(河南省水產(chǎn)技術(shù)推廣站,鄭州450008)

長期以來，由于我國沒有開展水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病原菌耐藥性普查，沒有掌握其對各種抗生素藥物敏感性變化，導(dǎo)致養(yǎng)殖業(yè)者沒有科學(xué)用藥依據(jù)，水產(chǎn)品質(zhì)量安全水平得不到有效保障，水產(chǎn)養(yǎng)殖綠色發(fā)展受到制約，因此，開展水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病原菌耐藥性普查刻不容緩。為了了解河南省內(nèi)水產(chǎn)養(yǎng)殖動物病原菌耐藥性狀況，同時幫助執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師（水生）科學(xué)選擇和使用水產(chǎn)抗菌素類藥物，2018年4～10月，從河南省人工養(yǎng)殖的黃河鯉和斑點(diǎn)叉尾鮰魚體內(nèi)分離致病菌，測定其對水產(chǎn)用抗菌素類藥物的敏感性，現(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1 材料與方法

1.1 供試藥物

供試藥物為硫氰酸紅霉素、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、鹽酸土霉素、磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑、鹽酸環(huán)丙沙星、硫酸新霉素、磺胺二甲氧嘧啶、交沙霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氨芐西林鈉。測試所用抗菌類藥物樣品為原料藥，均由全國水產(chǎn)技術(shù)推廣總站提供。

1.2 供試菌株

2018年4～10月，分別從河南省鄭州市中牟縣、滎陽市王村、洛陽市孟津縣、新鄉(xiāng)市延津縣和開封市龍亭區(qū)等地池塘飼養(yǎng)的黃河鯉和斑點(diǎn)叉尾鮰體內(nèi)，分離到66株菌株，包括5株維氏氣單胞菌(Aeromonas veronii)、5株嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)、2株溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)、1株簡氏氣單胞菌(Aeromonas jandaei)、7株不動桿菌(Acinetobacter spp.)、2株芽孢桿菌（Bacillus spp.）、5株其他桿菌、17株微球菌（Micrococcus spp.）、9株葡萄球菌（Staphylococcus spp.）和13株其他細(xì)菌。

1.3 供試菌株最小抑菌濃度的測定

將供試藥物采用適宜的溶媒溶解后，用滅菌生理鹽水分別稀釋至所需濃度。在無菌條件下，取96孔板，在第1～12孔分別加入100 μL的MH液體培養(yǎng)基，取100 μL的藥物原液加入第一孔中，混勻后吸取100 μL加入第二孔，混勻后吸取100 μL至第3孔，以此方法稀釋至第11孔，吸取100 μL棄掉。分別在1～10孔、12孔加入100 μL濃度約為1.2*106cfu/mL的活菌液，其中11孔為不加菌液對照，12孔為不加藥物對照，每種藥物做兩個平行，置于28℃培養(yǎng)5 d，通過肉眼判定，無菌生長孔對應(yīng)最低藥物濃度，即為藥物的最小抑菌濃度 (minimum inhibitory concentration，MIC)。

2 結(jié)果

2.1 氣單胞菌對抗菌藥物的感受性

13株氣單胞菌包括5株維氏氣單胞菌、5株嗜水氣單胞菌、2株溫和氣單胞菌和1株簡氏氣單胞菌，對各種抗菌藥物感受性如表1所示。由表1可以看出，氣單胞菌對磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧嘧啶、甲砜霉素、氟苯尼考相對敏感，對磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、硫酸新霉素敏感性相對較低。

表1 氣單胞菌對各種抗菌藥物的感受性

2.2 1桿菌對抗菌藥物的感受性

14株桿菌包括7株不動桿菌、2株芽孢桿菌和5株其他桿菌（放線桿菌、節(jié)桿菌、金黃桿菌、鞘脂桿菌、微小桿菌），對各種抗菌藥物感受性如表2所示。由表2可以看出，所分離的桿菌對恩諾沙星、鹽酸土霉素、磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧嘧啶相對敏感，對強(qiáng)力霉素、硫酸新霉素、甲砜霉素、磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶敏感性相對較低。

表2 桿菌對各種抗菌藥物的感受性

2.3 微球菌對各種抗菌藥物的感受性

17株微球菌對抗菌藥物的感受性見表3。由表3可以看出，所分離出的球菌對恩諾沙星、鹽酸土霉素、磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧嘧啶相對敏感，對強(qiáng)力霉素、磺胺嘧啶、硫酸新霉素、甲砜霉素敏感性相對較低。

表3 微球菌對抗菌藥物的感受性

2.4 葡萄球菌對各種抗菌藥物的感受性

9株葡萄球菌對抗菌藥物的感受性見表4。由表4可以看出，所分離出的球菌對恩諾沙星、磺胺甲惡唑、鹽酸環(huán)丙沙星、磺胺二甲氧嘧啶，交沙霉素相對敏感，對硫氰酸紅霉素、磺胺甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、強(qiáng)力霉素、硫酸新霉素敏感性相對較低。

表4 葡萄球菌對抗菌藥物的感受性

2.5 其他

在試驗(yàn)過程中還分離到13株其他細(xì)菌，對抗菌藥物的感受性如表5所示。由圖5可以看出，分離出的其它細(xì)菌對恩諾沙星、磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧嘧啶相對敏感，對強(qiáng)力霉素、磺胺間甲氧嘧啶、硫銨新霉素敏感性相對較低。

表5 13株其他細(xì)菌對抗菌藥物的感受性

3 分析與建議

3.1 關(guān)于水生動物致病菌藥物感受性的分析

本次分離到的13株氣單胞菌，對磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧嘧啶、氟苯尼考、甲砜霉素MIC50在0.78～3.12 mg/L之間，在所測試的抗菌藥物中，為最敏感的藥物；對強(qiáng)力霉素、磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、硫酸新霉素、氨芐西林鈉MIC50均在100 mg/L以上，為最不敏感性藥物；對交沙霉素、恩諾沙星的MIC50在6.25～12.5 mg/L之間；對硫氰酸紅素、鹽酸土霉素、鹽酸環(huán)丙沙星敏感度相似，與交沙霉素、恩諾沙星相比更為不敏感。其他菌株對各種抗菌藥物的感受性與氣單胞菌具有相似的結(jié)果，對強(qiáng)力霉素、磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、硫酸新霉素等最不敏感，對磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧嘧啶、氟苯尼考等最為敏感。

3.2 關(guān)于目前選擇用藥的建議

目前的檢測結(jié)果表明，養(yǎng)殖戶在選擇用藥時，磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧嘧啶、氟苯尼考等為首選抗菌藥物，甲砜霉素、交沙霉素、恩諾沙星可以考慮選用，盡量不要選擇強(qiáng)力霉素、磺胺嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、硫酸新霉素等藥物。在生產(chǎn)實(shí)際中，對于養(yǎng)殖業(yè)者，一旦發(fā)生魚病，最正確的給藥方式是采集患病魚類的致病菌，開展藥物敏感性試驗(yàn)，確定最佳的用藥品種和劑量。