吳文惠，王少卿

(1.山東中醫(yī)藥大學 藥學院，山東 濟南 250355；2.煙臺萬潤藥業(yè)有限公司，山東 煙臺 264006)

維格列汀(Vildagliptin)是用于治療2-型糖尿病的二肽基肽酶-IV (DPP-IV)抑制劑[1]。臨床研究表明，維格列汀降血糖效果顯著，服用安全，耐受性好，不良反應(yīng)少[2]。在維格列汀生產(chǎn)過程中用到二氯甲烷、丁醇和丁酮，為保證產(chǎn)品質(zhì)量、控制溶劑的殘留在法規(guī)要求的限度內(nèi)，須對溶劑殘留進行檢測[3]。本實驗依據(jù)人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)會(ICH)中對殘留溶劑的指導原則規(guī)定了二氯甲烷、乙醇和丁酮的限度，并依據(jù)《中華人民共和國藥典》2015年版第四部通則0861第二法中的殘留溶劑測定法，以及《化學藥物殘留溶劑研究的技術(shù)指導原則》，對維格列汀原料藥中的二氯甲烷、丁醇和丁酮殘留溶劑進行了研究。該方法簡單方便，準確度高，是檢測該藥品殘留溶劑的有效方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

氣相色譜儀(Agilent6890N)，頂空進樣器(AgilentG1888)，電子天平(精確度：0.00001g)。

1.2 試劑

維格列汀(煙臺萬潤藥業(yè)有限公司，批號：VPVGN14001、VPVGN14002、VPVGN14003、VPVGN14004、VPVGN15001)，二氯甲烷、乙醇、丁酮(氣相色譜純)，N,N-二甲基甲酰胺(色譜純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷為固定液的毛細管色譜柱(Agilent DB-624毛細管柱， 30m×0.32mm×1.80μm)；頂空平衡溫度90℃，頂空平衡時間45min，定量環(huán)溫度100℃，傳輸管線溫度110℃，頂空瓶容積20mL，進樣體積1mL；氣相起始溫度為40℃，維持5min，以每分鐘10℃的速率升溫至100℃，再以每分鐘30℃的速率升溫至230℃，維持3min，進樣口溫度200℃，檢測器溫度280℃；載氣為氮氣，流速3.0mL/min，分流比10∶1。

2.2 溶液的配置

空白溶液：取N，N-二甲基甲酰胺適量即可。

定位溶液：分別精密稱取乙醇、丁酮約500mg，二氯甲烷約60mg，分別置于3個100mL量瓶中，用二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液；精密量取貯備液1mL，置10mL量瓶中，用二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻即得3種殘留溶劑的定位溶液。

對照品溶液：精密量取乙醇、二氯甲烷和丁酮的貯備液各5mL，置同一50mL量瓶中，用二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻即得。

供試品溶液：精密稱定維格列汀樣品0.5g，置20mL頂空瓶中，精密加入N，N-二甲基甲酰胺5mL使溶解，即得供試品溶液。

2.3 專屬性和系統(tǒng)適用性試驗

精密量取空白溶液、定位溶液、對照品溶液5mL，置20mL頂空瓶中，密封。按“2.1”項下的色譜條件進樣，結(jié)果見表1。其結(jié)果表明乙醇、二氯甲烷、丁酮色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，3種溶劑主峰的理論板數(shù)均大于5000，對照品溶液連續(xù)5次重復(fù)進樣的各峰面積的RSD均小于10.0%。

表1 各色譜峰的分離度、理論塔板數(shù)和重復(fù)進樣各色譜峰峰面積的RSD

2.4 定量限和檢測限

精密稱取乙醇、二氯甲烷和丁酮適量，分別用二甲基甲酰胺溶解并逐步稀釋成一系列不同質(zhì)量濃度的溶液，分別精密量取5mL，置20mL頂空瓶中，密封，按“2.1”項下的色譜條件進樣。當信噪比為10∶1時，得各成分溶液的定量限依次為0.4997，0.4736，0.30078μg/mL；等信噪比為3∶1時，得各成分的檢測限依次為0.14991，0.14208，0.090234μg/mL。表明其定量限和檢測限均能符合維格列汀殘留溶劑的測定要求。

2.5 線性與范圍

精密稱取乙醇、二氯甲烷和丁酮貯備液適量，加二甲基甲酰胺配制成從各溶劑定量限到對照品溶液120%質(zhì)量濃度的6個質(zhì)量濃度：定量限、20%水平、40%水平、80%水平、100%水平、120%水平。取上述溶液各5mL，按“2.1”項下的色譜條件進樣，以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制線性回歸曲線，結(jié)果顯示二氯甲烷、乙醇和丁酮在定量限至限度120%的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(見表2)。

表2 3種殘留溶劑的線性回歸方程及檢測限

2.6 精密度

精密量取供試品溶液5mL，置20mL頂空瓶中，按“2.1”項下的色譜條件進樣，連續(xù)進樣6次；精密量取對照品溶液5mL，置20mL頂空瓶中，按 “2.1”項下的色譜條件進樣。按外標法以峰面積對6份供試品的殘留溶劑進行計算，結(jié)果表明乙醇和丁酮的RSD均小于10.0%(二氯甲烷未檢出)，精密度良好(見表3)。

表3 精密度試驗結(jié)果

2.7 加樣回收率

精密稱取維格列汀供試品9份，每份約0.5g，分別置于20mL頂空瓶中，每組3份分別平行加入用N,N-二甲基甲酰胺稀釋至40%、60%的對照品溶液，以及未稀釋的對照品溶液各5.0mL，使溶解，得9份回收率試驗溶液。取對照品溶液和回收率試驗溶液1～9，分別頂空進樣，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算回收率試驗溶液1～9中的溶劑含量。結(jié)果測得乙醇、二氯甲烷和丁酮的平均回收率分別為96.3%，97.9%，97.2%，RSD分別為3.6%，1.0%，2.8%，表明該方法準確性良好。

2.8 樣品殘留溶劑測定

取4批樣品，測定3種有機溶劑殘留量，結(jié)果見表3。結(jié)果表明4批樣品均未檢出二氯甲烷，乙醇和丁酮有微量檢出，但均遠遠低于限度要求，表明此法能有效的定量檢測維格列汀中的3種殘留溶劑，且該生產(chǎn)方法能有效控制殘留溶劑量。

表4 樣品殘留溶劑測定結(jié)果

3 討論

3.1 耐用性試驗考察

用二甲基甲酰胺溶解精密稱定的氯甲烷、乙醇和丁酮，得混合溶液，進樣，通過改變氣相起始溫度、檢測器溫度，各色譜峰的保留時間有所變化，但被測物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，3種溶劑主峰的理論板數(shù)均大于5000(見表5)，結(jié)果表明此方法耐用性好。

表5 耐用性試驗結(jié)果

表5(續(xù))