2017—2018年張家界市手足口病病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析

田曉輝 劉晶晶 龔育平 張淳軼

[摘要] 目的 分析張家界市手足口病病原體構(gòu)成特征的變遷，為手足口病防控提供科學(xué)依據(jù)。方法 收集2017—2018年張家界市手足口病臨床診斷患者的咽拭子樣本，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)手足口病毒核酸。結(jié)果 321份咽拭子標(biāo)本中，腸道病毒核酸總陽(yáng)性檢出率為34.89%（112/321），其中EV71檢出率為3.12%，CoxA16檢出率為10.90%，未分型腸道病毒檢出率為20.87%。2017年、2018年未分型腸道病毒構(gòu)成比分別為64.71%、55.73%，所占比例明顯提高。病毒核酸陽(yáng)性標(biāo)本以<5歲兒童居多，占97.33%，男童陽(yáng)性檢出率高于女童（P<0.05）。結(jié)論 2017—2018年張家界市<5歲兒童為手足口病高發(fā)人群。各型別病毒感染同時(shí)存在，但引起流行的主要腸道病原體為未分型腸道病毒，應(yīng)加強(qiáng)手足口病的病原學(xué)檢測(cè)。

[關(guān)鍵詞] 手足口病;病原學(xué);腸道病毒核酸;實(shí)時(shí)熒光定量PCR

[中圖分類(lèi)號(hào)] R725.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-5654（2019）05（c）-0160-03

手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，主要通過(guò)消化道、呼吸道和密切接觸者等途徑傳播，好發(fā)于5歲以下兒童[1]。可引起手、足及口腔等部位的皰疹和發(fā)熱[2]，多數(shù)患兒一周自愈，少數(shù)可引起肺水腫、心肌炎和無(wú)菌性腦炎等并發(fā)癥[3]，重癥患者病情快易致死亡。引起手足口病的病毒有20多種，均屬微小核糖核酸病毒科，其中以CoxA16和EV71最為常見(jiàn)[4]。

為了了解張家界市手足口病患者的病原體特征，制定防控策略，該次對(duì)2017—2018年321例臨床診斷病人的咽拭子樣本，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法進(jìn)行EV71、CoxA16和腸道病毒的核酸檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析，有利于提出更好的預(yù)防控制措施?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1? 材料與方法

1.1? 研究材料

采集哨點(diǎn)醫(yī)院手足口病患者咽拭子標(biāo)本321份，采集后放入病毒采樣管內(nèi)，4℃保存并在12 h內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。

1.2? 儀器與試劑

ABI7300熒光定量PCR儀（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司），AUI001核酸提取儀（百泰克科技有限公司）。試劑：碩世生物科技股份有限公司的病毒核酸提取試劑盒（貨號(hào)：SDK60102），柯薩奇病毒A16型（CoxA16）、腸道病毒71型和腸道病毒通用型核酸檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)：JC20302）。

1.3? 方法

①參照試劑盒使用說(shuō)明書(shū)，使用自動(dòng)核酸提取儀提取病毒RNA。

②采用腸道病毒通用型、EV71和CoxA16核酸檢測(cè)試劑盒，使用熒光定量PCR法進(jìn)行核酸檢測(cè)，同時(shí)設(shè)置陰性、陽(yáng)性和空白對(duì)照。反應(yīng)條件為：50℃、30 min;95℃、5min;按照95℃ 10 s;55℃、40 s。

③結(jié)果以Ct值≤35為陽(yáng)性。EV71、CoxA16核酸測(cè)定分別陽(yáng)性時(shí)則分別判為EV71陽(yáng)性、Cox16陽(yáng)性;當(dāng)腸道病毒通用性核酸測(cè)定陽(yáng)性，而EV71和CoxA16核酸測(cè)定分別為陰性時(shí)則判為未分型腸道病毒陽(yáng)性。

④數(shù)據(jù)采用Excel和SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述和數(shù)據(jù)處理分析，組間計(jì)數(shù)資料的比較使用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

2017—2018年采集手足口病患者咽拭子標(biāo)本321份，檢出陽(yáng)性樣本112份，檢出率為34.89%.其中EV71陽(yáng)性檢出率為3.12%，CoxA16陽(yáng)性檢出率為10.90%。見(jiàn)表1。

腸道病毒2018年總檢出率（38.61%）高于2017年總檢出率（31.29%）（P<0.05）;2018年未分型腸道病毒陽(yáng)性率（21.52%）高于2017年（20.25%）（P>0.05）;2018年CoxA16型腸道病毒陽(yáng)性率（13.29%）高于2017年（8.59%）（P>0.05）;2018年EV71型腸道病毒陽(yáng)性率（3.80%）高于2017年（2.45%）（P>0.05）;2018年未分型腸道病毒檢出率遠(yuǎn)高于EV71和CoxA16（P<0.05）;2017年、2018年未分型腸道病毒構(gòu)成比分別為64.71%、55.73%，所占比例明顯提高。

2.2? 性別分布

321例病例中男童為172例，女童為149例，男女比例為1.15：1，病毒核酸陽(yáng)性數(shù)之比為1.38：1.男童總腸道病毒檢出率（37.79%）顯著高于女童（31.54%）（P<0.05），而EV71、CoxA16及未分型腸道病毒檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)表2。

2.3? 年齡分布

實(shí)驗(yàn)室確診手足口病病例中，年齡最小的3個(gè)月，最大的11歲。實(shí)驗(yàn)室確診病例以1～3歲居多，陽(yáng)性構(gòu)成比為79.47%（表3）。

3? 討論

實(shí)時(shí)熒光定量PCR利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè) PCR進(jìn)程中產(chǎn)物總量的方法，具有特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性高和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，可用于感染性疾病的初篩，也可用于相關(guān)醫(yī)療機(jī)構(gòu)檢驗(yàn)工作中的輔助手段[5]。

利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)病毒快速、敏感的特點(diǎn)[6]，對(duì)張家界市321份手足口病病原標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示：2017年、2018年未分型腸道病毒構(gòu)成比分別為64.71%、55.73%，所占比例明顯提高，由此可見(jiàn)引起張家界市手足口病流行的主要腸道病原體為未分型腸道病毒。結(jié)果顯示，所有報(bào)告病例中男性比例高于女性，與類(lèi)似研究報(bào)道一致[7]。女童病例低于男童，可能與男童與人群接觸的機(jī)會(huì)多、不注重衛(wèi)生習(xí)慣和更為好動(dòng)等因素有關(guān)，因此需要幫助他們養(yǎng)成好的衛(wèi)生習(xí)慣和大力開(kāi)展衛(wèi)生知識(shí)宣傳，從而切斷手足口病的發(fā)生和流行[8]。另外臨床診斷病例主要集于5歲以下兒童，需加強(qiáng)此類(lèi)兒童病原學(xué)的檢測(cè)。

此次檢測(cè)，321份手足口病臨床確診病例咽拭子標(biāo)本EV陽(yáng)性檢出率僅為3.12%，比報(bào)道的陽(yáng)性檢出率偏低[9]，可能與標(biāo)本類(lèi)型、試劑和采用方法等存在差異有關(guān)。有文獻(xiàn)報(bào)道，糞便標(biāo)本與咽拭子標(biāo)本陽(yáng)性檢出率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[10，表現(xiàn)為咽拭子陽(yáng)性檢出率低。若條件允許，則采集糞便或肛拭子標(biāo)本，助于提高檢出率。

[參考文獻(xiàn)]

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[2]? 謝運(yùn)清，吳修鳳.2010-2013年棗莊市手足口病核酸檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2015，25（5）：731-734.

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[10]? 于秋麗，申悅霞，韓彩芝，等.河北省年2009年手足口病病原學(xué)研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39（8）：2026-2031.

（收稿日期：2019-02-21）

[作者簡(jiǎn)介] 田曉輝（1971-），男，土家族，湖南張家界人，本科，副主任技師，主要從事實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理工作。