毛明光 孫心如 蔣潔蘭 孫夢(mèng)蕾 顧 杰 姜志強(qiáng) 葉 林

(1. 大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 遼寧省北方魚類應(yīng)用生物學(xué)與增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 大連 116023;2. 中國科學(xué)院水生生物研究所淡水生態(tài)與生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 武漢 430072)

葡萄糖-6-磷酸異構(gòu)酶(Glucose-6-Phosphate Isomerase, GPI)存在于真核生物和原核生物中, 是一種多功能酶, 主要功能是催化糖酵解過程中6-磷酸葡萄糖與6-磷酸果糖之間的相互轉(zhuǎn)化[1]。GPI根據(jù)行使功能的不同, 又稱神經(jīng)細(xì)胞素(Neuroleukin,NLK)、自分泌運(yùn)動(dòng)因子(Autocrine Mobility Factor,AMF)[2]和分化成熟調(diào)節(jié)因子(Differentation and Maturation Mediator, DMM)[2,3]。NLK由T細(xì)胞分泌, 作為神經(jīng)營養(yǎng)因子促進(jìn)脊髓和感覺神經(jīng)的存活[4]。AMF是癌細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子, 可以刺激癌細(xì)胞的分化和遷移[5,6]。由于GPI在生物體內(nèi)行使多種功能, 所以該酶的基因缺陷可引起多種疾病,Kugler等[7]研究指出人體內(nèi)缺乏GPI可導(dǎo)致非球型血紅細(xì)胞貧血癥。此外, 許多疾病如急性肝炎、惡性腫瘤、急性心肌梗死等也會(huì)引起患者血清中GPI活性明顯增高, 并且有研究發(fā)現(xiàn)其與病程呈正相關(guān)性。因此, GPI的研究對(duì)其他類疾病的診斷檢測(cè)也具有一定的潛在意義[8,9]。

目前, 關(guān)于GPI的研究, 大多數(shù)集中于哺乳動(dòng)物, 而魚類中的研究相對(duì)較少, 主要針對(duì)魚糜制品產(chǎn)品的劣化。Sun等[10]研究并證實(shí)鯽體內(nèi)GPI是其自身肌原纖維結(jié)合型絲氨酸蛋白酶(Myofibrilbound serine proteinase, MBSP)的內(nèi)源性抑制劑, 對(duì)預(yù)防魚產(chǎn)品凝膠劣化起到一定作用。

紅鰭東方鲀Takifugu rubripes屬鲀形目Tetraodontiformers、鲀亞目Tetraodontoidei、鲀科Tetraodontidae、東方鲀屬Takifugu[11], 是我國北方一種名貴的經(jīng)濟(jì)魚類。其能夠在鹽度為5‰—45‰的水體中存活, 屬于廣鹽性底棲魚類, 但其鹽度適應(yīng)機(jī)制尚不清楚。我們?cè)谇捌诘难芯恐? 通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù), 在低鹽處理的紅鰭東方鲀鰓中獲得了GPI基因的片段序列, 為了進(jìn)一步了解紅鰭東方鲀GPI的基因信息及其表達(dá)特性, 本研究通過RTPCR技術(shù), 克隆獲得紅鰭東方鲀GPI基因的cDNA序列, 并對(duì)其序列特征、組織差異表達(dá)及在低鹽脅迫下的轉(zhuǎn)錄水平變化進(jìn)行了分析, 以期為進(jìn)一步研究紅鰭東方鲀響應(yīng)鹽度脅迫的變化及機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用紅鰭東方鲀幼魚購于大連天正實(shí)業(yè)有限公司, 平均質(zhì)量為(11.34±2.13) g, 平均體長為(7.18±0.34) cm。試驗(yàn)用魚購回后于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暫養(yǎng)1周。暫養(yǎng)條件為:水溫(25.03±0.42)℃, 鹽度(32±0.5)‰, 24h連續(xù)充氣。

1.2 方法

試驗(yàn)設(shè)計(jì)及樣品采集選取暫養(yǎng)后無異常的紅鰭東方鲀幼魚3尾, 解剖后, 分別取其鰓、肌肉、腦、腸、肝和腎組織, 用于基因克隆及組織差異表達(dá)分析。樣品置于1.5 mL離心管中, 迅速投入液氮, 轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

低鹽脅迫試驗(yàn)用水為凈化處理的天然海水(鹽度平均為32‰)和天然海水與曝氣后自來水配制成的低鹽度海水, 容器為200 L的方形水槽。設(shè)計(jì)5個(gè)鹽度梯度, 分別為32‰(對(duì)照組)、16‰、12‰、8‰和4‰, 每個(gè)鹽度設(shè)置3個(gè)平行, 每個(gè)鹽度組30尾魚, 選取暫養(yǎng)后大小相似、狀態(tài)良好的紅鰭東方鲀幼魚, 每個(gè)方形槽中放入10尾幼魚, 分別在3h、6h、12h、24h、48h和72h取樣, 每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每個(gè)鹽度組取6尾幼魚, 麻醉后取其鰓和腎, 液氮速凍,-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

RNA提取及cDNA合成根據(jù)動(dòng)物組織總RNA提取試劑盒(天根生化科技有限公司)說明書,提取紅鰭東方鲀鰓、肌肉、腦、腸、肝及腎組織總RNA。采用微量分光光度計(jì)和1%瓊脂糖凝膠電泳分別對(duì)其進(jìn)行濃度測(cè)定和質(zhì)量分析。質(zhì)量和濃度檢測(cè)合格的RNA用于后續(xù)試驗(yàn)。總RNA經(jīng)DNaseⅠ(大連寶生物工程有限公司)處理去除基因組污染后, 每個(gè)樣品均取1 μg總RNA, 按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒(大連寶生物工程有限公司)說明書以10 μL體系進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈。將反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物置于-20℃冰箱保存。

GPI基因擴(kuò)增及序列測(cè)定根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期獲得的紅鰭東方鲀鰓低鹽轉(zhuǎn)錄組中已有GPI序列, 利用Primer premier 5.0設(shè)計(jì)兩對(duì)特異性引物(表1), 以紅鰭東方鲀鰓組織cDNA第一鏈為模板進(jìn)行PCR, 分別擴(kuò)增獲得GPI基因片段序列。PCR反應(yīng)程序?yàn)? 94℃預(yù)變性5min; 94℃變性30s; 58℃/56℃退火30s; 72℃延伸1min, 共35個(gè)循環(huán); 72℃終延伸10min; 4℃終止反應(yīng)。PCR產(chǎn)物經(jīng)1% (w/v)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后用膠回收試劑盒分別回收目的片段。將回收產(chǎn)物與pMD18-T載體連接, 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞中, 挑取陽性克隆送至生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。

基因序列生物信息學(xué)分析利用DNAstar軟件對(duì)所得序列進(jìn)行拼接獲得紅鰭東方鲀GPIcDNA序列。運(yùn)用DNAMAN軟件分析其編碼的氨基酸序列; 用生物信息學(xué)網(wǎng)站NCBI的在線功能BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)工具和DNAMAN軟件對(duì)序列進(jìn)行同源性比對(duì)和相似性分析; 運(yùn)用ExPASy TMHMM (http://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/)進(jìn)行跨膜區(qū)預(yù)測(cè); 利用SignalP4.0 Server (http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/)對(duì)GPI基因編碼的氨基酸序列進(jìn)行N端信號(hào)肽結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè); 用ExPASy prosite (http://prosite.expasy.org/)工具對(duì)氨基酸序列進(jìn)行結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè); 使用MEGA7.0, 鄰位相連法構(gòu)建進(jìn)化樹, 所用物種GPI序列均從GenBank下載。

熒光定量PCR 檢測(cè)GPI基因表達(dá)差異根據(jù)紅鰭東方鲀的GPI和β-actin序列, 應(yīng)用Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)熒光定量引物(表 1), 引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。用普通PCR篩選出條帶單一且無二聚體的引物, 然后通過熒光定量PCR檢測(cè)引物的特異性, 挑選條帶單一且特異性好的引物進(jìn)行熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)。取紅鰭東方鲀幼魚鰓、肌肉、腦、腸、肝及腎等組織、低鹽脅迫前后cDNA, 調(diào)整樣品濃度, 以β-actin為內(nèi)參引物[12],配置20 μL反應(yīng)體系, 檢測(cè)GPI在紅鰭東方鲀不同組織、不同鹽度脅迫不同時(shí)間下的表達(dá)水平。反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性10min; 95℃變性15s; 60℃延伸1min, 共40個(gè)循環(huán)。檢測(cè)每份樣品中GPI基因和βactin基因的Ct值, 然后根據(jù)相對(duì)表達(dá)量(Relative quantity, RQ)=2-ΔΔCt[13]計(jì)算, 不同組織選用鰓相對(duì)表達(dá)量為對(duì)照; 不同鹽度脅迫選用鹽度32‰紅鰭東方鲀幼魚GPI相對(duì)表達(dá)量作為對(duì)照。

表 1 基因擴(kuò)增及熒光定量PCR所用引物序列Tab. 1 Primers used for gene cloning and qPCR

2 結(jié)果

2.1 紅鰭東方鲀GPI基因序列特征及其編碼蛋白的結(jié)構(gòu)分析

經(jīng)過拼接得到的紅鰭東方純GPI基因長度為1736 bp, 包含一個(gè)完整ORF。ORF長度為1662 bp,編碼553個(gè)氨基酸。利用SignalP 4.0在線工具預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn), 該氨基酸序列不存在信號(hào)肽?？缒そY(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果顯示, GPI沒有跨膜區(qū), 屬于胞漿蛋白。NCBI保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)結(jié)果顯示,GPI基因存在2個(gè)糖異構(gòu)域(Sugar isomerase domains), 分別為SIS-PGI-1和SIS-PGI-2。

2.2 紅鰭東方鲀GPI氨基酸序列的多序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析

運(yùn)用DNAMAN軟件將GPI蛋白序列與斑馬魚Danio rerio、非洲爪蟾Xenopus laevis、人類Homo sapiens、原雞Gallus gallus等物種的GPI蛋白序列進(jìn)行比對(duì), 結(jié)果顯示, 紅鰭東方鲀GPI與各物種相似性分別為85%、77%、76%、和77%。在此基礎(chǔ)上,利用MEGA7.0構(gòu)建紅鰭東方鲀和其他物種GPI氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(圖 1), 結(jié)果顯示, 魚類GPI單獨(dú)聚為一支, 非洲爪蟾、原雞GPI與人類、小鼠的GPI聚為另一個(gè)分支。在魚類分支中, 紅鰭東方鲀GPI與孔雀花鳉、青鳉、黃鱔、大黃魚、半滑舌鰨和牙鲆GPI聚為一個(gè)小分支。

圖 1 GPI氨基酸序列NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig. 1 NJ phylogenetic tree of GPI amino acid sequences

2.3 紅鰭東方鲀幼魚GPI的組織差異表達(dá)分析

運(yùn)用qPCR技術(shù)檢測(cè)GPI基因在紅鰭東方鲀鰓、肌肉、腦、腸、肝和腎中的表達(dá)情況, 結(jié)果顯示GPI基因在各組織中均有表達(dá)。其中, 肌肉中表達(dá)量最高, 以鰓中的表達(dá)量作為基準(zhǔn)1, 肌肉中GPI表達(dá)量接近50000, 遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他各組織中的表達(dá)量。其他各組織中GPI表達(dá)量由高到低依次為:肝＞腎＞腸＞腦＞鰓(圖 2)。

2.4 低鹽脅迫后紅鰭東方鲀GPI基因的表達(dá)

利用熒光定量PCR方法分析不同鹽度脅迫下紅鰭東方鲀GPI基因在鰓和腎中的表達(dá)情況, 在鰓中(圖 3A), 各低鹽組GPI均在3h時(shí)即上調(diào)表達(dá), 其中鹽度4‰、8‰和12‰組顯著上調(diào)(P＜0.05)。6h時(shí), 16‰組GPI表達(dá)量仍繼續(xù)上調(diào), 與對(duì)照組達(dá)到顯著差異(P＜0.05), 其余各組表達(dá)水平有所回落, 但與對(duì)照組相比, 仍處于顯著上調(diào)(P＜0.05)。12h之后各低鹽組GPI在不同時(shí)間點(diǎn)開始表達(dá)量有所下降,之后又回升, 至72h時(shí)各低鹽組與對(duì)照組相比,GPI均顯著上調(diào)表達(dá)(P＜0.05)。在腎中(圖 3B), 各低鹽組GPI相對(duì)表達(dá)量變化趨勢(shì)各有不同。鹽度4‰組GPI相對(duì)表達(dá)量在3h時(shí)即顯著上調(diào), 之后經(jīng)過波動(dòng), 至72h時(shí)表達(dá)量又呈現(xiàn)顯著上調(diào)(P＜0.05)。鹽度16‰組GPI在6h時(shí)顯著上調(diào), 之后持續(xù)保持上調(diào)狀態(tài), 至72h時(shí)表達(dá)量顯著下調(diào)(P＜0.05)。鹽度8‰組在24h內(nèi)表達(dá)量與對(duì)照組相比沒有顯著差異,48h時(shí)GPI才出現(xiàn)顯著上調(diào)(P＜0.05), 72h時(shí)表達(dá)量又呈現(xiàn)顯著下調(diào)(P＜0.05)。鹽度12‰組在48h內(nèi)表達(dá)量與對(duì)照組相比沒有顯著差異, 72h時(shí)出現(xiàn)顯著上調(diào)(P＜0.05)。

3 討論

本研究首次從紅鰭東方鲀中克隆獲得了GPI基因的cDNA ORF全長序列, 并解析了該基因在急性低鹽脅迫下的表達(dá)模式, 為進(jìn)一步解讀其他魚類GPI對(duì)急性低鹽脅迫的響應(yīng)及其潛在的分子機(jī)制奠定了重要基礎(chǔ)。NCBI保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)結(jié)果顯示,所獲cDNA序列推導(dǎo)的氨基酸序列存在2個(gè)糖異構(gòu)域, 分別為SIS-PGI-1和SIS-PGI-2, 初步證實(shí)了所獲序列為紅鰭東方鲀GPI基因cDNA序列。通過將紅鰭東方鲀GPI基因的氨基酸序列與其他已登記在GenBank上的GPI氨基酸序列進(jìn)行序列比對(duì)后, 我們發(fā)現(xiàn)其與斑馬魚Danio rerioGPI序列相似性達(dá)到85%, 與兩棲類非洲爪蟾GPI相似性達(dá)到77%、鳥類原雞GPI相似性為78%, 和哺乳類人類GPI相似性為77%, 進(jìn)一步證實(shí)了所獲序列為紅鰭東方鲀GPI基因cDNA序列, 同時(shí)也表明GPI在進(jìn)化上高度保守, 在不同物種中可能具有相似的生物學(xué)功能。系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示魚類GPI單獨(dú)聚為一支, 非洲爪蟾、原雞GPI與人類、小鼠的GPI聚為另一個(gè)分支(圖 1)。因此可以認(rèn)為GPI的基因進(jìn)化有不同的方向。

qPCR結(jié)果顯示, 紅鰭東方鲀GPI基因在鰓、肌肉、腦、腸、肝及腎等組織中均有表達(dá), 且在肌肉中表達(dá)量遠(yuǎn)大于其他各組織(圖 2)。一方面, GPI的主要功能是催化糖酵解過程中6-磷酸葡萄糖與6-磷酸果糖之間的相互轉(zhuǎn)化, 從而為機(jī)體提供能量[1]。肌肉中含有較多的GPI, 可能和其生理活動(dòng)需要較多的能量有關(guān); 另一方面, GPI在魚類肌肉中具有其他的功能。近年, 從白姑魚肌肉中分離出一種內(nèi)源性的肌原纖維結(jié)合型絲氨酸蛋白酶抑制劑(Myofibril-bound serine proteinase inhibitor, MBSPI), 且與豬的GPI具有高度的同源性, 表明其可能是白姑魚的GPI[14]。孫樂常[15]研究顯示, 鯽GPI對(duì)肌原纖維的降解有較明顯的抑制作用, 其中肌球蛋白重鏈、肌動(dòng)蛋白、原肌球蛋白的降解都得到了有效抑制, 表明多功能蛋白質(zhì)GPI作為一種內(nèi)源性的MBSP抑制劑可能對(duì)魚體肌肉的新陳代謝起著重要的調(diào)節(jié)作用。因此,GPI在組織中的表達(dá)情況, 可能與各組織的不同功能有關(guān)。

圖 2 GPI基因mRNA在紅鰭東方鲀各組織中的表達(dá)水平Fig. 2 The relative mRNA level of GPI in various tissues of Takifugu rubripesG. 鰓; B. 腦; In. 腸; K. 腎; L. 肝; M. 肌肉G. Gill; B. Brain; In. Intestines; K. Kidney; L. Liver; M. Muscle

圖 3 在不同鹽度脅迫下紅鰭東方鲀GPI基因mRNA在鰓(A)和腎(B)中相對(duì)表達(dá)量Fig. 3 Relative mRNA level of GPI gene in gill (A) and kidney (B) of Takifugu rubripes under different salinities圖中不同字母表示同一時(shí)間下低鹽組與對(duì)照組的差異顯著(P＜0.05)Different letters denote significant differences between low-salinity groups and the control group at the same time point (P＜0.05)

魚類生活在各種不同的環(huán)境中, 由于海水和淡水中所含鹽分的數(shù)量, 與魚體液所含鹽分的數(shù)量不大相同, 為了保證恒定的滲透壓, 必須具備滲透壓調(diào)節(jié)的能力[16—18]。廣鹽性魚類具有較強(qiáng)的滲透壓調(diào)節(jié)能力, 使其能夠適應(yīng)較大范圍的鹽度變化。而滲透壓調(diào)節(jié)是一個(gè)消耗能量非常大的過程, 研究表明, 在滲透調(diào)節(jié)過程中, 鰓和腎等重要的滲透壓調(diào)節(jié)組織器官中的糖代謝作用會(huì)有所增強(qiáng), 以滿足組織器官對(duì)于能量的需求[19]。Kidder等[20]也證實(shí)鳉魚需要消耗總能量的6%—10%用于滲透壓調(diào)節(jié)。崔文曉[21]通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù), 篩選大菱鲆在不同鹽度下的差異基因, 結(jié)果發(fā)現(xiàn)糖酵解相關(guān)基因出現(xiàn)上調(diào)表達(dá)。房子恒等[22]的研究也表明, 在低鹽馴化后, 半滑舌鰨幼魚腎臟和鰓內(nèi)糖代謝酶HK、PK、SDH和MDH活力升高, 表明這些組織中的糖代謝確實(shí)由于滲透調(diào)節(jié)壓力的增大而有所增強(qiáng)。糖酵解作用是魚體葡萄糖分解的重要途徑之一。GPI的主要功能是催化糖酵解過程中6-磷酸葡萄糖與6-磷酸果糖之間的相互轉(zhuǎn)化[1]。由于鰓和腎是魚類滲透壓調(diào)節(jié)的主要器官, 因此, 本研究以這2個(gè)組織為研究對(duì)象, 利用qPCR檢測(cè)GPImRNA的表達(dá)水平, 結(jié)果顯示, 在急性低鹽脅迫72h內(nèi), 紅鰭東方鲀鰓和腎中GPI的表達(dá)量均發(fā)生變化(圖 3)。在鰓中(圖 3A),各低鹽組GPI相對(duì)表達(dá)量均在3h時(shí)即出現(xiàn)上調(diào)表達(dá), 總體呈現(xiàn)先升高后降低又回升的趨勢(shì), 但除12‰組和16‰組個(gè)別時(shí)間點(diǎn)外, 其余與對(duì)照組相比,均呈顯著上調(diào)(P＜0.05)。這與上述其他研究的結(jié)果相似, 表明在急性低鹽脅迫下, 紅鰭東方鲀鰓中糖代謝增強(qiáng), 用于產(chǎn)生更多的能量以支持其滲透壓調(diào)節(jié)過程來適應(yīng)環(huán)境鹽度的變化[19—22]。在腎中(圖3B), 各低鹽組GPI相對(duì)表達(dá)量變化趨勢(shì)各有不同。鹽度8‰組和鹽度12‰組在24h內(nèi)GPI表達(dá)量與對(duì)照組相比沒有顯著差異, 鹽度8‰組48h時(shí)GPI顯著上調(diào), 72h時(shí)表達(dá)量又呈現(xiàn)顯著下調(diào)(P＜0.05), 鹽度12‰組48h時(shí)GPI與對(duì)照組沒有顯著差異, 72h時(shí)出現(xiàn)顯著下調(diào)(P＜0.05)。有研究指出, 對(duì)半滑舌鰨進(jìn)行低鹽馴化后, 在鹽度為10‰條件下, 其肝臟中葡萄糖含量低于淡水、鹽度5‰、鹽度20‰和鹽度30‰[22]。而當(dāng)周圍水體鹽度發(fā)生變化時(shí), 魚類肝臟中糖原可分解為葡萄糖, 向鰓、腎等滲透壓調(diào)節(jié)組織器官輸送葡萄糖[23,24], 為魚體的滲透壓調(diào)節(jié)提供能量, 故推測(cè)當(dāng)鹽度為10‰時(shí), 可能由于在等滲條件下機(jī)體對(duì)葡萄糖的需求量較低導(dǎo)致肝臟中葡萄糖含量低于其他鹽度條件[22]。在本研究中鹽度8‰組和鹽度12‰組GPI表達(dá)量在24h保持在相對(duì)低水平, 且在72h出現(xiàn)顯著下調(diào), 可能由于在這兩個(gè)鹽度下, 外界水環(huán)境滲透壓與魚類滲透壓較為接近,因而腎臟用于滲透壓調(diào)節(jié)的能量需求較低所致。鹽度4‰組GPI相對(duì)表達(dá)量在3h時(shí)即顯著上調(diào), 之后經(jīng)過波動(dòng), 至72h時(shí)表達(dá)量又呈現(xiàn)顯著上調(diào)(P＜0.05)。在低鹽條件下魚類的腎臟為避免體內(nèi)離子的過度流失, 腎臟對(duì)水分的濾過作用增強(qiáng), 而對(duì)離子的重吸收作用會(huì)提高[16,22]。因此, 在本研究中,在鹽度4‰條件下, 可能由于周圍水環(huán)境的鹽度遠(yuǎn)低于魚體滲透壓, 因而腎臟表現(xiàn)出較強(qiáng)的離子重吸收能力并加強(qiáng)水分的濾過作用, 消耗的能量增加,故GPI表達(dá)量升高, 用于表達(dá)出更多的GPI蛋白, 以參與糖酵解作用產(chǎn)生更多的能量。

綜上所述,GPI基因參與紅鰭東方鲀對(duì)急性低鹽脅迫的響應(yīng), 進(jìn)而增強(qiáng)其對(duì)低鹽的適應(yīng)性。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可為進(jìn)一步研究紅鰭東方鲀的滲透壓調(diào)節(jié)機(jī)制提供基礎(chǔ)材料。