復(fù)方桔梗止咳片含量測(cè)定的研究

(三門峽市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河南 三門峽 472000)

復(fù)方桔梗止咳片的處方為桔梗146 g、遠(yuǎn)志(蜜炙)38 g、款冬花(蜜炙)22.5 g、甘草14 g，功能主治為鎮(zhèn)咳、祛痰藥?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)其性狀和檢查項(xiàng)做了要求，未對(duì)處方中的君藥桔梗的含量進(jìn)行質(zhì)量控制。本文采用高效液相色譜法-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)桔梗中有效成分桔梗皂苷D進(jìn)行了檢測(cè)，為復(fù)方桔梗止咳片的質(zhì)量控制提供了有效可行的方法。

1 材料與方法

1.1儀器與試藥 Waters2695高效液相色譜儀；C9860A型變頻超聲儀(上?？曝悹柟怆娂夹g(shù)有限公司)；CPA225D電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司)；乙腈(色譜純，默克)、甲醇(分析純，洛陽(yáng)市化學(xué)試劑廠)、水為超純水，桔梗皂苷D對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供)，復(fù)方桔梗止咳片(三門峽廣宇生物制藥有限公司，批號(hào)：180501、180502、180503)。

1.2方法

1.2.1設(shè)置色譜分析條件 取Agilent Extend-C18柱應(yīng)用，柱長(zhǎng)250 mm，內(nèi)徑4.6 mm，直徑5μm；實(shí)驗(yàn)用流動(dòng)相：為磷乙腈-水(26:74)；將流速調(diào)整至0.9 ml/min，漂移管溫度75 ℃，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10μL。理論塔板數(shù)依據(jù)桔梗皂苷D對(duì)照品峰予以記，需在3000及以上。

1.2.2檢測(cè)溶液的制備 (1)對(duì)照品溶液的制備。取桔梗皂苷D對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.5 mg/ml的溶液，即得。(2)供試品溶液的制備。取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 ml，回收溶劑至干，殘?jiān)铀?0 ml溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20 ml，合并正丁醇提取液，用氨試液50 ml洗滌，棄去氨液，正丁醇液回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。(3)陰性樣品溶液制備。取遠(yuǎn)志(蜜炙)7.6 g 、款冬花(蜜炙)4.5 g、甘草2.8 g。遠(yuǎn)志粉碎，款冬花、甘草分別制浸膏，加入苯甲酸鈉1 g、淀粉8.4 g、蔗糖4.0 g、明膠1.0 g、硬脂酸鎂0.5 g、蜂蜜1.0g，混勻，烘干，粉碎。取樣、制備與供試品相同。

2 結(jié)果

2.1線性關(guān)系分析 精密吸取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10μl，分別注入液相色譜儀，測(cè)定。以進(jìn)樣量對(duì)數(shù)(X)為橫坐標(biāo)，峰面積對(duì)數(shù)(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析?；貧w方程為：Y=1.3807X+5.5658(R2=0.9996)(n=5)，線性范圍為：0.501～10.012μg

2.2重現(xiàn)性分析 取供試品溶液6份，分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果含量平均值為0.5928 mg/g，RSD為0.88%。

2.3穩(wěn)定性分析 取供試品溶液，分別在0、1、2、4、8、12 h進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果RSD為1.02%。

2.4陰性樣品實(shí)驗(yàn) 取陰性樣品溶液進(jìn)樣測(cè)定，桔梗皂苷D保留時(shí)間處未出現(xiàn)吸收峰，陰性樣品未對(duì)實(shí)驗(yàn)構(gòu)成干擾。

2.5加樣回收率試驗(yàn) 取本品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入低濃度、中濃度、高濃度的對(duì)照品溶液，照供試品溶液制備方法制樣，依法測(cè)定，結(jié)果平均回收率為99.04%，RSD為0.61%(n=5)。見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2.6樣品含量測(cè)定 各取供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，對(duì)桔梗皂苷D含量計(jì)算，取批號(hào)為180501、180502、180503的樣品，依法檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(mg/g)

3 討論

3.1檢測(cè)方法的選擇 桔梗為復(fù)方桔梗止咳片的主藥，由于桔梗皂苷D無(wú)紫外吸收，故本文采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器對(duì)桔梗的含量進(jìn)行了質(zhì)量控制[1]。

3.2液相的色譜條件及提取條件的選擇 漂移管溫度的選擇：分別選擇漂移管溫度為50℃、75℃、85℃進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)漂移管溫度為75℃色譜峰的峰形最好。提取條件的選擇： 比較了100%、50%甲醇及50%乙醇3種溶劑，結(jié)果表明50%甲醇的提取效果最好；比較了加熱回流和超聲提取，結(jié)果兩種提取方法的含量測(cè)定結(jié)果差別不大，所以選擇比較簡(jiǎn)便的超聲提取方法。分離條件：分別比較了固相萃取柱和正丁醇液-液萃取的方法[2]，結(jié)果固相萃取的方法有成分有一定的損失，所以采用正丁醇液-液萃取的方法。