于春萍　李若飛　付子杰　蘭丁璇

【摘? 要】肝臟作為主要代謝器官在機(jī)體中發(fā)揮重要作用。而肝病的發(fā)生率一直居高不下，病毒性肝炎在肝病中占據(jù)重要的地位，因此選取合適的肝損傷模型，對(duì)病毒性肝病的發(fā)病機(jī)制的研究、篩選較為有效的保肝藥物、探索其保肝原理以為臨床治療病毒性肝炎提供醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)具有十分重要的意義。

【關(guān)鍵詞】急性免疫性肝損傷;動(dòng)物模型;刀豆蛋白;脂多糖;卡介苗

【中圖分類(lèi)號(hào)】R575????? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A????? 【文章編號(hào)】1004-7484（2020）09-0062-01

1.刀豆蛋白A（Con A）

Con A是一種植物血凝素，具有很強(qiáng)的促有絲分裂作用，可作為一種T細(xì)胞絲裂原。ConA具有很強(qiáng)的嗜肝性，在體內(nèi)經(jīng)代謝后，產(chǎn)物仍具有活性并且可入侵免疫系統(tǒng)，從而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)特異性殺傷肝臟細(xì)胞導(dǎo)致肝臟細(xì)胞壞死。此后，藥物修飾蛋白從細(xì)胞中溢出，枯否細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及 B 細(xì)胞等抗原提示細(xì)胞對(duì)其進(jìn)行吞噬，分解為小分子多肽。多肽分子溢出并存留于細(xì)胞表面，T細(xì)胞分化群（CD4+T）細(xì)胞對(duì)其進(jìn)行識(shí)別，T細(xì)胞被激活，分泌并釋放多種細(xì)胞因子，在較短的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量中性粒細(xì)胞 、巨噬細(xì)胞 、T細(xì)胞等炎癥性細(xì)胞，浸潤(rùn)小鼠肝臟細(xì)胞，進(jìn)而導(dǎo)致肝臟損傷。李紅^[1-2]等人采用給C57/BL小鼠尾靜脈注射劑量為12mg/kg的Con A處理8小時(shí)后造模成功;單瑩瑩^[3-4]等人給ICR小鼠尾靜脈注射40mg/kg的Con A，8小時(shí)后處死造模成功。造模成功的小鼠可見(jiàn)精神萎靡，活動(dòng)減少，蜷臥，抱團(tuán)，豎毛等身體特征，另外（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）ALT、（天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）AST等肝功能指標(biāo)升高，IL- 10、IL- 2、IL- 12、TNF-α、C- 干擾素等炎癥因子水平升高，與正常組存在顯著性差異;從肝臟的病理學(xué)觀察可見(jiàn)小鼠肝臟淤血腫大，呈現(xiàn)暗紅色，肝組織可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);脾臟淤血腫大。Con A引起的動(dòng)物肝損傷模型與人類(lèi)病毒性肝炎引發(fā)的免疫性肝損傷的病理生理過(guò)程相似，此模型有助于我們對(duì)病毒性肝炎的病理過(guò)程及藥物治療等進(jìn)行研究。Con A有較強(qiáng)的劑量依賴性，隨著劑量的加大，肝損傷的程度也越嚴(yán)重。另外，Con A肝毒性專性高，能夠特異性的損傷肝臟細(xì)胞，并未發(fā)現(xiàn)對(duì)脾、心等肝外器官的損傷。并且刀豆蛋白誘導(dǎo)的小鼠免疫性肝損傷因?yàn)椴恍枰A(yù)先致敏還具有操作簡(jiǎn)單迅速的特點(diǎn)。

2.卡介苗和脂多糖

①脂多糖引發(fā)小鼠急性肝損傷模型建立

脂多糖（LPS）產(chǎn)生于革蘭氏陰性菌，進(jìn)入血液循環(huán)后，先天免疫系統(tǒng)被激活，導(dǎo)致大量的炎癥因子釋放。程訸等人用腹腔注射LPS（8、15、20 mg/kg）證明LPS可成劑量依賴性導(dǎo)致小鼠急性肝損傷，導(dǎo)致小鼠肝臟產(chǎn)生炎性腫大，肝臟中央靜脈周?chē)资軗p部位出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞，對(duì)肝細(xì)胞造成損傷從而引起血清中谷氨酸轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）水平上升。張曉慧^[3]等人采用小鼠禁食不禁水24 h后腹腔注射LPS （10 mg/kg） 構(gòu)建肝損傷模型。在腹腔注射LPS 4 h， 摘眼球取血，進(jìn)行一系列肝功能及病理學(xué)檢測(cè)，結(jié)果顯示肝功能水平明顯升高，肝小葉周?chē)醒腱o脈去由于最易受到損傷而表現(xiàn)出細(xì)胞凋亡壞死， 肝細(xì)胞索正常形態(tài)遭受破壞， 導(dǎo)致大量肝細(xì)胞壞死， 胞核固縮并向周?chē)鷶U(kuò)散或完全溶解破碎， 細(xì)胞發(fā)生空泡樣變及被炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，同時(shí)表現(xiàn)出抗氧化能力明顯降低，TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS等炎性因子明顯升高，上述結(jié)果顯示此方法對(duì)小鼠急性肝損傷造模成功。脂多糖造成的急性肝損傷模型重復(fù)性好，簡(jiǎn)單易行，可直接作用或間接作用的造成肝細(xì)胞損傷，且其誘導(dǎo)的肝臟細(xì)胞壞死在重癥病毒性肝炎的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程起到重要作用。

②BCG注入小鼠體內(nèi)首先激活敏性T淋巴細(xì)胞，并且大量集中于肝臟;隨后注射LPS后進(jìn)一步使致敏的巨噬細(xì)胞激活，促使致敏的肝臟細(xì)胞釋放大量細(xì)胞的導(dǎo)致小鼠急性免疫性肝損傷的因子，如一氧化氮、腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素、白三烯等。邱英峰^[4]等人采用給SD大鼠腹腔注射BCG劑量5 .0×10 ⁷ 菌數(shù)鼠 +LPS劑量30μg/kg可達(dá)到很好的造模效果。陳偉平等人給予小鼠BCG 5mg/2ml， 12 d后， 注射LPS 7.5g/0.2ml以誘導(dǎo)免疫性肝損傷模型， 禁食12 h后取血處死，達(dá)到很好的造模效果。肝臟損時(shí)，血清中ALT 、AST的含量明顯升高、肝組織中丙二醛 （MDA）明顯升高 、還原型谷胱甘肽 （GSH） 水平明顯降低。肝組織病理切片可見(jiàn)產(chǎn)生大量中、重度炎性細(xì)胞^[5]?？ń槊绾椭嗵堑穆?lián)合使用得到的大鼠模型相較于卡介苗以及脂多糖的單獨(dú)使用效果明顯，模型簡(jiǎn)便易行持續(xù)時(shí)間相對(duì)來(lái)說(shuō)時(shí)間久。

討論：

目前急性肝損傷的造模方法已有多種類(lèi)型，但是急性免疫性肝損傷的造模方法相對(duì)于其他化學(xué)性肝損傷數(shù)量較少，仍存在諸多不足，并且致病機(jī)制復(fù)雜尚未完全闡明，所以尋找合適的造模方法具有十分重要的意義。本文總結(jié)了常用并且較為成熟的急性免疫性肝損傷的造模方法，以為后續(xù)的科學(xué)研究提供方便。

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