喻振 于瑞蓮 邵佳蔚 楊哲 王惠

中圖分類號 R932;R965;R285 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2019）21-2973-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.21.19

摘 要 目的：研究人工蟬花對5-氟尿嘧啶（5-FU）誘發(fā)大鼠腸黏膜損傷的修復(fù)作用。方法：將40只SD大鼠隨機分為正常組（生理鹽水）、模型組（生理鹽水）和人工蟬花高、中、低劑量（3.5、1.75、0.875 g/kg）組，每組8只。除正常組外，其余各組大鼠每日腹腔注射30 mg/kg的5-FU（0.25 g/10 mL）1次，連續(xù)5 d;同時，各組大鼠每天灌胃相應(yīng)藥物/生理鹽水1次，連續(xù)給藥8 d。給藥結(jié)束后，測定各組大鼠體質(zhì)量變化，蘇木精-伊紅染色后觀察各組大鼠小腸組織病理學(xué)變化，并檢測各組大鼠生物屏障相關(guān)因子[血清中內(nèi)毒素（ET）、D-乳酸（D-LA）]水平和免疫屏障相關(guān)因子[血清中腫瘤壞死因子α（TNF-α）、γ-干擾素（IFN-γ）、分泌性免疫球蛋白（sIgA）、白細胞介素15（IL-15）、集落刺激因子（G-CSF）和小腸組織中髓過氧化物酶（MPO）、丙二醛（MDA）]水平以及機械屏障相關(guān)因子（腸表面閉鎖小帶蛋白ZO-1和緊密連接蛋白Claudin-1）水平。結(jié)果：與正常組比較，模型組大鼠體質(zhì)量顯著減少（P<0.01）;腸絨毛剝落明顯，隱窩結(jié)構(gòu)散亂，大量炎性細胞聚集，腸黏膜損傷嚴重;血清中D-LA、ET和TNF-α、IFN-γ、MPO、G-CSF水平以及小腸組織中MDA水平均顯著升高（P<0.01）;血清中sIgA、IL-15水平以及小腸組織中ZO-1、Claudin-1蛋白表達水平顯著降低（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，人工蟬花高劑量組大鼠體質(zhì)量均顯著增加（P<0.01）;各給藥組大鼠小腸的病理變化均得到不同程度改善，其中人工蟬花高、中劑量組小腸形態(tài)接近正常組;各給藥組大鼠血清中D-LA、ET和TNF-α、IFN-γ、MPO、G-CSF水平以及小腸組織中MDA水平均顯著降低（P<0.01）;各給藥組大鼠血清中sIgA、IL-15水平以及人工蟬花高、中劑量組大鼠小腸組織中Claudin-1、ZO-1蛋白表達水平均顯著升高（P<0.01）。結(jié)論：人工蟬花可從機械屏障、免疫屏障、生物屏障等多個方面修復(fù)5-FU所致大鼠腸黏膜損傷。

關(guān)鍵詞 人工蟬花;腸黏膜損傷;5-氟尿嘧啶;大鼠;機械屏障;生物屏障;免疫屏障

Study on Repair Effect of Artificial Isaria cicadae on Intestinal Mucosal Injury Induced by 5-Fluorouracil in Rats

YU Zhen，YU Ruilian，SHAO Jiawei，YANG Zhe，WANG Hui（School of Pharmacy， Nanjing University of TCM， Nanjing 210046， China）

ABSTRACT OBJECTIVE： To study the repair effect of artificial Isaria cicadae on intestinal mucosal injury induced by 5-fluorouracil （5-FU） in rats. METHODS： Forty SD rats were randomly divided into normal group （normal saline）， model group （normal saline）， artificial I. cicadae high-dose， medium-dose and low-dose groups （3.5， 1.75， 0.875 g/kg）， with 8 rats in each group. Except for normal group， other groups were given intraperitoneal injection of 5-FU （0.25 g/10 mL） 30 mg/kg， once a day， for consecutive 5 days. At the same time， each group was given relevant medicine/normal saline intragastrically， once a day， for consecutive 8 d. After medication， body weight of rat was determined in each group. HE staining was used to observe the pathological change of small intestine. The levels of biobarrier-related factor [endotoxin （ET）， D-lactic acid （D-LA）]， immune barrier related factors （TNF-α， IFN-γ， sIgA， IL-15， G-CSF in serum and MPO， MDA in small intestine） and the levels of mechanical barrier related factors （connexin ZO-1 and Claudin-1） were detected. RESULTS： Compared with normal group， body weight of rats in model group was decreased significantly （P<0.01）. Intestinal villus exfoliated obviously， the crypt structure was scattered， a large number of inflammatory cells gathered， and intestinal mucosa was seriously damaged. Serum levels of ET and D-LA， the levels of TNF-a， IFN-γ， MPO and G-CSF in serum， MDA level in small intestine were increased significantly （P<0.01）. Serum levels of sIgA and IL-15 as well as the expressions of ZO-1 and Claudin-1 in small intestine were decreased significantly （P<0.05 or P<0.01）. Compared with model group， body weight of rats in artificial I. cicadae high-dose group was increased significantly （P<0.01）. The pathological changes of the small intestine of rats in each administration group were improved to varying degrees. The intestine morphology of artificial I. cicadae high-dose and medium-dose groups was close to that of the normal group. The levels of and ET， D-LA， TNF-α， IFN-γ， MPO， G-CSF in serum and the level of MDA in intestinal were decreased significantly （P<0.01）. Serum levels of ? sIgA and IL-15 in administration groups as well as the expressions of ZO-1 and Claudin-1 in intestinal tissue were increased significantly （P<0.01）. CONCLUSIONS： Artificial I. cicadae can repair intestinal mucosal damage caused by 5-FU in respects of mechanical barrier， immune barrier， biological barrier.

KEYWORDS Artificial Isaria cicadae;Intestinal mucosal injury; 5-Fluorouracil; Rat; Mechanical barrier;Biological barrier; Immune barrier

腫瘤是危害全人類健康的常見疾病和多發(fā)疾病，目前臨床上常用的腫瘤治療策略主要有手術(shù)、化療、分子靶向抑制劑以及生物藥療法，常規(guī)化療仍然是臨床治療腫瘤的主要方式[1-2]。其中，以5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-FU）為代表的抗代謝類化療藥在化療中占據(jù)約40%的比重[3]。5-FU作為最早應(yīng)用的抗代謝類化療藥，已在臨床上廣泛用于胃腸道癌、肝癌和胰腺癌等[1-3]實體腫瘤的治療，尤其在消化道腫瘤的治療上占據(jù)主導(dǎo)地位[4-5]。然而，5-FU在對多種癌癥有良好療效的同時，也會對消化道黏膜造成嚴重損傷，不僅會引起嘔吐、腹瀉等消化道癥狀[1]，甚至導(dǎo)致病情惡化危及生命[3，6]。任何引起腸黏膜屏障功能障礙的因素都可以加重原有疾病，引發(fā)嚴重的全身炎癥甚至死亡[7]，使得腫瘤患者的治療無法進行。目前，臨床上缺乏有效治療化療引起的腸黏膜損傷的藥物及手段[8]。因此，治療化療引起的腸黏膜損傷、保護腸黏膜屏障結(jié)構(gòu)完整和免疫系統(tǒng)功能正常具有重要意義。

蟬花（Isaria cicadae Miquel）為麥角菌科真菌蟬擬青霉寄生竹蟬若蟲后的復(fù)合體。據(jù)《本草綱目》記載，蟬花味甘，性寒，無毒，主治小兒天吊、驚癇螈、夜啼心悸[9]。現(xiàn)代研究也報道，蟬花具有抗驚厥[9]、抗炎[9]、免疫調(diào)節(jié)[10]等生物活性。但目前，野生蟬花存在著有害物質(zhì)富集、不易采摘、產(chǎn)量低等問題[11]。而本實驗室前期通過研究栽培出的人工蟬花污染少、產(chǎn)量高、孢子粉含量高、品質(zhì)優(yōu)[11]，具有一定的應(yīng)用價值。且前期實驗已證實，本實驗室栽培的人工蟬花具有保護慶大霉素所致大鼠急性腎損傷的作用[12]。本研究以本實驗室栽培的人工蟬花為研究對象，旨在詳細研究其對5-氟尿嘧啶（5-FU）誘發(fā)的腸黏膜損傷及免疫功能下降的修復(fù)作用，為其臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Max190全波長酶標儀（美國Spectra公司）;L420離心機（湘儀離心機儀器有限公司）;TANKPE060純水儀（美國Millipore公司）;BSA224S-CW電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司];Vortex-5渦旋混勻儀（海門市其林貝爾儀器制造有限公司）;EG1150C石蠟包埋儀（德國徠卡公司）;2000-C倒置顯微鏡、V.A1倒置熒光顯微鏡（德國Zeiss公司）。

1.2 藥品與試劑

人工蟬花由本實驗室栽培，由南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院于瑞蓮副教授鑒定為蟬花（Isaria cicadae Miquel）菌種的人工栽培品;5-FU注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，批號：1605081，規(guī)格：0.25 g/10 mL）;大鼠內(nèi)毒素（ET）酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（批號：H03A8E48592）、D-乳酸（D-LA）ELISA試劑盒（批號：H02F4E48101）、分泌型免疫球蛋白（sIgA）ELISA試劑盒（批號：H13C3E76192）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA試劑盒（批號：H06A2E50672）、γ-干擾素（IFN-γ）ELISA試劑盒（批號：H06F6E23206）、白細胞介素15（IL-15）ELISA試劑盒（批號：H03A3F06703）、粒細胞集落刺激因子（G-CSF）ELISA試劑盒（批號：H05A7E46872）、髓過氧化物酶（MPO）ELISA試劑盒（批號：H03F8E34274）、丙二醛（MDA） ELISA試劑盒（批號：H04A6E40382）、閉鎖小帶蛋白ZO-1 ELISA試劑盒（批號：H03A2E78452）均購自上海源葉生物科技有限公司;DAPI染色液（南京建成生物有限公司，批號：SUB- 30162）;兔源緊密連接蛋白Claudin 1-一抗（批號：ab240400）;山羊抗兔免疫球蛋白（IgG）二抗（批號：ab150077）均購自美國Abcam公司。

1.3 動物

SPF級健康SD大鼠40只，♂，體質(zhì)量（215±35） g，由南京市青龍山動物繁殖場提供，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（蘇）2017-0008。所有大鼠飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物房內(nèi)，環(huán)境溫度為（23±2） ℃、12 h/12 h晝夜循環(huán)。飼養(yǎng)期間大鼠自由進食、飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進行實驗。本實驗遵守《實驗動物護理和使用指南》，符合動物常規(guī)倫理。

2 方法

2.1 動物分組與造模

將40只SD大鼠隨機分為正常組、模型組和人工蟬花高、中、低劑量組，每組8只。除正常組外，模型組和人工蟬花各劑量組大鼠均每天腹腔注射1次30 mg/kg的5-FU[7]，正常組大鼠腹腔注射等量生理鹽水，持續(xù)注射5 d。在此同時，人工蟬花高、中、低劑量組大鼠在注射5-FU后1 h分別灌胃3.5 、1.75 、0.875 g/kg的人工蟬花溶液（將干燥人工蟬花粉末用生理鹽水制備的懸液，劑量根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果和本實驗室前期研究報道設(shè)置[6]），正常組和模型組大鼠灌胃等體積生理鹽水;各組大鼠均每天給藥1次，連續(xù)給藥8 d，記錄大鼠體質(zhì)量等一般情況變化。

2.2 血清中ET、D-LA含量測定

末次給藥后2 h，大鼠腹主動脈取血，室溫靜置1 h，凝固收縮后，3 000 r/min離心10 min，分離血清，然后于-20 ℃保存，備用。按相應(yīng)試劑盒說明書操作，檢測血清中ET、D-LA的含量，考察其對小腸黏膜生物屏障功能的影響。

2.3 血清中sIgA、TNF-α、IFN-γ、IL-15含量測定

取“2.2”項下血清，按相關(guān)試劑盒說明書操作，對血清中sIgA、TNF-α、IFN-γ、IL-15的含量進行測定，考察其對小腸黏膜免疫功能的影響。

2.4 血清中MPO活性測定

取“2.2”項下血清，按試劑盒說明書操作，對血清中G-CSF的含量進行測定。大鼠取血后，腹腔解剖取小腸組織約40 mg勻漿[組織與生理鹽水比為1 ∶ 10（mg/mL）]，用于試劑盒檢測，剩余部分病理組織檢查待用。按檢測試劑盒說明書操作，對小腸組織中MPO活性進行測定，考察其對小腸炎癥因子的影響。

2.5 小腸組織中MDA含量測定

取“2.4”項下小腸組織，按檢測試劑盒說明書操作，對小腸組織中MDA的含量進行測定，考察其對小腸組織過氧化水平的影響。

2.6 小腸黏膜病理學(xué)觀察

將小腸于10%多聚甲醛溶液固定24 h，然后進行常規(guī)組織包埋、石蠟切片等操作，經(jīng)蘇木精-伊紅（HE）染色后顯微鏡下觀察小腸黏膜病理變化。

2.7 小腸組織中ZO-1、Claudin 1蛋白表達測定

2.7.1 ZO-1蛋白 取“2.4”項下小腸組織，按檢測試劑盒說明書操作，對小腸組織中ZO-1的含量進行測定。

2.7.2 Claudin 1蛋白 取大鼠小腸組織石蠟切片，經(jīng)脫蠟、梯度脫水后，進行抗原修復(fù)，用磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3次;用2%牛血清白蛋白（BSA）室溫封閉30 min，PBS洗滌2次;滴加適量用2%BSA稀釋的Claudin 1一抗（1 ∶ 200），4 ℃過夜;次日用PBS洗滌2次，滴加適量二抗，室溫下封閉2 h，用PBS洗滌2次;滴加DAPI染液，室溫下染色10 min，PBS洗滌2次;用濾紙吸取多余的PBS溶液，滴加少量抗熒光猝滅劑，蓋片，熒光顯微鏡下觀察Claudin 1蛋白表達情況（藍色熒光為DAPI，綠色熒光為Claudin 1蛋白），并應(yīng)用Image J 1.8.0軟件測定灰度值對蛋白表達進行定量分析。

2.8 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。所有結(jié)果均以x±s的形式表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 一般情況觀察結(jié)果

給藥前，各組大鼠間體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。給藥8 d后，與正常組比較，模型組大鼠體質(zhì)量顯著降低（P<0.01），此外還出現(xiàn)了明顯的食欲不振、精神萎靡、活力下降等癥狀。與模型組比較，人工蟬花高劑量組大鼠體質(zhì)量均顯著升高（P<0.01），食欲不振、精神萎靡等情況也得到明顯改善。各組大鼠體質(zhì)量測定結(jié)果見表1。

3.2 對小腸黏膜屏障功能的影響結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠血清中ET、D-LA含量顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，人工蟬花高、中、低劑量組大鼠血清中ET、D-LA含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），且呈劑量依賴性趨勢。各組大鼠血清中ET、D-LA含量測定結(jié)果見圖1。

3.3 對小腸黏膜免疫功能的影響結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠血清中sIgA、IL-15含量顯著降低（P<0.05或P<0.01），IFN-γ、TNF-α含量顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，人工蟬花高、中、低劑量組大鼠血清中sIgA、IL-15含量均顯著升高（P<0.05或P<0.01），IFN-γ、TNF-α含量顯著降低（P<0.01），并呈劑量依賴性趨勢。各組大鼠血清中sIgA、IFN-γ、TNF-α和IL-15含量測定結(jié)果見圖2。

3.4 對小腸炎癥因子的影響結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠血清中G-CSF含量和小腸組織中MPO活性均顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，人工蟬花高、中、低劑量組大鼠血清中G-CSF含量和小腸組織中MPO活性均顯著降低（P<0.01），并呈劑量依賴性。各組大鼠血清中G-CSF含量和小腸組織中MPO活性測定結(jié)果見圖3。

3.5 對小腸組織過氧化水平的影響結(jié)果

與正常組比較，模型組大鼠小腸組織中MDA含量顯著升高（P<0.01）。與模型組比較，人工蟬花高、中、低劑量組大鼠小腸組織中MDA含量顯著降低（P<0.01），并呈劑量依賴性趨勢。各組大鼠小腸組織中MDA含量測定結(jié)果見圖4。

3.6 對小腸黏膜病理學(xué)的檢查結(jié)果

正常組大鼠腸腔絨毛形態(tài)完整，隱窩結(jié)構(gòu)清晰。模型組大鼠腸絨毛剝落明顯，隱窩結(jié)構(gòu)散亂，可觀察到大量炎性細胞聚集，腸黏膜損傷嚴重。與模型組比較，人工蟬花高、中、低劑量組大鼠的腸腔絨毛和隱窩結(jié)構(gòu)形態(tài)較完整，損傷程度較小;其中，人工蟬花高劑量、中劑量組大鼠腸絨毛已接近正常，人工蟬花高劑量組大鼠隱窩結(jié)構(gòu)較為緊密、完整，人工蟬花低劑量組大鼠小腸組織隱窩結(jié)構(gòu)雖較正常組有一定程度的破壞、中性粒細胞聚集，但相比于模型組結(jié)構(gòu)仍較好。各組大鼠小腸組織病理切片圖見圖5。

3.7 對腸黏膜屏障完整性的影響結(jié)果

3.7.1 對小腸組織中ZO-1蛋白表達的影響結(jié)果 與正常組比較，模型組大鼠小腸組織中ZO-1蛋白表達水平顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，人工蟬花高、中劑量組大鼠小腸組織中ZO-1蛋白表達水平顯著升高（P<0.01），但人工蟬花低劑量組大鼠小腸組織中ZO-1蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。各組大鼠小腸組織中ZO-1蛋白表達水平測定結(jié)果見圖6。

3.7.2 對小腸組織中Claudin-1蛋白表達的影響結(jié)果 正常組、模型組和人工蟬花高、中、低劑量組的灰度值分別為（11.67±1.50）、（2.54±0.56）、（8.35±0.97）、（5.60±0.73）、（3.29±0.72）（n=8）。與正常組比較，模型組大鼠小腸組織中Claudin-1蛋白表達水平顯著降低（P<0.01）。與模型組比較，人工蟬花高、中劑量組大鼠小腸組織中Claudin-1蛋白表達水平顯著升高（P<0.01），但人工蟬花低劑量組大鼠小腸組織中Claudin-1蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。各組大鼠小腸組織中Claudin-1蛋白表達的免疫熒光圖見圖7。

4 討論

正常的腸道黏膜屏障由機械屏障、化學(xué)屏障、免疫屏障和生物屏障共同組成。通過對腸黏膜病理切片的觀察，發(fā)現(xiàn)5-FU化療之后，大鼠小腸絨毛和隱窩結(jié)構(gòu)均受到了嚴重的損傷，導(dǎo)致腸黏膜屏障功能受到嚴重的影響，機體無法正常地進行營養(yǎng)吸收，表現(xiàn)為體質(zhì)量下降和血清中ET含量顯著升高。D-LA是腸道細菌代謝、裂解的產(chǎn)物，當腸道缺血時，腸黏膜生物屏障破壞，此時腸道中細菌產(chǎn)生的大量D-LA，通過受損的腸黏膜經(jīng)循環(huán)進入血液，檢測血中D-LA水平可以反映腸黏膜受損程度和通透性變化[13]。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠血清中D-LA含量顯著升高，灌胃人工蟬花后，腸黏膜得到明顯保護，血清中ET和D-LA含量均顯著降低，并且大鼠因化療造成的體質(zhì)量下降的情況也有顯著的改善，表明人工蟬花對5-FU化療后破壞的腸黏膜營養(yǎng)吸收以及腸黏膜生物屏障有明顯的保護作用。

FU化療后，腸道產(chǎn)生分泌性免疫球蛋白的功能明顯受到抑制，表現(xiàn)為sIgA含量減少，由腸道固有層漿細胞和腸上皮細胞分泌組裝的sIgA是構(gòu)成腸道黏膜免疫的重要組成部分，是防御病菌在腸道黏膜粘附和定植的第一道防線[14]。本研究結(jié)果顯示，5-FU化療破壞了大鼠腸黏膜的免疫屏障，表現(xiàn)為大鼠血清中sIgA含量顯著降低;而給予人工蟬花后，大鼠血清中sIgA含量不同程度升高，提示腸黏膜免疫屏障得到了有效保護。Th1細胞因子（如IFN-γ）、上皮細胞分泌促炎性因子（如TNF-α）以及免疫抗炎性因子（如IL-15）等細胞因子，可以調(diào)節(jié)免疫細胞功能，維護黏膜免疫的屏障功能[14-15]。本研究結(jié)果顯示，5-FU化療后大鼠血清中IFN-γ、TNF-α含量均異常升高，給予人工蟬花后，大鼠血清中TNF-α、IFN-γ含量顯著降低，提示人工蟬花有明顯的抗炎療效，可能是通過抑制TNF-α、IFN-γ的異常表達，維護黏膜免疫，從而發(fā)揮保護腸黏膜的作用。IL-15是在小腸陷窩細胞中發(fā)現(xiàn)的一個細胞因子，其能促進小腸上皮細胞中度增生，維護正常腸黏膜CD8+T細胞增殖、促進sIgA的分泌[16-17]，對化療后腸黏膜損傷有修復(fù)功能[17-18]。本研究結(jié)果顯示，5-FU化療后大鼠血清中IL-15含量顯著降低，表明5-FU化療可能使免疫抗炎性因子降低;而給予人工蟬花后，大鼠血清中IL-15含量明顯升高，且高于正常組大鼠水平，這表明人工蟬花能促進血清中IL-15的生成，以增強腸免疫屏障，對腸黏膜損傷具有一定的保護作用。

集落刺激因子是一組功能很強的骨髓造血細胞增殖因子，G-CSF為其中一種，可以促進中性粒細胞集落的形成， 延長成熟中性粒細胞的存活時間，活化中性粒細胞，在抗感染的非特異性細胞免疫過程中起重要作用。當化膿菌或其毒素侵入時，G-CSF在血清或體液中含量迅速升高，并在感染得到控制后又降至正常水平[19]。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠小腸組織中G-CSF含量較正常組明顯升高，而給予人工蟬花后其含量顯著降低，說明人工蟬花對G-CSF有一定的調(diào)控作用，從而影響中性粒細胞的增殖、分化和活化，減少成熟中性粒細胞的存活時間，減輕中性粒細胞呼吸爆發(fā)對腸組織的損傷。MPO是由中性粒細胞、單核細胞和某些組織的巨噬細胞分泌的含血紅素輔基的血紅素蛋白酶，MPO的合成是粒細胞進入循環(huán)之前在骨髓內(nèi)合成并貯存于嗜天青顆粒內(nèi)，外界刺激可導(dǎo)致中性粒細胞聚集，釋放MPO[20]。因此，MPO的活性高低反映了中性粒細胞浸潤程度，腸道組織中MPO表達與腸道炎癥的嚴重程度呈正相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，5-FU化療后大鼠小腸組織中MPO活性較正常大鼠顯著升高，而給予人工蟬花后，大鼠小腸組織中異常升高的MPO活性顯著降低，這說明人工蟬花能有效減輕腸道炎癥，保護腸黏膜。體內(nèi)氧自由基通過參與脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，并產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物（如MDA），脂質(zhì)過氧化反應(yīng)和脂質(zhì)過氧化物的分解產(chǎn)物都能引起細胞膜結(jié)構(gòu)受損、炎癥介質(zhì)大量釋放[21]。通過檢測MDA含量，可以反映脂質(zhì)過氧化物程度，間接評價細胞、組織受損程度[22-23]。本研究結(jié)果顯示，5-FU化療后大鼠小腸組織中MDA含量顯著升高，而給予人工蟬花，可顯著降低其小腸組織中MDA含量，這說明人工蟬花能抑制腸組織過氧化反應(yīng)，對抗腸組織損傷，促進維持腸免疫屏障穩(wěn)態(tài)。

腸上皮細胞通過表達閉鎖小帶蛋白ZO-1、緊密連接蛋白Claudin-1等蛋白來維持腸上皮的完整和緊密連接性，以抵抗菌群和外界病原體的入侵[24]。腸道菌、化療藥物及其他氧化應(yīng)激等刺激，均可能破壞表面連接蛋白[22，24]，使腸屏障不再完整，導(dǎo)致腸道的通透性增加，進而引發(fā)各種疾病[14，24]。本研究結(jié)果顯示，5-FU化療后大鼠小腸組織中ZO-1和Claudin-1蛋白水平較正常大鼠顯著降低，而給予人工蟬花后能有效提高小腸組織中ZO-1和Claudin-1蛋白表達水平，表明人工蟬花能夠通過提高腸上皮表面連接蛋白水平，發(fā)揮對腸上皮機械屏障的保護作用。

癌癥已成為我國第一大死因，常規(guī)的化療仍然是臨床治療腫瘤的主要方式，而化療藥物在殺傷癌細胞的同時，對消化道黏膜造成嚴重損傷，引起腸黏膜屏障功能障礙以及其他嚴重副作用，使得腫瘤患者治療無法進行，甚至加重原有疾病直至死亡?，F(xiàn)在，腫瘤臨床治療理念開始轉(zhuǎn)向?qū)Π┌Y患者生活質(zhì)量的關(guān)注，人們更加重視對化療不良反應(yīng)的防治，維護患者的生活質(zhì)量。通過對上述實驗數(shù)據(jù)的分析發(fā)現(xiàn)，本實驗室栽培的蟬花能從機械屏障、免疫屏障、生物屏障等多方面修復(fù)5-FU化療后出現(xiàn)的腸黏膜損傷，維持腸道正常的組織結(jié)構(gòu)，對于改善患者化療時的生活質(zhì)量具有一定臨床應(yīng)用價值。

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（收稿日期：2019-05-21 修回日期：2019-09-03）

（編輯：林 靜）