葡萄籽中原花青素的提取及在護膚品中的應用

黃雪秋，韋有杰，謝彝健，馬 璐

(百色學院預科教育學院，廣西 百色 533000)

原花青素是一種新型美白抗氧化的天然植物提取物，是一種天然的抗氧化劑[1-3]。其被認定為當前世界上所能提取到的抗氧化與清除人體內自由基能力最強的物質[4-5]。在葡萄籽中提取的原花青素可以消除與抵抗人體產(chǎn)生的自由基，有效幫助人體對維生素的吸收，抗衰老，易被人體表皮吸收，使肌膚保持緊致水潤，減少皺紋與角質的產(chǎn)生,含有原花青素的護膚品在與皮膚接觸的同時收縮毛孔，緊致肌膚，從而使皮膚水潤清爽不粗燥[6-7]。所以可以合理利用我國天然廣闊的地理資源優(yōu)勢，開發(fā)出產(chǎn)各種含有原花青素的護膚品化妝品。

1 實驗方法

1.1 葡萄籽原花青素的粗提取與吸光度測定

(1)葡萄籽粉碎→烘干→石油醚浸泡18h→抽濾→干燥→乙醇溶液浸提→抽濾→轉蒸→粗提物

取粗提物1mL，加蒸餾水稀釋并定容至250mL，測吸光度，記錄211λnm的吸光度值。

1.2 純化葡萄籽原花青素提取物

95%的無水乙醇浸泡D101大孔吸附樹脂，靜置24h后裝柱，上樣。依次用30%、50%、70%、90%的乙醇溶液梯度洗脫，洗脫液旋蒸，得到純化葡萄籽原花青素提取物。

1.3 原花青素面霜的配制

表1 面霜基質原料配比

表1(續(xù))

加熱攪拌溶解硬脂酸、硬脂酸甘油酯、氫化聚葵烯與尼泊金甲酯，之后依次加入二甲基硅油、合成角鯊烷、液體石蠟、苯氧乙醇，攪拌至均相，記為A相。黃原膠和卡波姆940加入到40℃溫水中，攪拌至其充分溶脹，接著依次加入甘油、丁二醇、泛醇、三乙醇胺、EDTA Na與海藻糖攪拌均勻，記為B相。將A、B相混合攪拌均勻后，再分別等量加入10%的抗壞血酸、粗提葡萄籽原花青素和純提葡萄籽原花青素，加純凈水至100g，攪拌均勻，之后進行面霜基礎理化指標和穩(wěn)定性試驗，得到三種符合標準的抗氧化型面霜。

1.4 純提葡萄籽原花青素面霜自由基清除率的測定

取0.1g護膚品基質和面霜分別稀釋至100mL，之后進行紫外吸光度的測定。

①取純提原花青素面霜稀釋液2mL+2mL蒸餾水測基線。

②取面霜基質稀釋液2mL+2mL70%無水乙醇DPPH溶液測定空白吸光度取波峰517λnm的數(shù)值記為A空白。

③取純提原花青素面霜稀釋液2mL+2mL70%無水乙醇DPPH溶液測樣品吸光度同取波峰為517λnm的數(shù)值記為A樣品。

1.5 對比三種面霜體外清除DPPH自由基的能力

取4支10mL毫升的玻璃試管，一支添加2mL葡萄籽粗提物護膚品稀釋液，一支添加稀釋后的抗壞血酸溶液2mL，另一只添加2mL葡萄籽純提物護膚品稀釋液，最后一支做對照組添加4mL的DPPH稀釋液；往前三支試管各加2mL DPPH稀釋液，觀察溶液的變化情況。

2 實驗結果與分析

2.1 乙醇體積分數(shù)對葡萄籽粗提物吸光度的影響

圖1 無水乙醇濃度與吸光度關系線性圖

圖1可以看出乙醇濃度為60%時，葡萄籽粗提物吸光度，說明該濃度乙醇最利于葡萄籽原花青素的提取。造成此結果的原因可能是葡萄籽中的物質在此濃度時趨于飽和溶解狀態(tài)，且葡萄籽內的某些物質是需要蒸餾水溶解出的，水浴乙醇協(xié)同才能能好地將葡萄籽中的原花青素浸提出來，而更高濃度的無水乙醇溶液中蒸餾水的比例相應減少，水所能溶解出葡萄籽中物質變少，所以在比60%更高濃度的無水乙醇溶液的吸光度下降。

2.2 攪拌溫度對葡萄籽粗提物吸光度的影響

圖2 攪拌溫度與吸光度關系線性圖

葡萄籽中溶解的物質不僅與乙醇濃度相關，也與加熱攪拌時的溫度有關，從圖2可以看出，相同條件下，攪拌溫度為60℃時最有利于葡萄籽原花青素的提取。過低的溫度無法有效斷裂葡萄籽中的氫鍵，使葡萄籽中的多酚物質不能溶到溶液中，由圖可看出葡萄籽在60%乙醇浸提溶液中的攪拌溫度為60℃時，所得粗提取的吸光度最高；溫度過高，葡萄籽中的多酚物質在高溫狀態(tài)下會遭到破壞，在攪拌溫度為65℃時葡萄籽粉末中可能有少量的物質遭到破壞無法更完全的提取而出，從而吸光度相應下降。

2.3 攪拌時間對葡萄籽粗提物吸光度的影響

圖3 攪拌時間與吸光度關系線性圖

由圖3可得，攪拌時間為90min時所測得的吸光度曲線最好，原因可能是攪拌時間少的情況下葡萄籽中的物質在溶液中溶解不完全，在圖中60min比30min吸光度曲線高可以說明，而在超過90min時，長時間的高溫也會使溶解后的物質被破壞，而在150min分鐘時再次增高，可能的原因是溶解出了葡萄籽中多酚以外的物質，這些多溶解的物質在溶液中，在后來測曲線的時候還依舊存在，即造成吸光度增高。

綜上，當浸提溶液濃度為乙醇60%、攪拌溫度為60℃、浸提時間為90min時，葡萄籽粗提物的吸光度值最高，即該提取條件為較優(yōu)的葡萄籽原花青素提取條件。

2.4 純提葡萄籽原花青素面霜的DPPH自由基清除率

記錄實驗數(shù)據(jù)得到A空白=0.317，A樣品=0.015；由自由基清除率計算公式得：清除率=(1- A樣品/A空白)%得(1-0.317/0.015)%≈95.3%。

2.5 對比三種抗氧化型面霜的體外自由基清除能力

圖4 粗提物、維生素C、純提物清除自由基對比圖

圖4的試管從左至右分別為添加粗提物、抗壞血酸、純提物、DPPH稀釋液。由上圖的變色情況可分析得出，葡萄籽純提物的清除自由基能力最強，抗壞血酸清除率比葡萄籽粗提物強。

3 小結

由本實驗得出葡萄籽中原花青素的提取率與溶液濃度，攪拌溫度，攪拌時間都相關，最佳的提取條件為60%乙醇濃度，60℃的攪拌溫度，90min的攪拌時間。且最后自由基清除率排行為純提物>維生素C>粗提物。所得原花青素面霜經(jīng)試驗，其理化性質穩(wěn)定，無不良反應，可安全作用于人體表皮。