涂嬌　劉枝華　胡雄　鄧佩儀　陳江鳳　邵儉

摘 要：為探究不同脅迫條件下?；撬幔ˋ）、維生素C（B）、葡萄糖（C）、潑灑姜-芳草（D）、應(yīng)激寶（E）和漁精元（F）6種藥品對(duì)羅非魚(yú)存活率及行為的影響。本研究以羅非魚(yú)（17.03±5.21）g為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，觀測(cè)其在缺氧、二氧化氯及氨氮脅迫條件下6種藥品對(duì)羅非魚(yú)的存活情況及影響。結(jié)果表明：在缺氧脅迫下，144 min后E組的羅非魚(yú)存活率最高為33.33%，其它各組存活率均為0%;360 min后各組的存活率均為0%;在二氧化氯的脅迫下，B組與其它各組差異顯著（P<0.05），75 min后B組的存活率最高（100%），其它組存活率均為0%;在氨氮的脅迫下，F(xiàn)組與各組差異顯著（P<0.05），360 min后F組的存活率（93.33%）最高。

關(guān)鍵詞：缺氧;二氧化氯;氨氮;存活率;行為變化

中圖分類號(hào)：S965.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1008-0457（2019）05-0075-05 國(guó)際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2019.05.013

Effects of 6 Drugs on Livability of Tilapia under Different Stress Conditions

TU Jiao1，LIU Zhi-hua1，HU Xiong2，DENG Pei-yi2，CHEN Jiang-feng1，SHAO Jian1*

（1. College of animal science，GuiZhou University， Guiyang， GuiZhou 550025，China;2.Foshan Live Treasure Source Bio Technology Co.LTD， Foshan， GuangDong 528300，China）

Abstract：To explore the influence of 6 kinds of drugs including taurine（A）， Vitamin C （B）， glucose （C）， Posajiang-Fangcao（D）， Yingjibao（E） and Yujingyuan （F） on survival rate and behavior of tilapia under different stress. Tilapia （17.03±5.21） g was used in this study， and the survival and behavioral responses of tilapia to six drugs were observed under hypoxia， chlorine dioxide and ammonia nitrogen stress， respectively. The results showed that the highest survival rate of tilapia was 33.33% in group E while 0% in other groups after 144 min of exposure to hypoxia stress; and 0% in each group after 360 min of exposure. Under the stress of chlorine dioxide， group B was significantly different from the other groups （P<0.05）， and the survival rate of group B was the highest （100%） while other groups was 0% after 75min of exposure. Under the stress of ammonia nitrogen， the difference between group F and each group was significant （P<0.05）， and the survival rate of group F was the highest （93.33%） after 360min of exposure.

Key words：hypoxia; chlorine dioxide; ammonia nitrogen; survival rate; behavior change

羅非魚(yú)（Tilapia），是一種熱帶淡水中小型魚(yú)類，原產(chǎn)于非洲，為雜食性動(dòng)物，通常隨水溫變化或魚(yú)體大小改變棲息水層，適應(yīng)能力和繁殖能力較強(qiáng)[1]，是我國(guó)主要養(yǎng)殖魚(yú)類。因其具有生長(zhǎng)速度快、味道鮮美等特點(diǎn)，深受廣大消費(fèi)者的喜愛(ài)[2]，羅非魚(yú)現(xiàn)已成為我國(guó)最重要的出口淡水養(yǎng)殖對(duì)象之一[3]。近年來(lái)，隨著羅非魚(yú)養(yǎng)殖規(guī)模的逐漸擴(kuò)大，養(yǎng)殖者為提高產(chǎn)量，增加放養(yǎng)密度和投餌量，導(dǎo)致殘餌糞便蓄積，水質(zhì)惡化，同時(shí)運(yùn)輸過(guò)程中的各種操作等環(huán)節(jié)，這些都會(huì)使魚(yú)類產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng);而應(yīng)激可使魚(yú)類發(fā)生生理和行為改變，過(guò)度應(yīng)激不僅影響魚(yú)類生產(chǎn)性能，而且會(huì)誘發(fā)多種疾病，甚至死亡[4]。有研究表明，在魚(yú)類養(yǎng)殖生產(chǎn)和運(yùn)輸過(guò)程中通過(guò)加入化學(xué)藥物增氧劑、降低溫度等方法可以有效減少應(yīng)激反應(yīng)，提高存活率和養(yǎng)殖效益[5]。在魚(yú)類運(yùn)輸過(guò)程中，適量的苯唑卡因有助于維持魚(yú)類生化指標(biāo)的穩(wěn)定，可以使魚(yú)體降低應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)度，對(duì)運(yùn)輸應(yīng)激反應(yīng)有很好的緩解作用[6]。陳靜怡等[7]研究發(fā)現(xiàn)，低溫可緩解低氧對(duì)魚(yú)體造成的氧化損傷和肝功能損傷，以此提高魚(yú)類應(yīng)對(duì)低氧脅迫的能力。此外，魚(yú)類養(yǎng)殖產(chǎn)品的安全性問(wèn)題也成為人們?nèi)找骊P(guān)注的重點(diǎn)，而選用無(wú)公害藥品投入養(yǎng)殖生產(chǎn)及運(yùn)輸環(huán)節(jié)是未來(lái)的發(fā)展趨勢(shì)。本研究選用6種藥品開(kāi)展試驗(yàn)，觀測(cè)不同藥品在同一濃度下對(duì)不同脅迫條件下羅非魚(yú)應(yīng)激反應(yīng)情況，旨在為羅非魚(yú)養(yǎng)殖生產(chǎn)中減少應(yīng)激反應(yīng)對(duì)策，進(jìn)一步為提高養(yǎng)殖產(chǎn)品質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用魚(yú)為羅非魚(yú)，平均體重（17.03±5.21）g。實(shí)驗(yàn)前在塑料桶中暫養(yǎng)24 h，選擇健康、體質(zhì)量均勻的個(gè)體在塑料瓶（1 L、5 L）中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)周期為360 min。

6種實(shí)驗(yàn)藥品分別為：?；撬幔ˋ）、維生素C（B）、葡萄糖（C）、潑灑姜-芳草（D）、應(yīng)激寶（E）、漁精元（F），主要成分及產(chǎn)地見(jiàn)表1。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 缺氧應(yīng)激實(shí)驗(yàn)

向塑料瓶中注入1 L經(jīng)曝氣處理的蒸餾水，再加入20 mg/L的藥品，每種藥品設(shè)置3個(gè)平行，并設(shè)1個(gè)對(duì)照（CK），然后隨機(jī)放入5尾羅非魚(yú)并將瓶口擰緊隔絕外界空氣，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后連續(xù)360 min觀測(cè)不同組別羅非魚(yú)的存活率及行為反應(yīng)情況。

1.2.2 二氧化氯應(yīng)激實(shí)驗(yàn)

向5 L塑料瓶中注入濃度約為150 mg/L的二氧化氯溶液（用池塘水為基礎(chǔ)水體進(jìn)行配制），再加入20 mg/L的藥品，每種藥品設(shè)置3個(gè)平行，并設(shè)1個(gè)對(duì)照，然后隨機(jī)放入5尾羅非魚(yú)，試驗(yàn)開(kāi)始后連續(xù)360 min觀測(cè)不同組別羅非魚(yú)的存活率及行為反應(yīng)情況。

1.2.3 氨氮應(yīng)激實(shí)驗(yàn)

向5 L塑料瓶中注入濃度約為80 mg/L的NH4CL溶液（用池塘水為基礎(chǔ)水體進(jìn)行配制），再加入20 mg/L的藥品，混合均勻。每種藥品設(shè)置3個(gè)平行，并設(shè)置1個(gè)對(duì)照，然后隨機(jī)放入5尾羅非魚(yú)，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后連續(xù)360 min觀測(cè)不同組別羅非魚(yú)的存活率及行為反應(yīng)情況。

三種應(yīng)激實(shí)驗(yàn)中，以觀察魚(yú)呼吸停止后，即腮蓋停止運(yùn)動(dòng)，并用玻璃棒敲擊魚(yú)體無(wú)任何反應(yīng)作為死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS19.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-Way ANOVA）和Duncan檢驗(yàn)法統(tǒng)計(jì)分析（P<0.05）。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 三種應(yīng)激實(shí)驗(yàn)中羅非魚(yú)的存活率變化

2.1.1 缺氧脅迫下羅非魚(yú)存活率

由表2可知，各組之間的差異不明顯，84 min后存活率最高組為F組（86.67%），最低組為D組（53.33%）;104 min后存活率最高組為B組（53.33%），D組全部死亡;124 min后存活率最高組為E組（33.33%），A、C、D、CK組均死亡;144 min后存活率最高組為E組（33.33%），其余各組均死亡;360 min后各組均全死亡。

2.1.2 二氧化氯脅迫下羅非魚(yú)存活率 在15 min時(shí)，B組與A組差異顯著，兩組均與其它組差異不顯著。在30 min時(shí)，B組與E組差異不顯著，與其它各組差異顯著，C組和D組均與A組、F組、CK組差異顯著，與E組差異不顯著，A組的存活率最低，B組存活率最高。在45 min時(shí)，B組與各組差異均顯著，B組存活率最高。60 min后B組與C組差異顯著。75 min時(shí)，各組無(wú)顯著差異，B組的存活率最高（100%），其余各組均死亡（表3）。

2.1.3 氨氮脅迫下羅非魚(yú)存活率 在30 min時(shí)，A組與E組差異不顯著

，A組和E組均與其它各組差異顯著;180 min后，B組與F組差異不顯著，B組和F組與其它各組差異顯著;300 min后F組與各組差異顯著

，存活率最高，E組存活率最低為0;360 min后，B組與各組差異顯著

，F(xiàn)組與各組差異顯著，F(xiàn)組的存活率（93.33%）在360 min內(nèi)為最高（表4）。

2.2 三種脅迫下羅非魚(yú)的行為反應(yīng)

2.2.1 缺氧脅迫下羅非魚(yú)的行為反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)羅非魚(yú)游動(dòng)正常，隨后逐漸游動(dòng)緩慢，魚(yú)體失去平衡，部分羅非魚(yú)集中于瓶口快速呼吸，個(gè)別上下急速竄動(dòng)，接著出現(xiàn)游動(dòng)無(wú)力的現(xiàn)象，僅有口鰓不斷閉合，最終上浮后，墜入水底，反復(fù)幾次，直到死亡。死亡魚(yú)口張開(kāi)，魚(yú)體僵硬，鰓蓋軟化受損，鰭條伸直展開(kāi)。D組反應(yīng)最劇烈，E組反應(yīng)較其余各組弱。

2.2.2 二氧化氯脅迫下羅非魚(yú)的行為反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)進(jìn)行15 min后開(kāi)始出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，表現(xiàn)為失去平衡，浮頭、沉入水底、上下激烈竄動(dòng)，反應(yīng)遲鈍，側(cè)躺水底不動(dòng)，伴有側(cè)游、轉(zhuǎn)圈游動(dòng)等現(xiàn)象，直接垂直緩落到瓶底，反復(fù)幾次后死亡。A組反應(yīng)最劇烈，B組無(wú)明顯反應(yīng)。

2.2.3 氨氮脅迫下羅非魚(yú)的行為反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)進(jìn)行30 min后開(kāi)始出現(xiàn)應(yīng)激現(xiàn)象，表現(xiàn)為上下竄游、水中急速跳躍、轉(zhuǎn)圈，直接游出水面急促呼吸，接著腹部上翻，腹面朝上斜游，活力減弱，反復(fù)數(shù)次后腹面朝上死亡。E組反應(yīng)最劇烈，F(xiàn)組反應(yīng)較其余各組弱。

3 結(jié)論與討論

3.1 缺氧脅迫下對(duì)羅非魚(yú)行為反應(yīng)及存活率的影響

生產(chǎn)中造成魚(yú)類缺氧浮頭的主要原因有養(yǎng)殖過(guò)程中放養(yǎng)密度過(guò)大、池水過(guò)肥、施肥不當(dāng)、水質(zhì)污染、投飼過(guò)量、天氣突變等[8]，以及在魚(yú)類的運(yùn)輸中，密閉的箱體和高密度的群體也極易造成魚(yú)類缺氧，使魚(yú)類出現(xiàn)浮頭，長(zhǎng)時(shí)間的缺氧會(huì)使魚(yú)類出現(xiàn)死亡。當(dāng)魚(yú)類在受到外界環(huán)境因素的不良刺激后會(huì)引發(fā)體內(nèi)的保護(hù)屏障，而使魚(yú)體內(nèi)產(chǎn)生一系列生理變化，即應(yīng)激反應(yīng)[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，羅非魚(yú)在缺氧脅迫下各組中的存活率無(wú)顯著差異，在同一缺氧環(huán)境下，E組較其它各組的存活時(shí)間長(zhǎng)，抗應(yīng)激的能力較強(qiáng)。60 min后羅非魚(yú)表現(xiàn)出應(yīng)激反應(yīng)，即游動(dòng)緩慢、無(wú)力，反應(yīng)遲鈍，失去平衡，最后靜臥水底死亡。在同一缺氧環(huán)境脅迫下，D組的反應(yīng)最為強(qiáng)烈，存活率最低，A、B、C、F組次之，E組的反應(yīng)最不強(qiáng)烈。

應(yīng)激寶中的主要成分是免疫多糖，免疫多糖中富含具有免疫功能的β-葡聚糖和功能性的寡糖，β-葡聚糖作為免疫增強(qiáng)劑廣泛應(yīng)用于畜禽與水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)[10]。有研究表明，β-葡聚糖能夠提高齊口裂腹魚(yú)腸道分泌性抗體的產(chǎn)生，增強(qiáng)腸道免疫功能，進(jìn)而提高魚(yú)體的抗病、抗應(yīng)激功能[11]。本研究中，應(yīng)激寶的使用增加了羅非魚(yú)的非特異性免疫功能，提高了羅非魚(yú)的抗缺氧能力，推測(cè)藥品應(yīng)激寶對(duì)羅非魚(yú)在缺氧脅迫下有較好的緩解應(yīng)激作用。

3.2 二氧化氯脅迫下對(duì)羅非魚(yú)行為反應(yīng)及存活率的影響

二氧化氯是水產(chǎn)養(yǎng)殖中的常用消毒劑，對(duì)細(xì)菌、芽孢和真菌等微生物具有很好的殺滅作用，且在低濃度下對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物無(wú)不良反應(yīng)，同時(shí)二氧化氯作為強(qiáng)氧化劑，幾乎可以分解水中所有還原性污染物質(zhì)，如殘剩餌料、排泄物等，極大程度地改善養(yǎng)殖水體[12];但高濃度下會(huì)對(duì)魚(yú)類造成嚴(yán)重的傷害，產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，并致死。本研究發(fā)現(xiàn)，羅非魚(yú)在同一質(zhì)量濃度的二氧化氯脅迫下各組之間差異顯著，B組的存活率最高（100%），有較好的抗二氧化氯脅迫能力。當(dāng)水體中二氧化氯濃度為150 mg/L時(shí)，羅非魚(yú)15 min后即表現(xiàn)出焦躁不安、上下竄動(dòng)、浮頭、反應(yīng)遲鈍等癥狀，最后呆滯于水底，失去平衡后死亡，這與唐洪玉等[13]研究的二氧化氯對(duì)湘云鯽的急性毒性試驗(yàn)中的中毒癥狀相似。在同一質(zhì)量濃度的二氧化氯溶液中，A組的反應(yīng)最為強(qiáng)烈，死亡率最高，C、D、E、F組的反應(yīng)次之，B組的反應(yīng)最不強(qiáng)烈。

VC，又稱L-抗壞血酸，在動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、抗應(yīng)激、免疫等方面均具有促進(jìn)作用[14];宋學(xué)宏等[15]研究表明，在飼料中添加適量的VC可顯著提高異育銀鯽的免疫力，進(jìn)而提高魚(yú)體的抗病力;李志輝等[16]認(rèn)為在飼料中添加VC可促進(jìn)錦鯉的生長(zhǎng)發(fā)育和增強(qiáng)其機(jī)體非特異性免疫能力。本研究中，在360 min后，B組的存活率最高（100%），其它各組均死亡，VC顯著提高了魚(yú)體的免疫力，增強(qiáng)了魚(yú)體的抗病力和抗應(yīng)激能力，有研究表明，VC還可通過(guò)神經(jīng)調(diào)節(jié)因子，調(diào)節(jié)腦部的多巴胺和去甲腎上腺素的水平，從而控制魚(yú)類的行為，增強(qiáng)其抗應(yīng)激能力[17]。本研究證明，VC在羅非魚(yú)抗二氧化氯脅迫中有較好的緩解應(yīng)激作用。

3.3 氨氮脅迫下對(duì)羅非魚(yú)行為表現(xiàn)及存活率的影響

本研究結(jié)果表明，羅非魚(yú)在同一質(zhì)量濃度的氨氮脅迫下，F(xiàn)組的抗應(yīng)激能力較強(qiáng)，存活率最高。氨氮是養(yǎng)殖和運(yùn)輸水體中一種常見(jiàn)的毒性物質(zhì)[18]，主要是由餌料的殘留，動(dòng)物的排泄物等產(chǎn)生的。氨氮對(duì)魚(yú)類的毒害作用主要?dú)w因于其所包含的非離子氨的毒性[19]，當(dāng)水體中離子氨的濃度較高時(shí)，會(huì)使魚(yú)類發(fā)生氨中毒，出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)。本研究中，羅非魚(yú)剛開(kāi)始表現(xiàn)出上下急速竄游、轉(zhuǎn)圈，后表現(xiàn)為失去平衡，腹部朝上游動(dòng)，最后側(cè)臥瓶底，腹部朝上死亡，癥狀與樊海平等[20]研究的大刺鰍幼魚(yú)在氨氮脅迫下的中毒癥狀相似。在同一質(zhì)量濃度的氨氮溶液中，E組的應(yīng)激反應(yīng)比其它幾組的要強(qiáng)烈，F(xiàn)組的反應(yīng)最不強(qiáng)烈。

漁精元的主要成分是N-氨甲酰谷氨酸（NCG），有研究表明，大菱鲆幼魚(yú)中添加適量NCG有助于促進(jìn)機(jī)體內(nèi)源精氨酸合成，提高肌肉中精氨酸的含量，進(jìn)而促進(jìn)蛋白質(zhì)合成及提高機(jī)體免疫功能[21];NCG還具有修復(fù)腸道，提高魚(yú)蝦的抗應(yīng)激能力和免疫力，從而抵抗外界的各種刺激。本研究中，360 min后存活率最高組為F組，漁精元與同濃度的另外5種藥品相比顯著提高了羅非魚(yú)的免疫力和抗病能力，對(duì)氨氮脅迫有較好的緩解應(yīng)激作用。

參 考 文 獻(xiàn)：

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