陳紅菊 王 慧 孔維祎 許高朋 王曉云 趙 燕 季相山

(1. 山東農(nóng)業(yè)大學山東省動物生物工程與疾病防治重點實驗室, 泰安 271018; 2. 中國農(nóng)業(yè)大學(煙臺)海洋學院, 煙臺 264000)

在水產(chǎn)養(yǎng)殖中, 投入水體中的飼料只有約25%的蛋白被水產(chǎn)動物吸收利用, 多數(shù)飼料蛋白通過糞便、殘餌、分泌物等形式重新流失到水體中[1,2],造成含氮有機物在水體中累積, 當這些有機物過多,難以被天然的微生物完全分解時, 便造成了水質(zhì)惡化, 從而引發(fā)水體缺氧、水生動物發(fā)病甚至死亡等一系列后果。因此, 人為地施加能高效分解殘餌、糞便等有機物的微生物菌種是非常有必要的[3]。為了將大的有機物分解掉, 施加的菌株最好是復合菌,從功能上分主要包含2大類, 第一類是能將大的有機物分解為氨氮等小分子有機物的菌株; 第二類是將氨氮等進一步轉(zhuǎn)化為氮氣等氣體的菌株?？莶菅挎邨U菌(Bacillus subtilis)具有強大的產(chǎn)酶系統(tǒng), 在其生長繁殖期間, 特別是在穩(wěn)定期能夠分泌大量的中性蛋白酶、堿性蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶、植酸酶等數(shù)十種酶[4], 可將殘餌、糞便等有機物分解為氨氮等小分子物質(zhì), 主要行使第一類菌的功能。為了提高枯草芽孢桿菌等分解大分子有機物的能力, 人們多從提高其酶活性方面開展相關(guān)研究,如通過紫外誘變等手段篩選和培育高產(chǎn)酶活性的枯草芽孢桿菌等[5,6]。蔡婉玲等[7]利用紫外誘變使菌株產(chǎn)蛋白酶活性提高了15.6%。本實驗室前期通過紫外誘變的方法獲得了能穩(wěn)定遺傳的高產(chǎn)蛋白酶活性的突變菌株B38, 其降解飼料中可溶性蛋白的能力提高了2.57倍[8]。

氨氮等進一步轉(zhuǎn)化為氮氣等氣體的過程較為復雜, 需要經(jīng)過氨氧化、硝化、反硝化等眾多途徑,中間會形成硝酸鹽、亞硝酸鹽、一氧化二氮等中間產(chǎn)物[9], 一般需要一個或多個菌株的共同參與才能完成。前期人們已篩選了大量的降解氨氮的菌株[9—12], 但從養(yǎng)殖水體和底泥中直接篩選降解氨氮菌株的報道并不多。

本研究在前期試驗的基礎(chǔ)上, 為了進一步提高水體中含氮有機物分解效果, 擬從多種水產(chǎn)動物的養(yǎng)殖池塘中篩選出高效的氨氮降解菌, 優(yōu)化其培養(yǎng)條件, 并通過灌服試驗檢測其對養(yǎng)殖生物的安全性。再將篩選菌株與B38[8](能分解飼料蛋白的枯草芽孢桿菌)復配后制成復合菌, 通過養(yǎng)殖試驗與4種商品微生態(tài)制劑(光合細菌、酵母菌、強效EM和芽孢桿菌)進行比較, 評價復合菌液在水質(zhì)調(diào)控方面的效果, 為復合型微生態(tài)制劑的開發(fā)提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

菌株: 用于篩選菌株的樣品取自泰安、濟寧和南寧的多處養(yǎng)殖池塘或自然水體(表 1), 共計82份。試驗用魚: 黃河鯉(10—12 cm)、鰱、鳙(8—10 cm)取自泰安市水產(chǎn)研究所。

光合細菌、酵母菌和強效EM由山東寶來利來生物工程股份有限公司惠贈; 芽孢桿菌購自廣州利洋水產(chǎn)科技股份有限公司。

1.2 菌株的分離鑒定

菌株的篩選與評價 采集的水樣不做處理,可直接作為樣品液使用。對采集的泥樣做以下處理: 分別稱取1 g泥樣加入到裝有9 mL無菌生理鹽水的離心管中, 30℃振蕩活化30min, 靜置15min后取上清液, 由此制得泥樣懸浮液。采用定向富集分離法對采集的樣品進行菌株富集分離[13]。將樣品以1%的接種量接種到初始氨氮濃度為50 mg/L的高濃度氨氮培養(yǎng)基中, 進行連續(xù)6次的富集馴化培養(yǎng),每次的馴化周期為3天。在馴化結(jié)束后采用平板劃線法分離篩選菌株, 共篩選出9株, 劃線純化3代后置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

表 1 采集樣品相關(guān)信息Tab. 1 Sample information

將分離得到的9株耐受基礎(chǔ)菌株搖菌后制成A600為1的菌液, 分別接種到裝有20 L水的容器中,接種量終濃度為107個/mL, 氨氮初始濃度為50 mg/L。試驗用水進行曝氣、充氧, 每隔24h測定水體的氨氮濃度, 測定3次。

菌株的鑒定形態(tài)學觀察: 將xh1和xh7用革蘭氏染色法染色后, 依照《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》[14]對細菌種類進行初步鑒定。

生理生化鑒定: API 50CHE 試驗條和apiweb-API 50CHBV3.0 分析鑒定數(shù)據(jù)庫(BioMérieux公司)、BioNumerics生物分析軟件(Applied Maths公司)對xh1和xh7進行生理生化鑒定[15]。

以菌液為模板進行16S rDNA 部分序列的PCR擴增, 引物為: 5′-AGAGTTTGATCMTGGC TGAG-3′, 5′-TACGGYTACCTTGTTACGAGTT-3′。PCR擴增程序: 94℃預(yù)變性4min, 94℃變性30s,56℃復性45s, 72℃延伸90s, 35個循環(huán)后72℃延伸7min, 4 ℃保存。選取陽性克隆測序, 所得序列進行Blast比對, 利用MEGA5.05軟件構(gòu)建進化樹, 對菌株進行分子鑒定。

1.3 菌株培養(yǎng)條件的優(yōu)化

篩選得到的xh1和xh7菌株菌懸液分別接種于優(yōu)化培養(yǎng)基, 進行單因素的條件優(yōu)化, 即在優(yōu)化一個條件時, 其他條件保持不變(溫度30℃, C/N 15,pH7.0, 鹽度0)。200 r/min振蕩培養(yǎng), 24h后測定菌液A600值。

溫度梯度設(shè)置: 20℃、25℃、30℃、35℃、40℃。

pH設(shè)置: 6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5。

鹽度梯度設(shè)置: 0、3‰、5‰、10‰、20‰、30‰。

C/N梯度設(shè)置: 2、5、10、15、20[16]。

1.4 菌株的安全性檢測

選取相同養(yǎng)殖環(huán)境、相同日齡、體重(50±2.48) g的黃河鯉660尾, 平均分為11組, 每組3個重復。暫養(yǎng)一周后進行試驗。第1組灌服無菌生理鹽水作為對照組。第2至第6組灌服不同濃度的xh1菌液, 第7至第11組灌服不同濃度的xh7菌液, 菌液濃度分別為105、106、107、108和109cfu/mL。每尾試驗魚灌服劑量為0.5 mL, 連續(xù)灌服3d, 觀察時間為14d, 相同條件飼養(yǎng), 觀察攝食能力及行動狀態(tài), 統(tǒng)計14d內(nèi)的累計死亡率。

1.5 復合菌與四種商品微生態(tài)制劑對水質(zhì)調(diào)控效果的評價

復合菌的配制: xh1、xh7是本研究篩選出的2個高效氨氮降解菌, B38是本實驗室通過誘變篩選得到的高產(chǎn)蛋白酶的菌株[8]。將xh1、xh7和B38培養(yǎng)至109個/mL時, 離心濃縮后以1∶1∶1的比例復配成復合菌。

試驗設(shè)計: 共設(shè)置5個試驗組(分別潑灑復合菌、光合細菌、酵母菌、強效EM菌、芽孢桿菌)和2個對照組(不潑灑益生菌), 其中1個對照組正常投喂飼料, 另1個不投喂飼料, 所有試驗組都投喂飼料。試驗用益生菌在潑灑前均用梯度稀釋法進行菌種計數(shù), 菌液潑灑終濃度為107個/L。每組3個池塘重復。各組池塘中飼養(yǎng)鯉、鰱和鳙, 鯉放養(yǎng)密度為(207±7.58) g/m3, 鰱和鳙放養(yǎng)比例為3∶1, 放養(yǎng)密度為(57±3.24)g/m3, 日投餌量為魚體重的4%—5%, 試驗期間每個池塘投餌量都一致, 日投餌量120 g。試驗所用池塘初始水體積為8 m3, 調(diào)節(jié)各池塘的水體初始pH為7.5, 試驗水溫控制在25—30 ℃。向各水體內(nèi)添加NH4Cl溶液, 調(diào)節(jié)水中初始總氨氮(TAN)濃度至6 mg/L。在試驗過程中, 選取不同時間點取樣, 測定各項水質(zhì)指標。氨氮、亞硝態(tài)氮測定的取樣時間為:0(加入微生態(tài)制劑后的6h)、1d、5d、9d、11d和18d, 藻類測定的取樣時間為: 0 (加入微生態(tài)制劑后的6h)、5d、9d和14d。

總氨氮的測定: 采用納氏試劑法[17]測定。計算公式:ρ=A水樣/b×25.0/V水樣

亞硝態(tài)氮的測定: 采用重氮偶合分光光度法測定。

藻類數(shù)量的測定: 采用濃縮沉淀法[18]測定。

1.6 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)均用平均值±標準差的形式表示, 用軟件Excel 2016和SPSS 21.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析和顯著性檢驗(P＜0.05)。

2 結(jié)果

2.1 氨氮降解菌的篩選、培養(yǎng)條件優(yōu)化與安全性檢測

氨氮降解菌的篩選本試驗共采集82份樣品(表 1), 采用定向富集分離法篩選高效降解氨氮的菌株, 共篩選出9株菌株, 命名為xh1-xh9。這9株菌降氨氮效果評價試驗顯示, 24h時xh1和xh7兩株菌對氨氮的降解率均達到90%以上。72h時xh1與xh7菌株的降解率分別達97.8%和98.5%。二者在各個時間點對氨氮的降解率均顯著高于其他菌株(表 2)。

表 2 篩選菌株氨氮降解率結(jié)果Tab. 2 Results of ammonia nitrogen degradation rate

菌株的鑒定結(jié)果顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn), 2個菌株胞體均呈桿狀, 能形成芽孢, 無鞭毛, 兩端鈍圓,單個或少數(shù)呈短鏈狀。經(jīng)革蘭氏染色均呈陽性。依據(jù)《伯杰細菌鑒定手冊》和《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》將其初步鑒定為芽胞桿菌屬。

將培養(yǎng)好的菌液接種于API50 CH 芽孢桿菌鑒定試劑條, 得出該菌株的生理生化反應(yīng)譜。經(jīng)計算機軟件鑒定, xh1、xh7與凝結(jié)芽孢桿菌(Bacillus coagulans)的相似度分別為99.6%與96.9%。

從篩選菌株基因組擴增到長度約1500 bp的16S rDNA序列, 在NCBI中BLAST比對結(jié)果顯示,xh1與xh7序列與凝結(jié)芽孢桿菌的相似性在99%以上。選取芽孢桿菌屬中的9株菌株序列信息, 與篩選菌株進行序列分析, 以非典型弧菌(Vibrio atypicus, 登錄號: JX867739)作為外類群構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果顯示, xh1、xh7與凝結(jié)芽孢桿菌(登錄號:NR_041523.1)聚為一類, 說明篩選菌株與凝結(jié)芽孢桿菌的親緣關(guān)系最近(圖 1)。

菌株培養(yǎng)條件的優(yōu)化菌株培養(yǎng)條件優(yōu)化試驗顯示, xh1和xh7兩株菌受pH的影響不大, 在微酸性、中性和微堿性環(huán)境下均能生長良好。其中,xh1菌株的最適pH為7.5, xh7菌株的最適pH為7.0(圖 2A)。

在溫度低于35℃時, 測得2株菌的A600隨溫度的升高而增大, 最適溫度應(yīng)該在35—40℃左右; 而溫度達到45℃時, xh7菌株生長稍受影響, xh1菌株的生長狀況良好, 說明xh1菌株耐高溫能力較xh7強(圖 2B)。

在低鹽度環(huán)境下, xh1菌株的生長情況良好, 鹽度為10‰時生長情況最佳; 鹽度高至30‰時, 2株菌的生長均受到一定程度的影響,A600值降至2以下。xh7菌株受鹽度變化的影響不大, 始終保持在A600值為2左右(圖 2C)?？傮w看來, 在一定范圍內(nèi), 鹽度對復合菌的生長情況影響不大。

隨著C/N的升高, xh1與xh7兩株菌A600值均升高, C/N為15時兩株菌生長狀況最好, C/N為20時xh7菌株生長稍受影響, 而xh1菌株依舊生長良好(圖 2D)。

菌株安全性檢測在各個菌液灌服濃度下,黃河鯉的攝食能力和行動狀態(tài)均正常, 均未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象, 與灌服生理鹽水的對照組無差異(表 3)。結(jié)果表明菌液是安全的, 可以用于生產(chǎn)實踐。

圖 2 菌株培養(yǎng)條件的優(yōu)化Fig. 2 Optimization of strain culture conditionsA. 不同pH對兩株菌生長情況的影響; B. 不同溫度對兩株菌生長情況的影響; C. 不同鹽度對兩株菌生長情況的影響; D. 不同C/N對兩株菌生長情況的影響A. Effects of different pH values on the growth of two strains of bacteria; B. Effects of different temperatures on the growth of two strains of bacteria; C. Effects of different salinities on the growth of two strains of bacteria; D. Effects of different C/N on the growth of two strains bacteria

表 3 篩選菌株的安全性檢測Tab. 3 Safety test of screening bacteria

2.2 復合菌對水質(zhì)調(diào)控效果的評價

復合菌與四種商品微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水體氨氮含量的影響添加復合菌的池塘在第1天和第5天, 氨氮含量顯著低于其他4種微生態(tài)制劑組和對照組, 說明復合菌能快速有效地降解養(yǎng)殖水體中的氨氮; 隨著時間的延長, 在第9天, 復合菌組和強效EM菌組、芽孢桿菌組氨氮含量差異不顯著, 明顯低于2個對照組和光合細菌組、酵母菌組; 第11天和第18天, 復合菌組和光合細菌組氨氮含量差異不顯著, 明顯低于其他5組。總體來說, 從試驗第1天開始, 復合菌組的氨氮含量逐漸降低, 第11天以后,含量低于1 mg/L; 并且相較于其他各組, 復合菌組的氨氮含量一直處于最低水平。結(jié)果說明, 添加復合菌的試驗組降解氨氮效果快速并且持續(xù)性較好(圖 3)。

復合菌與四種商品微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水體亞硝酸鹽含量的影響試驗5d后各組的亞硝酸鹽含量均有所升高; 復合菌組與酵母菌組亞硝酸鹽含量呈現(xiàn)一種先升后降的趨勢, 并且在各個時間點,與對照組差異不顯著; 添加強效EM菌和芽孢桿菌的兩組在各個時間點亞硝酸鹽含量相對較高, 9d和11d時含量均高達5 mg/L (圖 4)。

圖 3 五種微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水體氨氮的影響Fig. 3 Effects of five probiotics on ammonia nitrogen in aquaculture water同列數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母差異顯著(P＜0.05); 下同Mean values in the same column with different superscripts were significant different (P＜0.05); the same applies below

圖 4 五種微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水體亞硝酸鹽的影響Fig. 4 Effects of five probiotics on nitrite in aquaculture water

復合菌與四種商品微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水體藻類數(shù)量的影響從第9天開始, 添加復合菌與芽孢桿菌組藻類數(shù)量高于其他各組, 達到7萬個/mL左右; 在第14天, 復合菌與芽孢桿菌組藻類數(shù)量顯著高于其他各組, 分別達到8萬個/mL和9萬個/mL左右, 大約為其他組的兩倍, 說明二者能促進藻類的增殖(圖 5)。從第5天開始, 光合細菌組藻類數(shù)量明顯低于其他試驗組及對照組, 差異顯著; 第14天, 光和細菌組藻類數(shù)量與復合菌、芽孢桿菌組差異極顯著。

3 討論

3.1 氨氮降解菌的篩選與培養(yǎng)條件的優(yōu)化

本試驗用富集分離法篩選得到兩株高效降氨氮的菌株均為芽孢桿菌屬(Bacillus)的凝結(jié)芽孢桿菌(Bacillus coagulans), 對氨氮降解率分別達到97.8%和98.5%。這與前人研究結(jié)果一致, 郭靜等[19]從養(yǎng)殖水體中篩選出的凝結(jié)芽孢桿菌, 對氨氮和亞硝酸鹽氮的去除率分別達80.1%和91.2%, 具有較好的水質(zhì)凈化作用[19]。宋增福等[10]從對蝦養(yǎng)殖池塘中篩選出的凝結(jié)芽孢桿菌, 能夠在14h內(nèi)將亞硝酸鹽氮由10 mg/L降至0[10]。周文喆等[9]從河邊污泥中富集分離得到了一株降解氨氮的優(yōu)勢菌株, 鑒定為芽胞桿菌屬, 在24h內(nèi)可達到79.70%的降解率[9]。此外, 腸桿菌(Enterobactersp.)[11]、戈登氏菌(Gordonia)、紅球菌(Rhodococcus)[12]、溶桿菌(Lysobacter)、假單胞菌(Pseudomonas)[20,21]、產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes)[22]、反硝化細菌(Denitrificans)[23]等菌株被篩選出來, 均可不同程度地降解氨氮。

氨氮是養(yǎng)殖水體富營養(yǎng)化和水生動物疾病的重要原因[24,25], 篩選水樣或泥樣中能高效降解氨氮的細菌, 并加以優(yōu)化培養(yǎng)再用于調(diào)控水質(zhì)是現(xiàn)在的主要研究方向。目前, 常用的篩選方法主要有3種:傳統(tǒng)培養(yǎng)法、指示劑法和改變培養(yǎng)條件法。胡君利等[26]比較了氨氮降解菌的篩選方法, 結(jié)果證明通過傳統(tǒng)培養(yǎng)法篩選往往無法得到目的菌株。也有研究通過在培養(yǎng)基中添加指示劑, 來推測目的菌株的存在[27]。改變培養(yǎng)條件法是現(xiàn)在常用的一種方法, 即根據(jù)所要篩選的菌株生長特性, 設(shè)計、優(yōu)化一種或多種因素, 使目的菌株成為培養(yǎng)基中的優(yōu)勢菌株, 從而迅速篩選出來。對于氨氮降解菌來說,溫度、溶氧、pH、氨氮濃度等條件的優(yōu)化都有可能使氨氮降解菌成為混合培養(yǎng)物中的優(yōu)勢菌株, 從而更易被分離。本研究即是在培養(yǎng)基中添加NH4Cl作為唯一氮源進行篩選得到了高效降解氨氮的菌株。

對篩選出的2株凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)條件優(yōu)化結(jié)果表明, 2菌株受pH變化影響不大, pH6.0—8.5時,A600值始終保持在2左右; 最適溫度應(yīng)該在35—40℃左右; 在一定范圍內(nèi)(鹽度低于30‰), 鹽度對復合菌的生長情況影響不大; C/N為15時兩株菌生長狀況最好, C/N為20時xh1菌株依舊生長良好。結(jié)果說明, 篩選到的兩株凝結(jié)芽孢桿菌pH、C/N適應(yīng)范圍廣, 并且耐高溫、高鹽。王彥波等[28]也認為篩選自南美白對蝦養(yǎng)殖池塘的凝結(jié)芽孢桿菌對溫度、pH和鹽度具有廣泛的適應(yīng)性[28]。這些優(yōu)點都有利于凝結(jié)芽孢桿菌在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。

3.2 復合菌對水質(zhì)的調(diào)控

圖 5 五種微生態(tài)制劑對養(yǎng)殖水體藻類的影響Fig. 5 Effects of five kinds of probiotics on algae in aquaculture water

將篩選出的菌株潑灑于水體中對水質(zhì)進行調(diào)控, 是益生菌的應(yīng)用之一, 也是本研究篩選菌株的目的之一。在潑灑到水體之前, 通過灌服試驗檢測了所篩選出的2株凝結(jié)芽孢桿菌對養(yǎng)殖動物的安全性。灌服菌液濃度1×105—1×109的凝結(jié)芽孢桿菌,14d內(nèi)黃河鯉攝食能力和行動狀態(tài)均正常, 均未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象, 與灌服生理鹽水的對照組無差異, 表明菌液是安全的。

以前的研究已證明, 單一菌種微生物在控制、凈化水質(zhì)方面都有一定的局限性[29—31], 因此在實際生產(chǎn)中, 往往使用2種或2種以上的有益菌共同發(fā)揮作用。本研究將前期篩選的枯草芽孢桿菌與本文篩選的凝結(jié)芽孢桿菌配制成復合菌, 用來調(diào)控養(yǎng)殖水體的水質(zhì)。將這2種芽孢桿菌聯(lián)合使用, 枯草芽孢桿菌首先將殘餌、糞便等分解為氨氮等小分子物質(zhì), 凝結(jié)芽孢桿菌再進一步將氨氮等分解為硝酸鹽等無機物, 以此來調(diào)控養(yǎng)殖水體的水質(zhì)。本試驗結(jié)果顯示復合菌具有良好的降氨氮特性, 從試驗第1天開始, 復合菌組的氨氮含量逐漸降低, 第11天以后, 含量低于1 mg/L; 并且相較于其他各組, 復合菌組的氨氮含量一直處于最低水平, 說明復合菌降解氨氮效果快速并且持續(xù)性較好。在氨氮含量下降的同時, 亞硝酸鹽含量有上升的趨勢, 試驗5d后各組的亞硝酸鹽含量均有所升高, 可能是氨氮氧化成亞硝酸鹽所造成的。并且復合菌組與酵母菌組亞硝酸鹽含量呈現(xiàn)一種先升后降的趨勢, 在試驗的第18天含量明顯降低, 說明添加的復合菌有一定的降亞硝酸鹽效果, 但比較緩慢。在后續(xù)復合菌研制試驗中, 應(yīng)添加硝化或反硝化細菌, 以盡快降低亞硝酸鹽含量。

3.3 復合菌對藻類數(shù)量的影響

本文發(fā)現(xiàn), 從第9天開始添加復合菌與芽孢桿菌組藻類數(shù)量高于其他各組, 達到7萬個/mL左右;在第14天, 復合菌與芽孢桿菌組藻類數(shù)量顯著高于其他各組, 分別達到8和9萬個/mL左右, 大約為其他組的2倍, 說明添加復合菌與芽孢桿菌對藻類數(shù)量的增加效果顯著(圖 5)。其原因是由于藻類與細菌之間的互利共生關(guān)系, 藻類是生活在水體中的的光合自養(yǎng)型生物, 通過光合作用將二氧化碳轉(zhuǎn)換為有機物, 為異養(yǎng)生物(如細菌)提供營養(yǎng)物質(zhì), 并產(chǎn)生氧氣提供給需氧細菌, 然后細菌分解有機物使之轉(zhuǎn)化成藻類生長的養(yǎng)分無機鹽類, 如: 硝酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽等, 并釋放二氧化碳, 以供藻類光合作用[32,33]。富麗靜等[34]將以芽孢桿菌為主體的復合微生態(tài)制劑潑灑到養(yǎng)殖水體中, 發(fā)現(xiàn)可促進單細胞藻類硅藻、裸藻生長使其成為優(yōu)勢菌群。林東年等[35]認為在羅非魚池中投放芽孢桿菌復合制劑可使綠藻保持優(yōu)勢地位。石洪玥等[36]證明向池塘中潑灑高效微生態(tài)制劑, 對養(yǎng)魚池塘中優(yōu)勢藻類藍藻的繁殖有明顯的抑制作用, 對綠藻和硅藻的繁殖有明顯的促進作用。張慶等[37]研究發(fā)現(xiàn)在養(yǎng)殖環(huán)境中添加芽孢桿菌制劑可增加硅藻數(shù)量。以上研究表明芽孢桿菌可促進硅藻等單細胞藻類的生長, 單細胞藻類通過光合作用可為養(yǎng)殖水環(huán)境提供氧氣,供水生動植物等使用, 如此反復形成一個良性循環(huán)。

光合細菌具有抑藻作用已是大家的共識, 本研究也發(fā)現(xiàn)從第5天開始, 潑灑光合細菌組藻類數(shù)量明顯低于其他試驗組及對照組, 差異顯著; 第14天,光和細菌組藻類數(shù)量與復合菌、芽孢桿菌組差異極顯著。這與陳小晨等[38]研究結(jié)果一致。