馬學艷，徐 良，聞海波，金 武，徐 跑1,,，華 丹，顧若波1,, *

(1.中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心，農(nóng)業(yè)部淡水魚類遺傳育種與養(yǎng)殖生物學重點開放實驗室，江蘇 無錫 214081；2.南京農(nóng)業(yè)大學無錫漁業(yè)學院，江蘇 無錫 214081；3.中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心，中美淡水貝類種質(zhì)資源保護及利用國際聯(lián)合實驗室，江蘇 無錫 214081)

【研究意義】紫黑翼蚌(Potamilusalatus)也稱紫踵劈蚌、翼溪蚌，屬大型淡水貝類，分布于美國南北的湖泊和河流，主要在美國密西西比河、五大湖、墨西哥灣等流域。Hua等[1]對紫黑翼蚌培育珍珠試驗表明：紫黑翼蚌能夠成功培育紫黑色珍珠，且光滑細膩，極富光澤。中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心2012年從美國引進了一批人工繁育的紫黑翼蚌苗種，進行人工馴養(yǎng)技術研究。通過近幾年的人工馴養(yǎng)，紫黑翼蚌親本成活率達80 %，初步建立了紫黑翼蚌人工繁育基礎種群，為進一步開展人工繁育提供了重要條件和保障?！厩叭搜芯窟M展】紫黑翼蚌在北美洲為常見淡水蚌類，且資源量比較穩(wěn)定，與其他瀕危蛘類相比，其人工繁育、基礎生物學相關研究較少，僅見紫黑翼蚌繁殖周期[2-3]、天然寄主魚、野生紫黑翼蚌的人工馴養(yǎng)和育珠性能的初步評估[1,4]。紫黑翼蚌鉤介幼蟲需寄生到寄主魚上才能變態(tài)發(fā)育稱稚蚌，淡水石首魚被認為是紫黑翼蚌唯一的天然寄主魚[4-7]。由于我國缺乏淡水石首魚，極大地制約著我國紫黑翼蚌苗種的人工繁育。近年來，研究者利用體外培養(yǎng)技術已對42個物種培養(yǎng)成功且獲得較高的變態(tài)率[8]，在國內(nèi)，聞海波等[9]對三角帆蚌鉤介幼蟲進行了體外培養(yǎng)試驗，并已取得了一定的進展，馬學艷等[10]改進了體外培養(yǎng)配方，顯著提高了褶紋冠蚌變態(tài)率。【本研究切入點】本課題組利用體外培養(yǎng)技術成功培育出紫黑翼蚌稚蚌，并獲得較高變態(tài)率，但稚蚌成活率較低，如何提高紫黑翼蚌稚蚌的成活和生長是我國發(fā)展淡水紫黑珍珠養(yǎng)殖業(yè)的關鍵技術之一?！緮M解決的關鍵問題】本實驗選取體外培養(yǎng)的紫黑翼蚌稚蚌，探究餌料、底質(zhì)與養(yǎng)殖密度對紫黑翼蚌稚蚌成活與生長的影響，評估和篩選出紫黑翼蚌適宜的餌料、底質(zhì)和養(yǎng)殖密度，從而提高紫黑翼蚌稚蚌成活率和生長速度，本研究結果將對紫黑翼蚌的苗種規(guī)?；庇哂兄匾笇r值。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗用紫黑翼蚌稚蚌是通過體外培養(yǎng)技術培育同一母蚌鉤介幼蟲所得的稚蚌，實驗地點在中國水產(chǎn)科學研究院淡水漁業(yè)研究中心實驗室，根據(jù)張家康等[11]實驗結果，本實驗養(yǎng)殖餌料選為微擬球藻(Nannochloropsisoculata)，其中藻1(機械破壁藻)購買于美國Reed Mariculture Inc，藻2(未破壁藻)購買于煙臺海融微藻養(yǎng)殖有限公司，2種藻均為濃縮藻液；實驗所用底質(zhì)為黃泥和塘泥，黃泥為未施肥的花園土，塘泥取自池塘中淺水表層泥。使用前，分別取200 mL放入5 L水中，攪勻，過200目篩網(wǎng)備用。使用時攪拌均勻添加。實驗用自動養(yǎng)殖系統(tǒng)養(yǎng)殖稚蚌，養(yǎng)殖用池塘水經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，水溫控制在(24±1) ℃，氣泵分管懸吊于養(yǎng)殖箱上方進行增氧。

1.2 實驗方法

1.2.1 餌料和底質(zhì)對稚蚌成活和生長的影響 取殼長(1.113 ± 0.034)mm、殼高(0.640 ± 0.038)mm的紫黑翼蚌稚蚌，設置A1、A2、A3 3個處理組，每組3個重復，每個重復30只稚蚌。將稚蚌分別放在養(yǎng)殖箱(45 cm×32 cm×16 cm)中培育，養(yǎng)殖水體為13 L，養(yǎng)殖箱置于循環(huán)保溫系統(tǒng)中，水溫控制在(24 ± 1) ℃，在養(yǎng)殖箱排水孔處安裝200目篩網(wǎng)，確保稚蚌在換水時不丟失。循環(huán)系統(tǒng)每天上午換水1次，換水后投喂藻類并添加底質(zhì)，其中A1組(塘泥、藻1)、A2組(黃泥、藻1)、A3組(塘泥、不投喂)，參考華丹等[12]實驗結果，A1、A2組藻類投喂密度為2×105cells/mL。養(yǎng)殖30 d后，將稚蚌洗出放于培養(yǎng)皿中并在光學顯微鏡(Olympus CX41)下拍照、測量稚蚌殼長和殼高(0.001 mm)，統(tǒng)計成活率。

殼長日生長率=(終末殼長-初始殼長)/生長天數(shù)×100 %

殼高日生長率=(終末殼高-初始殼高)/生長天數(shù)×100 %

1.2.2 2種不同處理微擬球藻對稚蚌成活和生長的影響 取殼長(2.230 ± 0.041)mm、殼高(1.236 ± 0.037)mm的紫黑翼蚌稚蚌，設置B1、B2兩個處理組，每組3個重復，每個重復30只稚蚌。其中B1組投喂藻1，B2組投喂藻2，兩組投喂密度為2×105cells/mL，以黃泥為底質(zhì)。養(yǎng)殖方式同1.2.1所述。養(yǎng)殖30 d后，將稚蚌洗出并在光學顯微鏡(Olympus CX41)下拍照、測量稚蚌殼長和殼高(0.001 mm)，統(tǒng)計稚蚌成活率，計算殼長、殼高日生長率，計算方法同1.2.1。

1.2.3 不同養(yǎng)殖密度對稚蚌成活和生長的影響 取殼長(4.245± 0.152)mm，殼高(2.368± 0.054)mm紫黑翼蚌稚蚌，設置C1、C2、C3 3個處理組，養(yǎng)殖密度分別為150、300、450只，每組設置3個重復。以黃泥為底質(zhì)，藻1作為餌料，投喂密度為2×105cells/mL。養(yǎng)殖方式參照1.2.1。具體養(yǎng)殖30 d后，統(tǒng)計稚蚌成活率，測量殼長、殼高，計算日生長率，計算方法同1.2.1。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件分析實驗數(shù)據(jù)。采用One-way ANOVA 單因素方差分析法。在Excel 2007繪制相關圖表。

表1 藻類投喂和底質(zhì)對紫黑翼蚌稚蚌成活和生長的影響

注：同列中標有不同小寫字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05),標有相同小寫字母者表示組間無顯著性差異(P>0.05)。下同。

Note: The means with different letters within the same column are significant differences at the 0.05 probability level, and the means with the same letters within the same column are not significant differences, the same as below.

表2 不同來源微擬球類對紫黑翼蚌稚蚌成活和生長的影響

2 結果與分析

2.1 餌料和底質(zhì)對稚蚌成活和生長的影響

如表1所示：以池塘底泥為底質(zhì)，投喂組(A1)的成活率最高，為96.67 %± 1.92 %，以池塘底泥為底質(zhì)，不投喂藻類餌料組(A3)的成活率最低，為86.67 %± 1.93 %；以黃泥為底質(zhì)，投喂組(A2)的殼長和殼高的日生長率最高，分別為9.588 %± 0.587 %和9.041 % ± 0.552 %；單因素方差分析表明：A1、A2、A3組的成活率無顯著性差異(P>0.05)；A1、A2組殼長、殼高(殼長、殼高日生長率)顯著高于A3組(P<0.05)；A1、A2組殼長、殼高(殼長、殼高日生長率)無顯著性差異(P>0.05)。

2.2 2種不同處理微擬球藻對稚蚌成活和生長的影響

如表2所示：B1組成活率為100.00 %，B2組為98.90 % ± 1.10 %。單因素方差分析表明： B1和B2組的成活率無顯著性差異(P>0.05)；B1、B2組的殼長、殼高、日生長率無顯著性差異(P>0.05)。

2.3 不同養(yǎng)殖密度對稚蚌成活和生長的影響

如表3所示：C1、C2、C3組成活率都為100 %。C1組的殼長日生長率最高，為19.107 %± 0.429 %；C3組的殼長日生長率最低，為14.942 % ± 0.170 %；C2組的殼高日生長率最高，為10.410 %± 0.303 %；C3組的殼高日生長率最低，為8.693 % ± 0.161 %。單因素方差分析表明：C1、C2、C3組的成活率無顯著性差異(P>0.05)；C1與C2組的殼長、殼高、日生長率無顯著性差異(P>0.05)，顯著高于C3組(P>0.05)。

3 討 論

3.1 底質(zhì)對貝類成活和生長的影響

底質(zhì)在底棲貝類成活和生長過程中扮演著十分重要的角色，合適的底質(zhì)往往會給貝類提供一個優(yōu)良的生長環(huán)境。許章程等[13]在研究棲息底質(zhì)對縊蟶(Sinonovaculaconstrict)稚貝生長和成活的影響中，選用了粉砂+泥、粉砂、砂、無泥砂、泥質(zhì)砂、泥、砂質(zhì)泥7種底質(zhì)做試驗，其結果表明了不同底質(zhì)對縊蟶稚貝生長和成活有影響；華丹等[12]探究了底泥、細沙、石灰石及無底質(zhì)條件下對Villosairis稚蚌的成活及生長影響，結果發(fā)現(xiàn)底泥更適合作為V.iris稚蚌的底質(zhì)。本實驗比較了黃泥和塘泥對紫黑翼蚌稚蚌成活與生長的影響，結果顯示以黃泥和塘泥為底質(zhì)對紫黑翼蚌稚蚌的成活及生長發(fā)育無顯著影響，筆者推測：不同蚌類對底質(zhì)具有選擇性，底質(zhì)主要的作用是為稚蚌的生長提供良好的生長環(huán)境，減少敵害生物的影響，從而有利于稚蚌的成活和生長。

表3 不同養(yǎng)殖密度對紫黑翼蚌稚蚌成活和生長的影響

3.2 藻類對貝類成活和生長的影響

國內(nèi)外有不少學者對蚌科物種進行過食性分析，藻類被認為是稚蚌不可或缺的食物。Tantichodok等[14]認為淡水蚌類的餌料一般是由藻類、浮游動物、細菌以及底泥等組成；Meghann等[15]對北美帽蚌(Epioblasmacapsaeformis)的食性研究發(fā)現(xiàn)藻類占其食物組成的90 %左右；張家康等[11]對三角帆蚌稚蚌的養(yǎng)殖實驗表明：在微擬球藻、小球藻、卵囊藻、四尾柵藻四種藻中，微擬球藻養(yǎng)殖效果最好，投喂餌料比不投喂餌料組成活率高、生長快，本實驗采用微擬球藻對紫黑翼蚌稚蚌進行養(yǎng)殖實驗，投喂組殼長殼高顯著大于不投喂組，表明在紫黑翼蚌稚蚌的培育過程中使用微擬球藻對其生長有顯著的促進作用。

微擬球藻屬于褐藻門，大眼藻綱，單珠藻科，其富含不飽和脂肪酸(特別是EPA)是很好的水產(chǎn)餌料，有助于魚蝦等水產(chǎn)品的生長。微擬球藻的細胞壁有兩層，內(nèi)層是纖維類組成，外層由藻膠組成。細胞壁內(nèi)還含有褐藻糖膠為碳水化合物，它能使褐藻形成粘液質(zhì)，使外面的藻體免于干燥。在實驗中B1、B2組中使用了藻1和藻2兩種不同處理方式的微擬球藻，結果表明兩組的殼長、殼高無顯著性差異，筆者推測微擬球藻的細胞壁不影響紫黑翼蚌稚蚌對該藻類的消化和吸收，在紫黑翼蚌的人工培育過程中，可使用國內(nèi)生產(chǎn)的微擬球藻投喂稚蚌，提高稚蚌成活率和生長率，降低餌料成本。

3.3 養(yǎng)殖密度對水產(chǎn)苗種成活和生長的影響

在水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中，養(yǎng)殖密度對水產(chǎn)品的成活和生長有著顯著影響，是實際生產(chǎn)中最為重要養(yǎng)殖技術參數(shù)之一。何毛賢等[16]對馬氏珠母貝選育的稚貝群體生長存活發(fā)現(xiàn)高密度組(200只/籠)的生長較低密度組(30、40、50只/籠)慢，認為籠養(yǎng)密度過大會引起水流流速減緩導致水流不通暢，以及餌料爭奪等問題，從而影響貝體的生長存活；蕭云樸等[17]對蝦夷扇貝不同養(yǎng)殖密度實驗，結果顯示隨養(yǎng)殖密度的提高，殼高、體質(zhì)量等參數(shù)不斷下降，養(yǎng)殖密度對其影響顯著；本實驗比較了不同的養(yǎng)殖密度下對紫黑翼蚌稚蚌的成活和生長的影響，結果顯示：C1、C2組無顯著性差異，C3組的殼長、殼高顯著低于C1、C2組，推測在實驗水體13L中，適宜的養(yǎng)殖密度為300只左右，密度升高，稚蚌生長緩慢的原因，可能是：①養(yǎng)殖密度增大，稚蚌攝食的餌料較少，②隨著放養(yǎng)密度的增加，水體氨氮濃度、亞硝酸鹽濃度顯著升高，溶解氧濃度則隨幼蟲密度的增大呈現(xiàn)下降的趨勢，養(yǎng)殖密度會影響水質(zhì)從而影響幼蟲的存活和生長，具體原因有待進一步的實驗來證實。