【摘 ?要】本研究通過(guò)測(cè)定不同生長(zhǎng)年限（一年生、二年生、三年生、四年生）黃連不同部位（葉、莖、根、根莖）中生物堿類(lèi)次生代謝產(chǎn)物（非洲防己堿、藥根堿 、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿）的相對(duì)含量，揭示藥材黃連的主要藥用成分在不同部位中隨時(shí)間的變化規(guī)律，研究發(fā)現(xiàn)：在所有年生黃連的所有部位中，均是小檗堿含量最高，且葉、莖、根、根莖中小檗堿含量均呈遞增趨勢(shì);6種主要生物堿中，除了藥根堿，均是在四年生黃連根莖中含量達(dá)到最高，藥根堿在三年生根中的含量最高;四年生根莖（黃連藥用部位）中，生物堿含量由高到低依次為小檗堿、黃連堿、巴馬汀、表小檗堿、非洲防己堿，藥根堿。此研究對(duì)黃連中生物堿類(lèi)資源的開(kāi)發(fā)和黃連的科學(xué)化種植提供了一定的指導(dǎo)意義。

【關(guān)鍵詞】黃連;不同生長(zhǎng)年限;不同部位;生物堿;相對(duì)含量

【中圖分類(lèi)號(hào)】R969.1 ? ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ? ?【文章編號(hào)】1004-7484（2019）03-0207-01

黃連為毛茛科黃連屬多年生草本藥用植物，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，位列上品，有清熱燥濕，瀉火解毒之功效，主含小檗堿，黃連堿，巴馬汀等異喹啉類(lèi)生物堿，藥理作用有抗菌，抗病毒，抗?jié)?，降血糖，降血脂等。黃連栽培周期較長(zhǎng)，一般5-9年采收，傳統(tǒng)采收時(shí)間為秋季，也有春季采收，黃連僅少量根莖藥用，其余部分均廢棄，造成了藥材資源的浪費(fèi)。本研究通過(guò)測(cè)定不同生長(zhǎng)年限黃連不同部位中生物堿類(lèi)次生代謝產(chǎn)物的含量[1-2]，揭示中藥材黃連藥用成分的積累規(guī)律，為中藥材規(guī)范化種植和采收提供科學(xué)依據(jù)和指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1材料

供試材料為一到四年生黃連新鮮藥材，種植于陜西省鎮(zhèn)坪縣，經(jīng)鑒定為 Coptic chinensis。

1.2 儀器與試藥

儀器： SHIMADZU公司高效液相色譜儀（日本·島津）;SPD-20A檢測(cè)器;Sartorius BSA124S電子天平（Sartorius公司，中國(guó)）;Sartorius BT125D電子天平（Sartorius 公司，中國(guó)）;KH-500DB超聲儀（昆山禾木超聲儀器有限公司，中國(guó)）;CT-6021A 筆式pH計(jì)（深圳市柯迪達(dá)電子有限公司，中國(guó)）

試藥：乙腈（色譜級(jí)，Tedia，USA，LOT16045020）;純凈水（娃哈哈集團(tuán)有限公司;磷酸（AR 南京化學(xué)試劑有限公司，中國(guó)）;甲醇（色譜級(jí)，江蘇漢邦試劑有限公司，中國(guó)）;磷酸二氫鉀（AR，隴西化工股份有限公司，中國(guó)）;十二烷基硫酸鈉（AR，上海阿拉丁生化科技股份有限公司，中國(guó)）

1.3方法

1.3.1提取條件

將不同年生的新鮮黃連藥材洗凈，烘干至恒重，分別取不同年生黃連藥材的不同部位（1～3年生取根、莖、葉，4年生取根、莖、葉、根莖）研磨至粉末狀，取藥材粉末約0.1g （過(guò)60目篩），精密稱(chēng)定，置于200ml錐形瓶中，精密加入125 ml甲醇-鹽酸 （ 100：1，v/v ）的混合溶液，密塞，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲提取30 min。提取結(jié)束后放冷，再次稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇-鹽酸（100：1，v/v）的混合溶液補(bǔ)足失重，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液，精密吸取10 μl注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積[3]。

1.3.2色譜條件

流動(dòng)相：以乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液（40：60）（每1L中加入十二烷基硫酸鈉1g，再以磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.0）;色譜柱：Agilent ZORBAX SB C18（4.6×250 mm，5.0 μm）;檢測(cè)器：VWD，345 nm;柱溫：25℃;流速：1.0 ml/min;進(jìn)樣體積：10 μl 。

2 結(jié)果與分析

不同年限黃連不同部位生物堿類(lèi)次生代謝產(chǎn)物相對(duì)含量 如圖1所示，從不同年限的角度分析，得出：（1）所有年生黃連的所有部位中，均是小檗堿含量最高。而且，除了三年生，葉、莖、根、根莖中小檗堿含量均呈遞增趨勢(shì);（2）6種主要生物堿中，除了藥根堿，均是在四年生根莖中含量最高，藥根堿在三年生根中的含量最高。（3）四年生根莖（黃連藥用部位）中，生物堿含量由高到低依次為小檗堿、黃連堿、巴馬汀、表小檗堿、非洲防己堿，藥根堿。

從不同部位的角度分析，得出：（1）黃連莖中各生物堿含量隨年份變化不是很明顯;

（2）黃連葉中小檗堿前三年遞增，第四年下降。藥根堿正好相反，前三年遞減，第四年上升。黃連葉中均未檢測(cè)出表小檗堿，其余生物堿，除了在四年生葉中含量增加外，變化不大。（3）從黃連根中生物堿總量可以看出，明顯隨時(shí)間遞增。其中，表小檗堿、黃連堿、小檗堿隨時(shí)間含量遞增，而非洲防己堿、藥根堿、巴馬汀的含量卻在三年生根中最高。

從不同部位的角度分析，得出：非洲防己堿四年生根莖中含量顯著高于其它;藥根堿在根中含量均高于其他部位，三年生根中達(dá)到最大值;表小檗堿在葉中均不表達(dá)，在莖中隨時(shí)間變化不明顯，在根中隨時(shí)間遞增，四年生根中含量最大。黃連堿在葉中含量均很低。在莖中變化不大，四年生莖中含量最低。在根中遞增。四年生根莖中達(dá)到極值;巴馬汀在四年生根莖中含量顯著高于其他。在葉中遞增。莖中基本遞增;小檗堿在四年生根莖中含量顯著高于其他，在根中遞增，莖中基本遞增，葉中在三年生達(dá)到最大值。

3 討論

2015版中國(guó)藥典第一部對(duì)黃連中小檗堿、表小檗堿、黃連堿、巴馬汀等4種生物堿的含量作出以下規(guī)定：以干燥品計(jì)算，以鹽酸小檗堿計(jì)，含小檗堿不得少于5.5 %，表小檗堿不得少于0.8 %，黃連堿不得少于1.6 %，巴馬汀不得少于1.5 %。藥材黃連的應(yīng)用非常廣泛，而黃連對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求非常嚴(yán)格，性喜陰寒而多生長(zhǎng)于高寒、陰蔽、濕潤(rùn)的山區(qū)，生長(zhǎng)極為緩慢，常需要5-7年才能采收。黃連栽培成本比較高，如果能將黃連生產(chǎn)副產(chǎn)物（包括黃連葉、黃連葉柄、黃連須等）也充分利用，不僅更有效地利用了資源，也可以降低生產(chǎn)成本。近年研究證明，黃連須、葉、莖均含有不同程度的黃連生物堿，黃連須根含3%的生物堿，現(xiàn)代藥理研究表明，黃連主要有效成分生物堿類(lèi)不僅具有抗菌、抗病毒的功效，還具有降血糖、降血脂、抗血小板[4]。在黃連收獲時(shí)，黃連地需要“亮棚”（去掉遮蔭棚），強(qiáng)光直接照射到植株上，黃連植株中所含的營(yíng)養(yǎng)成分等將向根蓮轉(zhuǎn)移[5]。黃連葉、莖和須根中生物堿在什么時(shí)候如何分布，以及眾多產(chǎn)區(qū)中哪一產(chǎn)區(qū)的黃連副產(chǎn)物中生物堿含量高，這些都值得我們?nèi)ド钊胙芯俊?/p>

參考文獻(xiàn)

[1]耿志鵬， 鄭海杰， 張藝， 羅維早， 瞿顯友.RP-HPLC 測(cè)定不 同產(chǎn)地黃連中 6 種生物堿的含量[J].中國(guó)中藥雜志， 2010，35（19）：2576-2580. Sato

[2]Yan D， Jin C， Xiao XH，etal. Antimicrobial properties of berberines alkaloids in Coptis chinensis Franch by microcalorimetry[J].Journal of Biochemical and Biophysical Methods，2008，70（6）： 845-849.

[3]于玥，張考飛，李軍，等. 保健食品中添加小檗堿的檢測(cè)方法研究 [J]. 藥物分析雜志，2013，36（9）：1551-1554.

[4]Sato FK， Nobuhiko D， Morishige T， et al Molecular characterization of isoquinoline alkaloidbiosynthesis in Coptis japonica cells[ J] . J Biol Chem ， 2002， 277：830-835.

[5]劉丹，吳田澤，孟祥霄，崔寧，汪波，劉霞.無(wú)公害黃連栽培技術(shù)體系探討[J].中國(guó)現(xiàn)代中藥，2018，20（11）：1396-1403+1410.

作者簡(jiǎn)介：

劉卉，女，1979-07，漢，江蘇海安，職稱(chēng)：主管中藥師，職位：藥劑科副主任，研究方向：中藥資源的開(kāi)發(fā)與利用。