豬群在不同生長期白細(xì)胞介素監(jiān)測

細(xì)胞因子具有多種生物學(xué)效應(yīng)，由特定的細(xì)胞分泌的小分子多肽，它能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能、介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，還參與免疫反應(yīng)、機(jī)體的修復(fù)等多種生理活動。細(xì)胞因子通?？煞譃橼吇c黏附因子、集落刺激因子和生長因子、白細(xì)胞介素（IL）、干擾素和腫瘤壞死因子。

作為一類細(xì)胞因子，白細(xì)胞介素主要通過與細(xì)胞表面的受體相結(jié)合，作用于白細(xì)胞，同時(shí)也可作用于其他細(xì)胞。它們可作用于同一種免疫細(xì)胞,之間可以相互作用,而它們自身又受到機(jī)體內(nèi)多種因素的調(diào)節(jié)。白細(xì)胞介素具有多種生物學(xué)功能,可刺激細(xì)胞增殖和分化、提高機(jī)體抗感染和細(xì)胞殺傷能力、調(diào)節(jié)細(xì)胞膜表面分子的分泌合成、調(diào)理炎性反應(yīng)、協(xié)助完成造血干細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的生命活動等。白細(xì)胞介素多肽鏈被糖基化，因糖基不同，其半衰期及功能都有所不同。

白細(xì)胞介素根據(jù)產(chǎn)生反應(yīng)的不同分為Th1和Th2種類型，其中Th1白細(xì)胞介素包括IL-2、IL-12、IL-18等，主要參與細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，也可以刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體；Th2白細(xì)胞介素包括IL-4、IL-5、IL-10等，通常參與B細(xì)胞活化，并調(diào)節(jié)抗體的產(chǎn)生，主要調(diào)節(jié)動物機(jī)體體液免疫應(yīng)答。白細(xì)胞介素可作為分子佐劑，適用于多種抗原疫苗，以增強(qiáng)疫苗的免疫效果。IL-2、IL-4、IL-5是三種功能不同的白介素，但它們之間有密切的相關(guān)性。IL-2能調(diào)控免疫系統(tǒng)中白細(xì)胞的活性，促進(jìn)T細(xì)胞的增殖，參與抗原抗體反應(yīng)及造血和腫瘤的監(jiān)控；IL-4活化B細(xì)胞、刺激T細(xì)胞增殖，增強(qiáng)CTL細(xì)胞毒活性、巨噬細(xì)胞的吞噬及表達(dá)MHCII的能力，還可以促進(jìn)EPO、G-CSF、M-CSF和IL-3的克??；IL-5促進(jìn)B細(xì)胞生長、分化，并刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，促進(jìn)B細(xì)胞、T細(xì)胞產(chǎn)生IL-2受體，誘導(dǎo)CTL形成，促進(jìn)酸性粒細(xì)胞分化、成熟。本文通過監(jiān)測不同生長階段豬群IL-2、IL-4、IL-5的水平，來評估動物在不同階段的免疫水平，為提高動物抵御疫病能力及養(yǎng)殖場生產(chǎn)效率提供依據(jù)。

一、材料與方法

1.實(shí)驗(yàn)器材。單道、12道移液器、96孔U型血清稀釋板、37℃恒溫培養(yǎng)箱、洗液器、離心機(jī)、iMark-酶標(biāo)儀。

2.血清樣品。江西某養(yǎng)殖場提供2、4、6、8、10、12、24周齡商品豬血清各30份。

3.所用試劑盒。豬白細(xì)胞介素2、豬白細(xì)胞介素4、豬白細(xì)胞介素5酶聯(lián)免疫分析試劑盒，均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

4.實(shí)驗(yàn)方法及判定標(biāo)準(zhǔn)。采用固相ELISA測定實(shí)驗(yàn)動物血清中IL-2、IL-4、IL-5的水平,具體方法如下：

1）分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔加50uL不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品。

2）設(shè)置空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，剩余步驟相同）、待測樣品孔。在待測樣品孔中先加樣品稀釋液40uL，然后再加待測樣品10uL。

3）每孔加入酶標(biāo)試劑100uL，空白孔除外。

4）用封板膜封板后，置于37℃避光溫育30min。

5）將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋后備用。

6）小心揭開封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

7）每孔先加入顯色劑A 50uL，再加入顯色劑B 50uL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15min。

8）每孔加終止液50ul，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色）。

9）以空白孔調(diào)零，測定各孔的OD450nm（測定應(yīng)在加終止液后15min以內(nèi)進(jìn)行）。

結(jié)果計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

二、結(jié)果

1.在豬群的生長階段，IL-2始終處于相對較高的水平，IL-5次之，IL-4含量相對較低。

2.豬群在2～10周齡三種白細(xì)胞介素的含量變化不明顯，處于相對穩(wěn)定的水平，10～12周齡三種白細(xì)胞介素的含量均有所升高，IL-2的增高幅度較為明顯，監(jiān)測到24周齡，三種白細(xì)胞介素都出現(xiàn)下降趨勢(見表1、圖1）。

三、討論

1.2～4周齡仔豬處于哺乳階段，因母乳中含豐富的細(xì)胞因子，仔豬可以通過攝取母乳來獲得IL-2、IL-4、IL-5；此階段豬只的免疫系統(tǒng)還發(fā)育不完善，受外界物質(zhì)刺激不能夠產(chǎn)生大量的白細(xì)胞介素。

2.6～8周齡仔豬已經(jīng)斷奶，仔豬又不能從其他途徑獲得IL-2、IL-4、IL-5，而不同的白細(xì)胞介素有各自的半衰期，使IL-2、IL-4、IL-5開始出現(xiàn)下降趨勢。

表1 三種白細(xì)胞介素在豬群不同生長階段的檢測結(jié)果

圖1 豬群生長周期內(nèi)三種白細(xì)胞介素含量對比

3.10周齡的豬只免疫系統(tǒng)已經(jīng)完善成熟，為提高動物機(jī)體的抗病能力，此時(shí)集中開始接種各種動物疫苗，在疫苗抗原的刺激下，IL-2、IL-4、IL-5增加明顯；隨著時(shí)間的延續(xù)，12～24周齡IL-2、IL-4、IL-5逐漸開始下降。

4.IL-2、IL-4、IL-5不僅可以作用于免疫細(xì)胞，而且它們之間也相互作用調(diào)節(jié)，這種嚴(yán)密的調(diào)節(jié)機(jī)制，能使機(jī)體免疫機(jī)能處于相對穩(wěn)定的狀態(tài)，更高效的發(fā)揮各種細(xì)胞因子在體內(nèi)的調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，白細(xì)胞介素在機(jī)體免疫應(yīng)答過程起著重要的作用，同時(shí)它們的水平也能反應(yīng)出豬群在各個(gè)生長階段抵御疫病侵襲的能力，為養(yǎng)殖戶做好動物疫病的防控提供科學(xué)可靠的參考依據(jù)，最大限度的提高生產(chǎn)效率。