肉牛屠宰過程中分離出沙門氏菌的脈沖場凝膠電泳分子溯源分析

董鵬程，張一敏，毛衍偉，梁榮蓉，韓廣星，朱立賢,*，羅 欣,*

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東 泰安 270000 ；2.國家肉牛牦牛產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系臨沂站，山東 臨沂 276000 ）

沙門氏菌是危害公共衛(wèi)生安全的常見食源性致病菌，據(jù)歐盟食品安全局統(tǒng)計(jì)，沙門氏菌病在2012—2016年間持續(xù)成為歐盟的第二大常見的人畜共患病致病菌，其發(fā)生與動(dòng)物性食品的攝入存在顯著的聯(lián)系[1-2]。在我國，沙門氏菌引發(fā)的食物中毒案例占細(xì)菌食物中毒的70%～80%，并且大多數(shù)來源于動(dòng)物性食品[3]。由于沙門氏菌可以在肉牛等反芻動(dòng)物腸道中無癥狀地?cái)y帶，因此帶菌動(dòng)物能夠輕易地通過宰前檢疫環(huán)節(jié)，成為散播污染的源頭[4]。肉牛屠宰加工涉及多道引發(fā)沙門氏菌擴(kuò)散的高危工序，如宰前禁食引發(fā)腸道抑菌能力的下降[5]、宰前糞便污染的擴(kuò)散、待宰圈內(nèi)動(dòng)物交叉污染、機(jī)械去皮、去內(nèi)臟過程中腸道的刺破、胴體清洗噴淋以及胴體與胴體、胴體與設(shè)備及操作人員的接觸[6-7]。如果處置不當(dāng)，這些工序極易造成沙門氏菌從源頭向內(nèi)部的擴(kuò)散，威脅最終的產(chǎn)品安全[8]。我國和歐盟均對(duì)肉制品沙門氏菌實(shí)行零容忍制度，歐盟規(guī)定去皮后、冷卻前牛胴體沙門氏菌陽性檢出率不得高于4%[9]。因此，對(duì)肉牛屠宰過程中不同工序中分離出的沙門氏菌進(jìn)行溯源分析，確定交叉污染的高危環(huán)節(jié)，并對(duì)關(guān)鍵環(huán)節(jié)設(shè)置干預(yù)措施，對(duì)于控制工廠內(nèi)部沙門氏菌的污染、保證肉品安全具有重要意義[10]。

由于沙門氏菌在屠宰企業(yè)內(nèi)部交叉污染高度的同源性及較低的流行率，傳統(tǒng)的流行病學(xué)調(diào)查、血清及噬菌體分型提供的信息不足以對(duì)工廠內(nèi)部交叉污染進(jìn)行有效溯源[11-13]；同時(shí)，由于指示菌和致病菌之間聯(lián)系的不確定性，以大腸菌群作為指示菌來評(píng)估工廠內(nèi)部沙門氏菌的流行及減菌效果仍存在爭議[9,14-15]。因此，在傳統(tǒng)流行病學(xué)調(diào)查的基礎(chǔ)上，應(yīng)用分子溯源技術(shù)對(duì)沙門氏菌進(jìn)行污染路徑的溯源，尋找致病菌交叉污染關(guān)鍵環(huán)節(jié)，是輔助肉牛屠宰企業(yè)進(jìn)行致病菌防控的重要手段。近年來，與分子生物學(xué)相結(jié)合的基因分型技術(shù)已經(jīng)在流行病學(xué)研究中被廣泛應(yīng)用，其具有更強(qiáng)的分辨能力，是對(duì)傳統(tǒng)方法的補(bǔ)充。相比于其他分子分型技術(shù)，脈沖場凝膠電泳（pulsed field gel electrophoresis，PFGE）作為分子分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”[16]，具有較好的重現(xiàn)性、與其他方法幾乎一致的區(qū)分性及更為清晰且易分析的條帶分布[13]，加之全球范圍內(nèi)完善的分型數(shù)據(jù)庫及標(biāo)準(zhǔn)化操作程序，使之成為屠宰企業(yè)致病菌溯源、獲取基礎(chǔ)流行數(shù)據(jù)的有效手段。由于我國肉牛較高的沙門氏菌帶菌率及相對(duì)落后的宰前管理[17]，工廠內(nèi)部干預(yù)措施和控制節(jié)點(diǎn)是遏制其進(jìn)入下游分銷領(lǐng)域的重要防線。本研究對(duì)屠宰線上6 個(gè)工序分離出的沙門氏菌使用PFGE法進(jìn)行溯源分析，試圖找到沙門氏菌在屠宰過程中交叉污染的關(guān)鍵工序，為肉牛屠宰企業(yè)設(shè)置關(guān)鍵減菌環(huán)節(jié)及規(guī)程提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 屠宰工藝及取樣點(diǎn)

圖1 肉牛屠宰工藝流程及采樣點(diǎn)設(shè)置Fig. 1 Flow chart for beef cattle slaughtering and setting of sampling points

屠宰工藝如圖1所示，動(dòng)物宰前禁食24 h、禁水12 h，在進(jìn)入屠宰間前使用溫水沖淋，然后在牛雙耳與雙眼十字交叉點(diǎn)用高壓氣槍將其擊暈，上軌吊掛后切斷氣管、食管、血管進(jìn)行宰殺，放血結(jié)束后進(jìn)行取樣點(diǎn)A（皮毛）的樣品采集，具體采樣方法參見Dong Pengcheng等的實(shí)驗(yàn)步驟[17]。采樣結(jié)束后使用液壓剝皮機(jī)進(jìn)行去皮操作，將牛尾從第一與第二尾椎間斷開，隨皮向外翻出，使被毛不與胴體表面接觸，逐步下翻直至皮毛脫離，對(duì)去皮后胴體進(jìn)行取樣點(diǎn)B（去皮后）的樣品采集。去除白臟后，在內(nèi)臟處理車間找到對(duì)應(yīng)號(hào)碼的牛的直腸，完成取樣點(diǎn)G（糞便）的樣品采集。去臟后的胴體經(jīng)過清水噴淋后進(jìn)入預(yù)冷間，在進(jìn)入預(yù)冷間前設(shè)置取樣點(diǎn)D（噴淋后）。預(yù)冷結(jié)束后進(jìn)行排酸，排酸24 h后進(jìn)入排酸庫，完成取樣點(diǎn)E（排酸后）的樣品采集。隨后進(jìn)行剔骨和分割，在分割生產(chǎn)線上完成取樣點(diǎn)F（分割肉）的樣品采集。

1.2 材料與試劑

用于PFGE分型的48 株沙門氏菌分離于山東3 個(gè)肉牛屠宰場（分別記為工廠X、Y、Z）的6 個(gè)不同屠宰工序中，所有菌株均通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)與生化鑒定，并進(jìn)行了血清分型與耐藥性實(shí)驗(yàn)[17]。分型菌株的血清型及在不同屠宰工序、不同肉牛屠宰企業(yè)的分布如表1所示。

表1 PFGE分型的48 株沙門氏菌的血清型、來源工廠及來源工序Table 1 Serotypes, source plants and source procedures of 48 Salmonella strains isolated for PFGE typing

沙門氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株H9812 深圳市疾病預(yù)防控制中心；一次性血瓊脂平板 北京陸橋技術(shù)股份有限公司；XbaI限制性內(nèi)切酶、蛋白酶K 寶生物工程（大連）有限公司；Tris-base、TBE緩沖液、N-十二烷?；“彼帷⑹榛蛩徕c、乙二胺四乙酸 美國Sigma公司；Seakem Gold PFGE級(jí)瓊脂糖 美國Bio-Rad公司。

1.3 儀器與設(shè)備

Chef Mapper脈沖場電泳儀、Gel Doc XR+凝膠成像系統(tǒng) 美國Bio-Rad公司；恒溫水浴搖床 德國Memmert公司；Milli-Q純水儀 美國Millipore公司；Vitek Colorimeter濁度計(jì) 法國BioMérieux公司。

1.4 方法

參照PulseNet沙門氏菌PFGE標(biāo)準(zhǔn)分型方法[18]進(jìn)行操作。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

通過Gel DOC XR+成像儀配套Image Lab軟件獲得“.scn”格式文件，將文件導(dǎo)出TIF格式后，使用BioNumerics軟件進(jìn)行識(shí)別，使用H9812菌株作為分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行條帶位置的確定及必要的手工校正，使用非加權(quán)配對(duì)算數(shù)平均法構(gòu)建聚類圖，采用Dice系數(shù)來衡量PFGE帶型之間的相似度。

2 結(jié)果與分析

部分PFGE結(jié)果如圖2所示，48 株不同血清型沙門氏菌經(jīng)過包埋、消化、酶切，最終電泳后均得到清晰的PFGE圖譜，所有菌株均被有效酶切，并產(chǎn)生11～18 條20～1 100 kb的條帶。在所有菌株中共找到22 種（記為PT1～PT22）不同的PFGE型（圖3）。標(biāo)準(zhǔn)菌株H9812酶切后所得到的電泳條帶清晰、完整，所得圖譜適合于進(jìn)一步的聚類分析。

圖2 部分沙門氏菌使用Xba I酶切后獲得的PFGE圖譜Fig. 2 PFGE profile of genomic DNA of Salmonella strains using Xba I digestion

圖3 48 株沙門氏菌的聚類圖譜Fig. 3 Cluster analysis dendrogram of 48 Salmonella strains

譜圖經(jīng)過帶型校正和標(biāo)記，使用BioNumerics軟件進(jìn)行聚類分析，采用Dice系數(shù)得到親緣關(guān)系樹狀圖譜。如圖3所示，所有菌株最高相似度為100.0%，最低相似度為48.0%，在77.5%的相似度上將48 菌株分為I～V 5 個(gè)大簇，每一簇與分離工廠具有較強(qiáng)的相關(guān)性。來源于X工廠的29 株沙門氏菌分布于II、V兩大簇，來源Y工廠3 株沙門氏菌位于第IV簇，來源于Z工廠的16 株沙門氏菌分布于I、III 2 個(gè)大簇。同一大簇內(nèi)菌株全部為單一工廠分離，不同工廠（地域）之間未發(fā)現(xiàn)高度相似的PFGE型。該結(jié)果可能與樣品來源有一定的關(guān)系，本次分型的株菌來源于3 個(gè)距離較遠(yuǎn)的屠宰企業(yè)（直線距離最近為300 km，最遠(yuǎn)為500 km），屠宰動(dòng)物主要以周邊農(nóng)戶飼養(yǎng)為主，沒有跨地區(qū)調(diào)運(yùn)的牛源，這些因素造成了一定的地理隔離，Zhou Zihao等[3]對(duì)生豬屠宰線的溯源結(jié)果也證實(shí)了同一工廠內(nèi)部分離出的沙門氏菌具有高度的同源性。當(dāng)食品樣品來源復(fù)雜、經(jīng)歷的儲(chǔ)運(yùn)環(huán)節(jié)變多時(shí)，交叉污染更容易產(chǎn)生。Ni Pei’en等[19]對(duì)上海零售農(nóng)產(chǎn)品檢測出的沙門氏菌進(jìn)行溯源，發(fā)現(xiàn)牛肉與雞肉分離出的沙門氏菌具有高度一致的基因型，且在不同時(shí)間、不同地域、不同種類農(nóng)產(chǎn)品中均分離出相似基因型的沙門氏菌，個(gè)別基因型追溯到了屠宰企業(yè)。

在93.0%的相似度下，所有菌株被分為14 個(gè)不同的亞簇（A～N），同一亞簇內(nèi)菌株圖譜使用肉眼較難區(qū)分。隨著相似度的提升，同一大簇具有根據(jù)血清型進(jìn)一步分化為不同亞簇的趨勢，如第I大簇分化為A～C 3 個(gè)亞簇，每個(gè)亞簇包含1（如B、C亞簇）或2 種（如A亞簇）血清型。提高相似度至95.7%，含有多種血清型的亞簇進(jìn)一步被分解為包含單一血清型的不同基因型（例如A亞簇分解為PT1～PT3 3 種基因型），與此同時(shí)，同種血清型的不同菌株也得到進(jìn)一步分化。該結(jié)果與Torpdahl等[13]的研究一致，該學(xué)者將來源于丹麥病人和動(dòng)物的110 株沙門氏菌進(jìn)行PFGE分型，發(fā)現(xiàn)PFGE技術(shù)能夠?qū)⒉煌逍偷纳抽T氏菌進(jìn)行有效區(qū)分，同時(shí)能在一定程度上將同種血清型的不同菌株進(jìn)行進(jìn)一步細(xì)分，提示PFGE型比血清型具有更強(qiáng)的分辨能力。

以95.7%的相似度對(duì)來源于胴體的5 株沙門氏菌進(jìn)行溯源分析，有3 株沙門氏菌（基因型PT8、PT11、PT13）追溯到了源頭。在基因型PT8中，分離于噴淋后10號(hào)牛胴體的134-X-D10-AGO菌與137-X-A10-AGO、053-X-A09-AGO、067-X-A14-AGO、071-X-G09-AGO、136-X-G06-AGO菌有著相同的血清型和96.3%的相似性，而后5 株菌分別來自相同或不同動(dòng)物的皮毛，由此推斷噴淋后胴體的沙門氏菌（134-X-D10-AGO）很有可能來源于自身的皮毛（137-X-A10-AGO），而由于宰前動(dòng)物之間的接觸，來源于10號(hào)牛皮毛的沙門氏菌很有可能來自9號(hào)牛（053-X-A09-AGO）、14號(hào)牛（067-X-A14-AGO）的交叉污染。進(jìn)一步向上進(jìn)行溯源，9號(hào)牛的糞便（071-X-G09-AGO）極有可能是污染的最初來源。該溯源結(jié)果證實(shí)了屠宰加工企業(yè)內(nèi)部存在糞便-皮毛-胴體的交叉污染途徑。國外眾多學(xué)者對(duì)沙門氏菌在屠宰過程中的分離情況進(jìn)行了調(diào)研，通過大量數(shù)據(jù)的歸納得出了皮毛、糞便是胴體最為重要的污染來源的推論[17,20]，本次溯源結(jié)果從基因水平上提供了上述推論的直接證據(jù)。類似的交叉污染路徑在基因型PT11（X工廠）、PT13（Z工廠）中也得到了驗(yàn)證。

除胴體污染外，分型結(jié)果顯示宰前動(dòng)物存在更為普遍和嚴(yán)重的糞便-皮毛、皮毛-皮毛的交叉污染模式。在基因型PT18中，來源于2、3、12、13號(hào)牛糞便的山夫登堡沙門氏菌和來源于11、12號(hào)牛皮毛的沙門氏菌具有96.0%的相似性；在基因型PT22中，來源于13號(hào)牛糞便的卡拉巴爾沙門氏菌和來源于2號(hào)牛皮毛的沙門氏菌具有相同的基因型，同樣的結(jié)果在Z工廠也得到了證實(shí)（基因型PT1、PT5）。這些結(jié)果說明宰前動(dòng)物存在嚴(yán)重的皮毛-糞便交叉污染。在基因型PT4中，分離于Z工廠的1、4、7號(hào)3 頭牛皮毛的4 株阿貢納沙門氏菌具有96.0%～100.0%的相似性；在基因型PT15中，同樣是分離于1、7號(hào)兩頭牛皮毛的2 株德爾卑沙門氏菌具有96.3%的相似性，說明沙門氏菌在宰前動(dòng)物中存在皮毛-皮毛的交叉污染模式。

相對(duì)于血清分型，本研究證實(shí)PFGE能夠提供更高的分辨率，進(jìn)而提供更為準(zhǔn)確的追溯結(jié)果：雖然來自X工廠14號(hào)牛皮毛的兩株沙門氏菌065-X-A14-AGO與069-X-A14-AGO來源及血清型均相同，但是其P F G E相似度僅為87.0%，且通過目視分析其圖譜差異較大，說明14號(hào)牛皮毛存在多種基因型沙門氏菌的交叉污染。同樣，基因型PT4和基因型PT13的相似度僅為50.9%，因此同工廠、同動(dòng)物、同血清的來源于基因型PT4的012-Z-A07-AGO與來源于基因型PT13的017-Z-A07-AGO具有較大差異。該分型結(jié)果證實(shí)了Z工廠7號(hào)牛皮毛中存在多種PFGE基因型沙門氏菌，而引發(fā)該廠胴體污染的沙門氏菌620-Z-B08-AGO與基因型PT13的017-Z-A07-AGO具有較高相似性，而非與基因型PT4的其他4 株菌相似，進(jìn)而排除了其來自于1號(hào)與4號(hào)牛皮毛的可能。雖然PEGE比噬菌體分型、多位點(diǎn)序列分型、多位點(diǎn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)序列分析有更強(qiáng)的分辨效果，并在零售食品中的溯源得到了廣泛的應(yīng)用[19,21-22]，然而鮮見采用PEGE法在屠宰廠內(nèi)部對(duì)不同工序分離出的沙門氏菌進(jìn)行溯源。Loiko等[8]對(duì)分離于108 個(gè)胴體的大腸桿菌O157：H7和單增李斯特菌進(jìn)行PFGE溯源，發(fā)現(xiàn)其在宰前動(dòng)物之間、屠宰工序之間具有交叉污染的現(xiàn)象，與本研究的結(jié)果相似。Gomes-Neves等[23]對(duì)葡萄牙生豬屠宰廠使用PFGE法進(jìn)行了沙門氏菌的溯源分析與關(guān)鍵點(diǎn)控制，發(fā)現(xiàn)同種基因型存在于不同的取樣點(diǎn)，證實(shí)了企業(yè)內(nèi)部存在交叉污染，與本研究結(jié)果一致。同時(shí)，借助PFGE溯源分析，Gomes-Neves等推斷出衛(wèi)生干預(yù)系統(tǒng)的失效、工人操作不規(guī)范、淋巴組織的刺破是交叉污染的重要誘因。鑒于屠宰企業(yè)內(nèi)部沙門菌的低檢出率及生物指示菌的使用仍存爭議，對(duì)不同工序分離出的沙門氏菌進(jìn)行溯源分析，對(duì)于確定屠宰企業(yè)內(nèi)部沙門氏菌傳播特點(diǎn)、干預(yù)措施的制定以及沙門氏菌傳播的阻斷具有重要意義。

3 討 論

2013年新發(fā)布的GB 29921—2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中致病菌限量》中明確規(guī)定：在熟肉及即食生肉制品中，按照二級(jí)采樣方案，在被檢的5 份樣品中，不允許任一樣品檢出沙門氏菌。Ni Pei’en等[19]對(duì)上海零售豬肉進(jìn)行了檢測與溯源，發(fā)現(xiàn)檢出菌株與屠宰企業(yè)分離出的菌株高度同源，并且該菌株能夠通過交叉污染感染其他種類農(nóng)產(chǎn)品。因此，應(yīng)從源頭控制沙門氏菌向下游產(chǎn)品的傳播，保證食品安全。因?yàn)槲覈^高的宰前動(dòng)物帶菌率[17]和沙門氏菌可在肉牛腸道中無癥狀攜帶的特點(diǎn)，屠宰加工過程成為隔斷沙門氏菌傳播的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。肉牛屠宰企業(yè)急需確定沙門氏菌在屠宰加工中傳播的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，并針對(duì)高危環(huán)節(jié)制定有效地干預(yù)措施，控制沙門氏菌向胴體、成品的蔓延，從源頭封堵食品安全威脅。雖然很多學(xué)者在零售、分銷水平對(duì)沙門氏菌進(jìn)行了溯源追蹤[24-27]，并推測屠宰企業(yè)是可能的源頭[19]，然而關(guān)于工廠內(nèi)部沙門氏菌的來源及分布特點(diǎn)的研究仍然匱乏。本研究對(duì)分離于肉牛屠宰過程中6 個(gè)不同取樣點(diǎn)（糞便、皮毛、去皮后、噴淋后、排酸后、分割肉）的48 株不同血清型沙門氏菌進(jìn)行PFGE分子溯源分析，試圖找到沙門氏菌在屠宰過程中傳播的路徑與關(guān)鍵工序，探究PFGE法在屠宰企業(yè)內(nèi)部進(jìn)行沙門氏菌溯源的可行性，為屠宰企業(yè)防控沙門氏菌向下游產(chǎn)品的蔓延提供理論依據(jù)。

通過PFGE對(duì)來源于胴體的5 株沙門氏菌進(jìn)行溯源分析，有3 株沙門氏菌追溯到了源頭。本研究使用分子手段直接證實(shí)了工廠內(nèi)部存在糞便-皮毛-胴體的交叉污染路徑，該路徑的發(fā)現(xiàn)說明沙門氏菌已經(jīng)穿過屠宰企業(yè)防控屏障，來源于糞便的沙門氏菌最終對(duì)胴體（潔凈區(qū)）造成了污染，Aslam等[28]對(duì)屠宰企業(yè)中腸桿菌的溯源追蹤也發(fā)現(xiàn)了類似的傳播途徑。如不采取有效措施對(duì)這一傳播路徑進(jìn)行阻斷，生鮮肉及其制品將面臨巨大的安全風(fēng)險(xiǎn)，甚至有可能在肉品分銷運(yùn)輸中對(duì)其他食品造成更大范圍的交叉污染。與此同時(shí)，有1 株分離于噴淋后胴體、分割肉的沙門氏菌未能追溯到源頭，不能排除企業(yè)內(nèi)部存在其他污染源頭的可能，如淋巴結(jié)[29]、屠宰環(huán)境[26]、噴淋用水[30]、屠宰工具及操作工人等，應(yīng)進(jìn)一步對(duì)這些潛在源頭進(jìn)行確認(rèn)。

對(duì)分離于不同動(dòng)物糞便和皮毛的沙門氏菌進(jìn)行溯源，結(jié)果表明沙門氏菌在不同動(dòng)物的皮毛、同種動(dòng)物的皮毛和糞便、不同動(dòng)物的皮毛和糞便中存在更為嚴(yán)重的交叉污染。說明屠宰企業(yè)在改善宰前管理、控制交叉污染方面具有較大的改進(jìn)空間。動(dòng)物在宰前運(yùn)輸、待宰、驅(qū)趕的過程中存在一定量的糞便排泄，糞便中攜帶的沙門氏菌很有可能通過動(dòng)物臥地休息與動(dòng)物接觸，進(jìn)而擴(kuò)散到皮毛，進(jìn)一步擴(kuò)散到整個(gè)牛群。因此，應(yīng)嚴(yán)格控制動(dòng)物禁食時(shí)間、待宰圈密度、待宰圈及運(yùn)輸工具的消毒程序，合理的禁食、宰前淋浴、飼料結(jié)構(gòu)的調(diào)整、低水平的應(yīng)激不僅能夠有效調(diào)節(jié)宰前動(dòng)物腸道生態(tài)，抑制沙門氏菌的傳播，降低待宰動(dòng)物載菌量，減小工廠內(nèi)部其他干預(yù)措施的壓力，控制胴體污染率，同時(shí)對(duì)于保證牛肉品質(zhì)、預(yù)防黑干肉（dark, firm, dry，DFD）的發(fā)生具有重要作用[5,31-32]。目前多數(shù)屠宰企業(yè)DFD牛肉的發(fā)生率在20%左右，部分企業(yè)甚至達(dá)到40%，其宰前管理缺失可見一斑。

本研究通過對(duì)沙門氏菌污染路徑的分析，確認(rèn)皮毛是交叉污染的重要媒介，同一頭動(dòng)物在皮毛上攜帶多種不同基因型、不同血清型的沙門氏菌的現(xiàn)象也較為普遍（如基因型PT4與PT15、PT1與PT4、PT11與PT18等）。動(dòng)物的皮毛對(duì)微生物在牛群、屠宰企業(yè)內(nèi)部的散播方面具有重要作用。一方面，作為接觸媒介，很容易通過動(dòng)物的臥地休息、相互接觸將糞便中的沙門氏菌擴(kuò)散到自身乃至牛群中[20,33]；另一方面，由于屠宰過程中去皮過程涉及機(jī)械力的撕扯，皮毛中的致病微生物極易在撕扯過程中擴(kuò)散到無菌的胴體上，成為下游污染的源頭[8]。鑒于皮毛被沙門氏菌污染的高風(fēng)險(xiǎn)以及對(duì)胴體污染的巨大威脅[8,34]，應(yīng)對(duì)去皮后的胴體設(shè)置噴淋減菌干預(yù)點(diǎn)，然而該關(guān)鍵點(diǎn)在國內(nèi)企業(yè)鮮受重視。

4 結(jié) 論

應(yīng)用PFGE技術(shù)對(duì)屠宰線上不同取樣點(diǎn)分離出的沙門氏菌進(jìn)行溯源分析，結(jié)果表明，存在于動(dòng)物胃腸道的沙門氏菌已穿過屠宰企業(yè)防控屏障，對(duì)最終對(duì)胴體造成了污染。宰前不同動(dòng)物皮毛和糞便間存在嚴(yán)重的交叉污染現(xiàn)象，皮毛是交叉污染的重要媒介，為工廠內(nèi)部衛(wèi)生環(huán)境的保持帶來巨大壓力。在重視動(dòng)物宰前管理的同時(shí)，應(yīng)改進(jìn)屠宰線設(shè)計(jì)，設(shè)置去皮后胴體的噴淋減菌干預(yù)措施，并在“臟區(qū)”與“潔凈區(qū)”之間設(shè)置嚴(yán)格的物理隔離措施，以遏制沙門氏菌向下游胴體的傳播。PFGE分型數(shù)據(jù)不僅與前期血清分型、流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果吻合，同時(shí)提供了更高的分辨效果，在屠宰企業(yè)內(nèi)致病菌檢出率低、同源性高的情況下提供了有效的溯源追蹤手段。