劉金美，胡德分，丁培超，崔瓊芳，周明月，余顯倫,＊

（1.昭通市天麻研究院，云南昭通 657000；2.勐臘海關(guān)檢驗檢疫技術(shù)中心，云南勐臘 666300；3.昭通市天麻特產(chǎn)局，云南昭通 657000）

天麻（Gastrodia elata Bl.）為蘭科天麻屬植物的干燥塊莖，是一味名貴中藥材，具有息風(fēng)止痙、平肝潛陽、祛風(fēng)通絡(luò)的功效，藥理作用有抗痙攣、抗驚厥、鎮(zhèn)靜催眠、鎮(zhèn)痛、促智抗衰老、增加腦血流量、改善供血、神經(jīng)保護等。臨床多用于頭痛眩暈、肢體麻木、小兒驚風(fēng)、癲癇、抽搐、破傷風(fēng)等癥。

目前，昭通市場上的天麻產(chǎn)品除了少量的藥品和保健品外，大部分以鮮天麻和初加工產(chǎn)品（如天麻片，干天麻和天麻粉）進行銷售，通過調(diào)研發(fā)現(xiàn)，鮮天麻的初加工過程，大部分是在各產(chǎn)地由麻農(nóng)自己加工，由于受加工和檢測條件的限制，無法測定天麻素的含量，僅憑天麻的外觀判斷其品質(zhì)。因加工方法的不同，加工出來的天麻初加工產(chǎn)品質(zhì)量差異較大[1-3]。李德勛等[4]調(diào)查和考察昭通天麻傳統(tǒng)加工工藝時發(fā)現(xiàn)，影響天麻藥材中天麻素含量的因素為烘烤溫度。袁勝浩等[5]研究天麻中天麻素含量的影響因素時發(fā)現(xiàn)，天麻素含量經(jīng)炮制后明顯增高，蒸制是提高天麻素含量最有效的方法，隨蒸制溫度升高，天麻素含量增加；除此之外，天麻素含量還與烘烤的溫度有關(guān)，具體的相關(guān)性還有待進一步研究。徐頂巧等[6]研究表明，對于鮮天麻在干制過程中各因素對天麻素含量的影響順序為烘干溫度＞蒸煮時間＞放置時間，且隨溫度升高，天麻素含量增加。但是溫度也不是越高越好，季德等[7]研究發(fā)現(xiàn)溫度過高，天麻內(nèi)部會出現(xiàn)空心，表皮會有起泡現(xiàn)象。因此，為了指導(dǎo)藥農(nóng)正確的掌握天麻加工技術(shù)，本實驗參照傳統(tǒng)的天麻藥材加工方法，考察加工溫度對昭通天麻初加工產(chǎn)品的天麻素和對羥基苯甲醇含量的影響。

1 儀器和試劑材料

1.1 儀器

島津LC-20AT型高效液相色譜儀（SPD-20A 型紫外檢測器）（島津企業(yè)管理（中國）有限公司）；FST-PF-UP菲爾普斯超純水儀；CP124C電子天平（上海奧豪斯儀器有限公司）；RE-3000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；GZX-9240MBE電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；SK250LHC超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；JP-500C-8高速多功能粉碎機（永康市久品工貿(mào)有限公司）。

1.2 試劑材料

1.2.1 試劑

天麻素和對羥基苯甲醇對照品，生產(chǎn)廠家為南京森貝伽生物科技有限公司；乙腈、甲醇，均為色譜純（64271 Darmstdt，Merck KGaA 德國公司）；無水乙醇（AR），生產(chǎn)廠家為成都市科隆化學(xué)品有限公司；磷酸（AR），生產(chǎn)廠家為重慶川東化工（集團）有限公司。

1.2.2 材料

鮮天麻樣品，2016年11月4日采自昭通市彝良縣小草壩烏葩嶺。

2 方法

2.1 樣品處理方法

2.1.1 樣品前處理

將采挖回來的無病蟲害、無傷的鮮天麻洗凈，晾干水分，測定鮮重，常壓蒸制透心。

2.1.2 天麻片樣品處理方法

天麻片樣品處理方法見表1。

2.1.3 天麻樣品處理方法

天麻樣品處理方法見表2。

表1 天麻片樣品處理方法

2.2 檢測方法

2.2.1 色譜條件

填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液（3∶97）；流速：1 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL；檢測波長：220 nm；理論塔板數(shù)按天麻素峰值計算應(yīng)不低于5 000。

表2 天麻樣品處理方法

2.2.2 標(biāo)準曲線的制備

將天麻素和對羥基苯甲醇對照品于105 ℃鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)干燥1 h，分別精密稱定天麻素對照品5 mg、對羥基苯甲醇對照品 2.5 mg，置于 100 mL 容量瓶中，加乙腈-水（3∶97）混合溶液制成每1 mL含天麻素50 μg、對羥基苯甲醇25 μg的混合溶液，作為天麻素對照品和對羥基苯甲醇對照品儲備液。精密吸取天麻素對照品和對羥基苯甲醇對照品儲備液 2、4、6、8、10 mL 分別置于 10 mL 容量瓶中，用乙腈-水（3∶97）混合溶液稀釋至刻度，由此配成天麻素濃度為10、20、30、40、50 μg/mL和對羥基苯甲醇濃度為5、10、15、20、25 μg/mL的5個不同濃度的對照品溶液。按“2.2.1”項下色譜條件進樣，記錄峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，以對照品溶液濃度（X）為橫坐標(biāo)，建立標(biāo)準曲線。

2.2.3 樣品溶液的制備

取天麻樣品粉末（過三號篩），精密稱取2 g，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理（功率 120 W，頻率 40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，濃縮至近干無醇味，殘渣加乙腈-水（3∶97）混合溶液溶解，轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，用乙腈-水（3∶97）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，備用。

2.3 測定方法

參照《中國藥典》2015年版第四部的通則0512項[8]，采用高效液相色譜法測定天麻素和對羥基苯甲醇。天麻素和對羥基苯甲醇總含量不得少于0.25%。多組間比較采用SPSS 20.0系統(tǒng)分析軟件One-way AVONA方差分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 對照樣品的標(biāo)準曲線

以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，以對照品溶液濃度（X）為橫坐標(biāo)，天麻素線性回歸方程為Y=17 521.5X-17 619.8（r=0.999 9），對羥基苯甲醇線性回歸方程為 Y=30 618.3X-36 237.6（r=0.999 9），天 麻 素 濃度在10.00～50.00 μg/mL和對羥基苯甲醇濃度在5.00～25.00 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.2 方法學(xué)考察

3.2.1 穩(wěn)定性試驗

取一供試品溶液，于 0、2、4、6、8、12、24 h各進樣1次，測得天麻素濃度分別為48.198、47.973、48.185、48.163、48.201、48.206、48.212 μg/mL，RSD為0.18%；對羥基苯甲醇濃度為23.372、22.986、23.412、23.403、23.392、23.336、23.384 μg/mL，RSD為0.65%。說明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

3.2.2 精密度試驗

取天麻素和對羥基苯甲醇對照品溶液，重復(fù)進樣5次，以天麻素和對羥基苯甲醇濃度進行計算，RSD為0.45%，說明儀器精密度良好。

3.2.3 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的同一天麻樣品1 g，共5份，分別精密加入等量的天麻素和對羥基苯甲醇對照品，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，檢測天麻素和對羥基苯甲醇含量，測得天麻素的平均加樣回收率為99.5%，RSD為3.63%；測得對羥基苯甲醇的平均加樣回收率為99.7%，RSD為2.83%。

3.2.4 重復(fù)性實驗

稱取同一天麻樣品粉末5份，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，檢測天麻素和對羥基苯甲醇含量，其RSD分別為1.86%和2.30%。

3.3 不同加工溫度對天麻初加工產(chǎn)品天麻素和對羥基苯甲醇含量的影響

3.3.1 不同加工溫度對鮮天麻成片的天麻素和對羥基苯甲醇含量的影響

鮮天麻洗凈，蒸制后切成縱片，置于實驗方案中預(yù)設(shè)的恒溫和變溫溫度烘干，測定結(jié)果如表3所示。在變溫條件下，以先65 ℃后50 ℃（表3P6）烘干的天麻片天麻素和對羥基苯甲醇含量之和最高，為0.6118%；恒溫條件下，以55 ℃（表3P2）烘干的天麻片天麻素和對羥基苯甲醇含量之和較高，為0.4854%，天麻片在設(shè)置的恒溫溫度下，天麻素和對羥基苯甲醇含量之和隨著溫度的升高呈先升后降的趨勢。各組之間天麻素含量和對羥基苯甲醇含量存在顯著性差異。

3.3.2 不同加工溫度對干天麻的天麻素和對羥基苯甲醇含量的影響

鮮天麻洗凈、蒸制后，置于實驗方案中預(yù)設(shè)的恒溫和變溫溫度條件下烘干，檢測結(jié)果如表4所示。恒溫條件下，在所設(shè)的溫度范圍內(nèi)，天麻素和對羥基苯甲醇含量隨溫度的升高而增加，以65 ℃（表4中K4）烘干天麻的天麻素和對羥基苯甲醇的含量之和最高，為0.6945%；同時，天麻素的含量是隨溫度的升高而增加，以65℃（表4中K4）烘干天麻的天麻素的含量最高，值為0.5701%；變溫條件下，以先50 ℃后65 ℃（表4中K5）烘干天麻的天麻素和對羥基苯甲醇含量之和最高，為0.6812%，天麻素含量以65 ℃（表4中K5）最高，為0.4846%。各組之間天麻素含量和對羥基苯甲醇含量存在顯著性差異。

表3 不同溫度干天麻片天麻素和對羥基苯甲醇含量統(tǒng)計表（%，n=3）

表4 不同溫度干天麻中天麻素和對羥基苯甲醇含量統(tǒng)計表（%，n=3）

4 結(jié)論

綜上所述，恒溫條件下，天麻片的干燥溫度以55℃為最佳溫度；變溫條件下，以先65 ℃后50 ℃為最佳加工溫度；干天麻的干燥溫度以65 ℃和先50 ℃后65 ℃為最佳溫度。溫度如若再高，天麻片會出現(xiàn)焦黃的現(xiàn)象，天麻片邊卷曲；天麻在短時間內(nèi)迅速脫水，天麻表皮會出現(xiàn)褶皺多而深、內(nèi)部空心和起泡現(xiàn)象；溫度到達65 ℃時，無論是天麻片還是干天麻，天麻素含量才有明顯增加的趨勢。季德等[7]研究結(jié)果表明：微波干燥組、微波紅外聯(lián)用組天麻素含量顯著增高，對羥基苯甲醇、巴利森苷含量減少，說明較高溫度會引起成分間的相互轉(zhuǎn)化，本實驗結(jié)果與這一結(jié)論相一致，但天麻素和對羥基苯甲醇及其他有效成分之間的轉(zhuǎn)化機理還有待進一步研究。