌素的僅為44.44%，可能與伊維菌素的長(zhǎng)期使用導(dǎo)致了寄生蟲(chóng)的耐藥性有關(guān)(曹授俊等，2005)。阿苯達(dá)唑、芬苯達(dá)唑和甲苯咪唑是廣譜、高效、低毒的苯并咪唑類驅(qū)蟲(chóng)藥，廣泛應(yīng)用于人、家畜及野生動(dòng)物蠕蟲(chóng)病的防治(周忠勇等，1997；孫四平等，2008；楊美蘭等，2008；Lietal.，2012；唐耀，陳小麗，2018)，3種藥物在圈養(yǎng)大熊貓中已有零星使用(張銳，1991；劉維忠，楊光成，1994)，但對(duì)大熊貓蛔蟲(chóng)的驅(qū)蟲(chóng)效果還未做定量評(píng)估。本研究中，阿苯達(dá)唑?qū)Υ笮茇埢紫x(chóng)成蟲(chóng)和腸道幼蟲(chóng)均有顯著的驅(qū)除效果。芬苯達(dá)唑的驅(qū)蟲(chóng)效果需進(jìn)一步觀察。甲苯咪唑?qū)Υ笮茇埢紫x(chóng)4～5期幼蟲(chóng)有很好的驅(qū)除效果。

表3 甲苯咪唑片劑對(duì)大熊貓蛔蟲(chóng)的驅(qū)蟲(chóng)效果Table 3 The deworming effect of mebendazole tablets on Ailuropoda melanoleuca

蠕蟲(chóng)藥驅(qū)蟲(chóng)效果的判定可以用蟲(chóng)卵減少率和蟲(chóng)卵轉(zhuǎn)陰率2個(gè)指標(biāo)來(lái)判定。本實(shí)驗(yàn)未選用蟲(chóng)卵減少率這個(gè)指標(biāo)，主要是因?yàn)榭紤]大熊貓的生活習(xí)性。大熊貓99%的食物都是竹子，但是它們對(duì)竹類的消化利用率較低，食物在體內(nèi)停留的時(shí)間短，為了滿足能量需求而大量進(jìn)食，故而排糞量多(10～13 kg)，糞便中蟲(chóng)卵密度極低，因而對(duì)糞樣蟲(chóng)卵進(jìn)行糞便蟲(chóng)卵數(shù)計(jì)數(shù)的值極不準(zhǔn)確，容易造成人為取樣誤差。同時(shí)，大熊貓西氏貝蛔蟲(chóng)完成其生活史的時(shí)間在60 d 以上，圈養(yǎng)大熊貓常自然排出或嘔吐出未發(fā)育成熟的幼蟲(chóng)，初步評(píng)價(jià)藥物對(duì)幼蟲(chóng)的驅(qū)除效果也是很重要的。

一些藥物會(huì)引起大熊貓的不適，存在安全隱患，如服用驅(qū)蟲(chóng)凈、驅(qū)蛔靈后，大熊貓活動(dòng)減少，有腹部不適，表現(xiàn)側(cè)臥、仰睡、排稀便等，而服用獸用敵百蟲(chóng)后的反應(yīng)更加強(qiáng)烈，會(huì)出現(xiàn)腸蠕動(dòng)加快、口流清水、精神不振、爬臥或側(cè)臥、腹疼劇烈、呼吸和脈博加快等(葉志勇，張安居，1981)。本研究中的受試大熊貓?jiān)谖顾幒笪窗l(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，表明3種藥物在10 mg·kg-1體質(zhì)量連續(xù)口服2 d喂藥配置中的安全性較好，但因受試樣本數(shù)量有限，用藥安全性還有待進(jìn)一步觀察。同時(shí)由于個(gè)體差異，對(duì)藥物毒性的敏感性不同，用藥時(shí)還需小心謹(jǐn)慎、密切觀察，避免事故發(fā)生。

制定合理的驅(qū)蟲(chóng)計(jì)劃，對(duì)防治大熊貓蛔蟲(chóng)病、保障大熊貓的健康有重要意義。輪換用藥是防止大熊貓蛔蟲(chóng)產(chǎn)生抗藥性、保證驅(qū)蟲(chóng)效果的重要手段。本研究為阿苯達(dá)唑、芬苯達(dá)唑和甲苯咪唑3種藥物對(duì)大熊貓西氏貝蛔蟲(chóng)有效使用提供了重要參考。