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      miR-424在胃癌組織中的表達及其臨床意義

      2019-08-15 02:45:11靳楓余少康王樹濱
      中國醫(yī)學創(chuàng)新 2019年7期
      關鍵詞:存活引物胃癌

      靳楓 余少康 王樹濱

      【摘要】 目的:檢測胃癌組織中miR-424的表達,并探討其與胃癌臨床病理特征及預后的關系。方法:選取本院收治的55例胃癌患者的胃癌組織樣本及相應癌旁組織,應用RT-PCR法檢測胃癌組織和癌旁組織中miR-424 mRNA表達,分析其與胃癌臨床病理特征間的關系。結(jié)果:4例患者隨訪失敗,研究實際完成51例;胃癌組織中miR-424 mRNA陽性檢出率為66.67%,明顯高于癌旁組織的23.53%(P<0.01);胃癌組織中miR-424 mRNA的表達高于癌旁組織(P<0.01);胃癌組織中miR-424 mRNA的表達與胃癌患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑無關(P>0.05),與浸潤深度、TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P<0.01);1年期隨訪發(fā)現(xiàn),死亡15例,存活36例;死亡組在入院時胃癌組織中miR-424 mRNA表達高于存活組(P<0.01)。結(jié)論:miR-424 mRNA在胃癌組織中高表達,與胃癌的臨床病理特征密切相關,可能是評判胃癌患者預后的有效指標。

      【關鍵詞】 miR-424; 胃癌; 臨床病理特征

      【Abstract】 Objective:To observe miR-424 expression of gastric cancer tissue,and investigate the relationship between miR-424 and clinicopathological parameters of gastric cancer and prognosis.Method:A total of gastric cancer tissue samples and corresponding adjacent tissues from 55 patients with gastric cancer in our hospital were selected.The expression of miR-424 in gastric cancer tissues and adjacent tissues was detected by RT-PCR,and the relationship between miR-424 and clinicopathological features of gastric cancer was analyzed.Result:4 patients failed in follow-up,and 51 patients actually completed the study.The positive rate of miR-424 in gastric cancer tissues was 66.67%,which was significantly higher than 23.53% in adjacent tissues(P<0.01).The expression of miR-424 in gastric cancer tissues was higher than that of adjacent tissues(P<0.01).The expression of miR-424 in gastric cancer tissues was not related to age,sex,location of tumors and diameter of tumors(P>0.05),but to depth of invasion,TNM stage,differentiation degree and lymph node metastasis(P<0.01).One-year follow-up showed that 15 patients died and 36 survived,and the expression of miR-424 in gastric cancer tissues of the death group was higher than that of the survival group at admission(P<0.01).Conclusion:Expression of miR-424 mRNA of gastric cancer tissues is high,closely related to clinicopathological parameters of gastric cancer,and may be the effective index for evaluating the prognosis.

      【Key words】 miR-424; Gastric cancer; Clinicopathological features

      First-authors address:Peking University Shenzhen Hospital,Shenzhen 518000,China

      doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2019.07.032

      胃癌是一種最常見惡性腫瘤,患者的預后差,其致死率位居整個惡性腫瘤的第3位,對人類的健康、生存構(gòu)成了嚴重威脅[1]。據(jù)報道早期胃癌的5年期生存率超過90%,但在進展期胃癌的5年生存率僅有5%~20%[2],臨床資料顯示絕大多數(shù)胃癌患者在確診時已屬中晚期,失去了手術的時機,同時存在放化療效的效果欠佳及不良反應重等[3]。消化道造影、胃鏡是診斷胃癌的金標準,但有操作較為復雜、患者耐受差以及價格昂貴等缺點[3]。腫瘤標志物是早期確診胃癌的有效指標,有操作便捷、創(chuàng)傷小、結(jié)果及時可靠等優(yōu)點,但目前胃癌腫瘤標志物特異性及敏感性較差[4]。miR-424是miR-16家族成員,其基因位于染色體Xq26.3上,Xq26區(qū)域與多種腫瘤的形成、發(fā)展密切相關。研究表明,miR-424在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、預后中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用,而且在非小細胞肺癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、腎癌等多種腫瘤中均有表達。然而miR-424在胃癌組織中表達的相關研究目前國內(nèi)外尚鮮見報道。本研究通過逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)方法,檢測miR-424 mRNA在胃癌組織中的表達情況,并探討其和胃癌臨床病理學參數(shù)及患者預后的關系?,F(xiàn)報道如下。

      1 資料與方法

      1.1 一般資料 選取2016年2月-2017年2月本院收治的55例胃癌患者的胃癌組織樣本,均經(jīng)病理證實為胃癌,術前均未接受放療、化療等輔助治療,且有完整臨床病理資料;同時取對應癌旁組織(距癌組織邊緣≥5 cm)為對照組,均經(jīng)病理證實為正常胃組織。本研究得到本醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會同意。

      1.2 方法

      1.2.1 試劑與設備 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、RT-PCR試劑盒購由美國Sigma公司提供;TRIzol試劑購由碧云天生物技術研究所提供;miR-424、β-Actin引物購于上海生工生物工程有限公司。

      1.2.2 RT-PCR檢測胃癌及癌旁組織中miR-424 mRNA表達 具體檢測方法:將冷凍的胃癌組織及癌旁周圍正常組織勻漿,Trizol法提取胃癌及癌旁組織中總RNA,向RNA沉淀中加入焦炭酸二乙酯,靜置于冰上30 min,置于-80 ℃保存;測定樣品中RNA的純度、濃度,取適量RNA反應物行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA(反轉(zhuǎn)錄程序:30 ℃反應10 min,42~60 ℃反應30 min,85℃和5 ℃分別反應5 min),采取SYBP Green premix Ex taq試劑盒檢測胃癌和癌旁組織中miR-424 mRNA表達;PCR引物為miR-424上游引物:5-gtcgtatccagtgcagggtccgaggtattcgcactgg-3,下游引物:5-cgaacgagcagcaattcatg-3;β-Actin為內(nèi)參照,上游引物:5-gcgagaagatgacccaccacc-3,下游引物:5-atgtcacgcacgatttcctatta-3;PCR反應體系:95 ℃預變性5 min,再行38個循環(huán)(94 ℃變性30 s,54 ℃退火45 s,72 ℃延伸30 s),72 ℃延伸反應5 min。每個組織標本重復擴增3次,PCR電泳結(jié)果采用凝膠圖像掃描系統(tǒng)檢測各電泳條帶的吸光度值,計算miR-424 mRNA產(chǎn)物量與內(nèi)參β-actin mRNA產(chǎn)物量比值即為本研究結(jié)果。

      1.3 觀察指標 (1)比較胃癌組織和癌旁組織中miR-424 mRNA陽性率。(2)比較胃癌組織和癌旁組織中miR-424 mRNA表達。(3)分析胃癌組織中miR-424 mRNA表達與患者的臨床病理特征的關系。(4)對患者進行1年期隨訪,記錄死亡病例,比較存活患者(存在組)和死亡患者(死亡組)入院時胃癌組織中miR-424 mRNA表達。

      1.4 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 18.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,計量資料用(x±s)表示,組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料以率(%)表示,比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

      2 結(jié)果

      2.1 胃癌病例篩選情況 4例患者隨訪失敗,研究實際完成51例,其中男34例,女17例;年齡52~70歲,平均(65.03±7.40)歲,≥60歲者30例,<60歲者21例;分化程度:低分化33例,中分化11例,高分化7例;部位:賁門5例,胃體18例,幽門28例;原發(fā)腫瘤最大直徑:≤5 cm者19例,>5 cm者32例;TNM分期:Ⅰ~Ⅱ期23例,Ⅲ~Ⅳ期28例;腫瘤浸潤深度:未侵及漿膜者26例,侵及漿膜者25例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:無區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例。

      2.2 胃癌組織和癌旁組織中miR-424 mRNA檢出情況 胃癌組織中miR-424 mRNA陽性檢出率為66.67%(34/51),明顯高于癌旁組織的23.53%(12/51),差異有統(tǒng)計學意義(字2=17.462,P<0.01)。

      2.3 胃癌組織和癌旁組織中miR-424 mRNA表達比較 胃癌組織中miR-424 mRNA的表達為(0.721±0.079),高于癌旁組織的(0.311±0.034),差異有統(tǒng)計學意義(t=11.260,P<0.01)。

      2.4 胃癌組織中miR-424 mRNA表達與胃癌病理特征的關系 胃癌組織中miR-424 mRNA的表達與胃癌患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑無關(P>0.05),與浸潤深度、TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P<0.01),見表1。

      2.5 死亡組和存活組miR-424 mRNA表達比較 1年期隨訪發(fā)現(xiàn),死亡15例,存活36例;死亡組在入院時胃癌組織中miR-424 mRNA表達為(0.833±0.103),高于存活組的(0.609±0.07),差異有統(tǒng)計學意義(t=11.170,P<0.01)。

      3 討論

      我國是胃癌的高發(fā)區(qū),其發(fā)病率和死亡率均高居整個惡性腫瘤的前列。目前對胃癌形成、發(fā)展的認知不斷深入,如大量腫瘤標志物的檢測有助于臨床診斷胃癌,但現(xiàn)有胃癌標志物的敏感性和特異性較差,探索新的胃癌標志物仍是提高胃癌確診的重要醫(yī)學問題[4-6]。胃癌的發(fā)生機制尚未闡明,癌基因和抑癌基因的改變是其重要調(diào)控機制,機體內(nèi)這些基因的改變對胃癌的生物學行為及其預后有重要影響[7-8]。miR-16家族主要包括miR-15a/b、miR-16、miR-195、miR-424等成員,參與細胞存活、增殖及凋亡等過程,其中miR-424基因位于染色體Xq26.3,具體位置為10:133680644-133680741,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、治療預后聯(lián)系密切[9]。文獻[10]報道m(xù)iR-424與一些惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移相關,且對不同腫瘤其侵襲轉(zhuǎn)移的作用有所差異,即促進或抑制癌細胞轉(zhuǎn)移。

      miR-424在不同癌細胞中的作用機制不盡相同。在宮頸癌細胞中,miR-424的低表達可降低基質(zhì)金屬蛋白酶9活性,從而抑制細胞侵襲轉(zhuǎn)移[11-12];同時宮頸癌中miR-424低表達,也可促進靶基因細胞周期檢測點激酶1的表達,引起細胞周期G1/S受阻,關閉細胞分裂周期,導致細胞增殖停滯[11-12]。SOCS6有負性調(diào)控細胞因子信號通路效應,抑制miR-424表達可上調(diào)靶基因SOCS6表達,同時抑制下游ERK信號通路,促進胰腺癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移[13]。在結(jié)腸癌中,miR-424可激活mTORC2信號通路,該信號通路具有調(diào)控細胞生長的作用,促進腫瘤細胞生長[14]。腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移與血管新生密切相關,當原位瘤體積超過1 mm3,需刺激血管生成及通過血管通道代謝途徑,以促進腫瘤生長[5]。研究發(fā)現(xiàn),非小細胞肺癌患者中miR-424的表達異常,且與組織血管的增生明顯相關,miR-424過表達通過促進血管增生,從而促進腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移[15]。提示miR-424可能是胃癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移的有效分子標志。

      本研究應用RT-PCR檢測顯示,胃癌組織中miR-424 mRNA陽性檢出率為66.67%,明顯高于癌旁組織的23.53%(P<0.01);胃癌組織中miR-424 mRNA的表達高于癌旁組織(P<0.01);胃癌組織中miR-424 mRNA的表達與胃癌患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑無關(P>0.05),與浸潤深度、TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(P<0.01);1年期隨訪發(fā)現(xiàn),死亡15例,存活36例;死亡組在入院時胃癌組織中miR-424 mRNA表達高于存活組(P<0.01)。上述結(jié)果從基因轉(zhuǎn)錄水平說明了miR-424表達可能是臨床評價胃癌臨床病理特征及患者治療預后的有效指標。

      綜上所述,miR-424 mRNA在胃癌組織中高表達,與胃癌的分化程度等臨床病理特征密切相關,進一步分析發(fā)現(xiàn)miR-424的過度表達與患者的預后相關,因此,檢測胃癌組織中miR-424 mRNA的表達有助于胃癌的診斷及預后判斷,但目前miR-424對胃癌的作用機制研究較少,利用miR-424將為臨床胃癌發(fā)生發(fā)展的確診、預后評判以及藥物篩選提供新策略。

      參考文獻

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      (收稿日期:2018-07-26) (本文編輯:董悅)

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