分子病理學(xué)診斷技術(shù)在食管癌患者診斷中的應(yīng)用

吳長(zhǎng)發(fā)

【摘要】 目的：探討分子病理學(xué)診斷技術(shù)在食管癌患者中的診斷效果及與預(yù)后的相關(guān)性研究。方法：選取2016年5月-2017年5月本院食道癌患者64例，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組與研究組，每組各32例。對(duì)照組采用常規(guī)傳統(tǒng)的病理學(xué)診斷，研究組采用FISH檢測(cè)法。對(duì)兩組患者活檢組織中病理結(jié)果、病例等級(jí)、檢測(cè)的準(zhǔn)確度、FISH的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析檢測(cè)。結(jié)果：研究組患者病情程度顯著高于對(duì)照組（P<0.05），檢測(cè)結(jié)果表明食道癌與3號(hào)、17號(hào)染色體著絲粒異?？截愑嘘P(guān)（P<0.05）。結(jié)論：對(duì)于食管癌患者進(jìn)行診斷時(shí)，采取更為敏感的FISH檢測(cè)，顯著提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度，3號(hào)與17號(hào)染色體著絲點(diǎn)可以作為診斷食道癌的探針，分子病理學(xué)診斷技術(shù)可以進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 分子病理學(xué); 食管癌; 診斷效果; 相關(guān)性研究

【Abstract】 Objective：To investigate the effect of molecular pathology in the diagnosis of esophageal cancer and its correlation with prognosis.Method：Sixty-four patients with esophageal cancer in our hospital from May 2016 to May 2017 were selected and divided into control group and research group according to random number table method，32 cases in each group.Conventional pathological diagnosis was used in the control group and FISH was used in the study group.The pathological results，case grade，accuracy of detection and FISH detection results in biopsy tissues of the two groups were analyzed and detected.Result：The degree of illness in the study group was significantly higher than that in the control group（P<0.05）.FISH results showed that esophageal cancer could be associated with abnormal centromere copies of chromosomes 3 and 17（P<0.05）.Conclusion：For the diagnosis of esophageal cancer patients，more sensitive FISH detection can significantly improve the accuracy of detection.Chromosome 3 and 17 centromeres can be used as probes for the diagnosis of esophageal cancer.Molecular pathological diagnosis technology can be further promoted and applied.

【Key words】 Molecular pathology; Esophageal carcinoma; Diagnostic effect; Correlation study

First-authors address：Wuhan Hongshan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430070，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.13.035

食管癌屬于較為常見(jiàn)的消化道腫瘤，我國(guó)食道癌具有較高的發(fā)病率和死亡率，且該病的主要發(fā)病人群為40歲以上的中年[1]。食管癌的臨床癥狀表現(xiàn)為咽下困難，患者依次下咽的食物為干的食物、半流質(zhì)食物，若病情逐漸惡化，則患者對(duì)水以及唾液難以下咽[2]。本院選取2016年5月-2017年5月本院食道癌患者64例，對(duì)其采用不同的診斷技術(shù)，對(duì)分子病理學(xué)診斷技術(shù)在食管癌患者中的診斷效果及與預(yù)后的相關(guān)性研究進(jìn)行了探究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年5月-2017年5月本院收治的食道癌患者64例，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組與研究組，每組各32例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者已診斷為食道癌。（2）患者精神正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者患較嚴(yán)重的凝血功能障礙、嚴(yán)重的高血壓和糖尿病等全身性疾病[3]?；颊呔椴⑼獗狙芯?，且經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 所有患者在手術(shù)前已診斷為食道癌，均采取纖維食管胃鏡進(jìn)行檢查，同時(shí)在病變區(qū)使用標(biāo)準(zhǔn)活檢鉗，選取部分活檢組織[4]。對(duì)照組采用常規(guī)傳統(tǒng)的病理學(xué)診斷，研究組采用FISH檢測(cè)法，將新鮮活檢組織放置于載玻片上，25 ℃室溫環(huán)境下進(jìn)行干燥處理，-80 ℃環(huán)境下進(jìn)行存儲(chǔ)。分別采用橙色、綠色熒光對(duì)3號(hào)、17號(hào)染色體著絲粒進(jìn)行標(biāo)記，將其作為探針。探針以及相對(duì)應(yīng)的試劑（雅培分子公司、美國(guó)）[5]。74 ℃環(huán)境下，采用70%甲酰胺液對(duì)活檢標(biāo)本進(jìn)行分解變性，該過(guò)程持續(xù)2 min后，將其依次放入70%，85%和100%的乙醇中，分別進(jìn)行2 min梯度脫水操作[6]。待其自然干燥后，將其置于45 ℃電熱板上，首先進(jìn)行5 min預(yù)熱處理，在標(biāo)本標(biāo)記區(qū)內(nèi)滴入10 μL探針混合液，采用橡膠水泥進(jìn)行密封，在42 ℃且較為潮濕的環(huán)境中，進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)16 h的雜交處理[7]。將載玻片放入70 ℃的2XSSC溶液中進(jìn)行洗滌，處理5 min后，再將其置入25 ℃的環(huán)境中的2XSSC溶液進(jìn)行洗滌2 min。使用DAPI-II液（雅培分子公司）對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色同時(shí)封片處理[8]。采用熒光顯微鏡、特殊圖像采集分析系統(tǒng)（萊卡微系統(tǒng)公司，德國(guó)），對(duì)各染色體著絲粒信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，每個(gè)標(biāo)本中包含100個(gè)細(xì)胞核，細(xì)胞核出現(xiàn)重疊、破損、未去除細(xì)胞質(zhì)等情況時(shí)，不用被記錄其中。判定為陽(yáng)性的原則為各細(xì)胞核中的高拷貝數(shù)大于10%時(shí)，采用雙盲式的方式進(jìn)行FISH檢測(cè)[9]。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 觀察兩組患者的活檢組織的病理結(jié)果、病例等級(jí)，對(duì)FISH的檢測(cè)結(jié)果中3號(hào)及17號(hào)染色體著絲粒異?？截悺⒓訇幮缘葴?zhǔn)確度進(jìn)行分析。病理形態(tài)學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：若鱗狀上皮出現(xiàn)輕度增生則為Ⅰ級(jí)，若出現(xiàn)輕度不典型增生為Ⅱ級(jí)，若出現(xiàn)中度不典型增生，但未出現(xiàn)癌變的狀況則為Ⅲ級(jí)。對(duì)患者的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)，由專業(yè)醫(yī)師進(jìn)行判定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者基線資料比較 研究組年齡27～63歲，平均（45.5±8.4）歲。對(duì)照組年齡28～63歲，平均（46.4±7.5）歲。兩組患者一般資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。見(jiàn)表1。

2.2 兩患者活檢組織的檢測(cè)結(jié)果比較 研究組患者病情程度顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 兩組患者的檢測(cè)結(jié)果比較 檢測(cè)結(jié)果表明，食道癌與3號(hào)、17號(hào)染色體著絲粒異?？截愑嘘P(guān)（P<0.05）。見(jiàn)表3。

3 討論

分子病理學(xué)包括運(yùn)用分子和遺傳學(xué)方法對(duì)腫瘤進(jìn)行診斷和分類，設(shè)計(jì)和驗(yàn)證對(duì)治療反應(yīng)和病情發(fā)展的預(yù)測(cè)性生物標(biāo)記物，不同的基因構(gòu)成造成的對(duì)腫瘤的個(gè)人易感性，還有環(huán)境因素和生活方式對(duì)腫瘤發(fā)生的影響。食管癌是常見(jiàn)的消化道腫瘤，全世界每年約有30萬(wàn)人死于食管癌，其發(fā)病率和死亡率各國(guó)差異很大[10]。食管癌典型的癥狀為進(jìn)行性咽下困難，先是難咽干的食物，繼而是半流質(zhì)食物，最后水和唾液也不能咽下。在食道癌高發(fā)區(qū)的糧食中可以分離出多種真菌，其中某些真菌存在致癌作用，對(duì)癌癥的發(fā)生起到促進(jìn)[11]。食道癌患者的飲食中缺乏維生素A、維生素B2等，食道癌患者共同的特點(diǎn)為蔬菜、水果攝入量較低。且長(zhǎng)期飲酒、抽煙，食用的食物過(guò)硬、過(guò)熱，導(dǎo)致患者出現(xiàn)慢性刺激、炎癥等情況。食道癌的臨床癥狀容易忽視，但當(dāng)患者吞咽較硬的食物時(shí)，存在不同程度的不適感，但病程發(fā)展較為緩慢[12]。食管癌患病的中晚期臨床癥狀變現(xiàn)為進(jìn)行性咽下困難，經(jīng)常性地吐黏液樣痰，為下咽的唾液和食管的分泌物?；颊咧饾u消瘦、脫水。若患者出現(xiàn)持續(xù)性的胸痛、背痛，則表明癌發(fā)展為中晚期。若癌癥對(duì)喉返神經(jīng)造成傷害，患者的聲音逐漸嘶啞[13]。對(duì)頸交感神經(jīng)節(jié)產(chǎn)生壓迫，引發(fā)Horner綜合征的發(fā)生。本研究中，對(duì)兩組患者的檢測(cè)結(jié)果分析，對(duì)比兩組食道癌患者的鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、黏液癌、小細(xì)胞癌等狀況的出現(xiàn)例數(shù)相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

目前對(duì)食道癌患者的治療手段有手術(shù)治療、化學(xué)治療、中醫(yī)中藥相結(jié)合的綜合治療，緩解食管癌患者癥狀，延長(zhǎng)存活期。但那需要及時(shí)對(duì)患者的基本生理功能進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)并注意藥物反應(yīng)[14-17]。由于我國(guó)的食道癌發(fā)病率較高，我國(guó)開(kāi)展專門的食管癌防治研究，在食道癌高發(fā)區(qū)建立研究點(diǎn)，向人們采取宣教食道癌的診斷方法與早期癥狀，盡量做到早期發(fā)現(xiàn)、早期治療，提高患者的治愈率[18-19]。本研究中，本院選取近三年食道癌患者64例，將其分為對(duì)照組與研究組。對(duì)照組采用常規(guī)診斷方法，研究組采用FISH檢測(cè)方法，對(duì)食管癌患者的診斷效果分別進(jìn)行判斷。研究組FISH的檢測(cè)結(jié)果表明，食道癌可以與3號(hào)、17號(hào)染色體著絲粒異?？截愑嘘P(guān)（P<0.05），且病例中發(fā)生假陰性2例。

隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，分子病理學(xué)的主要研究方面為疾病的亞微觀。在分子病理學(xué)中對(duì)腫瘤進(jìn)行診斷、分類，主要運(yùn)用分子與遺傳學(xué)的方法，設(shè)定研究對(duì)治療反應(yīng)、病情發(fā)展有關(guān)的標(biāo)記物，不同的基因、環(huán)境因素、生活方式等對(duì)腫瘤的影響[20]。本研究中，兩組活檢組織采用檢測(cè)方法，對(duì)比兩組診斷方法的準(zhǔn)確度，研究組患者的準(zhǔn)確度顯著高于對(duì)照組（P<0.05），表明分子病理學(xué)診斷技術(shù)具有更高的準(zhǔn)確度以及敏感度。

綜上所述，對(duì)于食管癌患者進(jìn)行診斷時(shí)，采取更為敏感的FISH檢測(cè)，顯著提高檢測(cè)的準(zhǔn)確度，3號(hào)與17號(hào)染色體著絲點(diǎn)可以作為診斷食道癌的探針，分子病理學(xué)診斷技術(shù)可以進(jìn)一步推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]李玉生，胡挺，劉曉昀，等.診斷時(shí)間延遲對(duì)顱內(nèi)靜脈竇血栓形成患者臨床特征及預(yù)后相關(guān)性的影響[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2017，30（6）：615-618.

[2] Shi M，F(xiàn)eng J，Sun X，et al.Expression of lncRNA RP11-259P1.1 in esophageal squamous cell cancer and its correlation with clinical prognosis[J].Chinese Journal of Cancer Biotherapy，2017，73（3）：32-33.

[3]李亭亭，潘德鋒，朱紅.血漿微小核糖核酸-1和微小核糖核酸-146b表達(dá)水平與急性ST段抬高型心肌梗死診斷及預(yù)后的相關(guān)性研究[J].中國(guó)循環(huán)雜志，2017，32（11）23-29.

[4]孫江濤，原翔，宋開(kāi)放.ERCC1表達(dá)與晚期NSCLC吸煙患者預(yù)后的相關(guān)性研究[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，52（7）：1069-1072.

[5]劉宇寧，王小兵，王騰，等.巨噬細(xì)胞抑制因子-1與早期非小細(xì)胞肺癌診斷及預(yù)后相關(guān)性[J].中國(guó)肺癌雜志，2016，19（4）：207-215.

[6] Abudoushalamu A，Madinyet N，Zhang H P，et al.The gene phenotype，protein expression of TP53 gene in Uygurs esophageal carcinoma and its correlation with prognosis[J].China Medical Herald，2018，65（7）：45-46.

[7]閻曉初，楊景.中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)第二十一次學(xué)術(shù)會(huì)議曁第五屆中國(guó)病理年會(huì)在昆明市召開(kāi)[J].中華病理學(xué)雜志，2016，34（2）：96.

[8]王福棟，寧振，王阿曼，等.胰腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液腫瘤的分子病理學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)普通外科雜志，2017，26（3）：359-366.

[9] Xiao L U，F(xiàn)eng X S，Gao S G，et al.Expression of STAT3 and Nanog Gene in Esophageal Cancer and Its Correlation with the Clinicopathological Characteristics[J].Journal of Henan University of Science & Technology，2016，7（54）：46-49.

[10]吳旻，陸艷榮，張瑾熔.AGGF1和HIF-1α及VEGF表達(dá)與食管鱗癌放療預(yù)后相關(guān)性研究[J].中華腫瘤防治雜志，2016，23（17）：1159-1164.

[11]李純，劉靜，關(guān)正元，等.TRAP1在食管癌中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2017，33（2）：135-139.

[12] Yang Y，Wei S Z，DU Y X，et al.Expression of p53，Ki-67 and PCNA in esophageal squamous cell carcinoma and correlation with radiotherapy effect and prognosis[J].Journal of Southeast University，2017，53（86）97-99.

[13]杜漸.膽管細(xì)胞癌的分子病理學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)普通外科雜志，2017，26（2）：241-245.

[14]鄭唯強(qiáng).乳腺癌分子病理診斷的機(jī)遇與挑戰(zhàn)[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2017，33（5）：473-476.

[15] Inage T，Nakajima T，F(xiàn)ujiwara T，et al.Pathological diagnosis of pulmonary large cell neuroendocrine carcinoma by endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration[J].Thoracic Cancer，2017，15（5 Suppl）：131-133.

[16]李濤，賴春鳳，鄭敏莉，等.MTHFR基因多態(tài)性與客家人群食管癌易感性的關(guān)系[J].廣東醫(yī)學(xué)，2018，54（7）：45-47.

[17]張冬云，陸蒂青，劉安麗，等.人食管鱗狀細(xì)胞癌組織TIM-3表達(dá)臨床意義[J].中華腫瘤防治雜志，2016，54（s2）：35-36.

[18]劉建化，金浩生，田紅霞，等.HBsAg陽(yáng)性肝癌患者預(yù)后及病理因素與ALK基因表達(dá)的相關(guān)性研究[J].中國(guó)病理生理雜志，2016，32（5）：841-846.

[19]程云杰，焦文鵬，王軍，等.食管小細(xì)胞癌腫瘤標(biāo)志物與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的相關(guān)性分析[J].中華腫瘤防治雜志，2016，23（21）：1426-1430.

[20]孫威，孫志強(qiáng)，汪建林，等.食管癌放療腫瘤病理緩解程度及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子變化與預(yù)后的相關(guān)性分析[J].中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2018，38（7）：517-523.

（收稿日期：2018-10-18） （本文編輯：周亞杰）