何小華，鄭曉霞，黃艷妮，劉純，程艷玲

(山東省藥學(xué)科學(xué)院，濟(jì)南 250101)

1 引 言

外科手術(shù)止血不及時(shí)或不徹底導(dǎo)致失血過多時(shí)有發(fā)生[1-2]，常用結(jié)扎、縫合、電凝、可吸收多糖止血夾等方法止血[3]，效果明顯。胸外科手術(shù)出血，影響手術(shù)視野，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致患者死亡。在止血過程中，常規(guī)止血方法不能進(jìn)行大范圍止血，而電凝會導(dǎo)致傷口及周圍組織損傷[4]。目前，用于臨床的止血材料較多，如奧地利的Taehocomd 可吸收多糖創(chuàng)面止血封固劑，英國的Surgicel 氧化再生纖維素，均有止血效果[5-6]，但都具有一定的局限性，如 Taehocomd 的止血效果慢，而 Surgicel對神經(jīng)組織有毒副作用[7-8]，增添了手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。因此，胸外科手術(shù)亟需一種安全、有效、物美價(jià)廉的止血材料。本研究旨在通過建立巴馬小型豬肺部創(chuàng)面出血模型，觀察可吸收多糖止血材料作用于肺出血創(chuàng)面達(dá)到完全止血的時(shí)間、出血量及材料用量，并對可吸收多糖止血材料的安全性進(jìn)行評價(jià)。

2 材料和方法

2.1 動物、試劑與儀器

巴馬小型豬，由北京實(shí)創(chuàng)世紀(jì)小型豬養(yǎng)殖基地提供，10只，6月齡以上，雌雄各半，體重10～15 kg，動物合格證號為1103491911000014。

可吸收多糖止血材料，1.0 g/支，日照天一生物醫(yī)療科技有限公司；外科術(shù)中止血裝置，SM005，巴德醫(yī)療科技有限公司；速眠新，2 mL/支，敦化市圣達(dá)動物藥品有限公司；硫酸阿托品注射液，2 mL/支，芮城天通動保藥業(yè)有限公司；戊巴比妥鈉，25 g/瓶，德國默克公司；頭孢噻呋鈉，0.1 g/支，河南新正好生物工程有限公司。

電子天平，LE203E/02，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；電子計(jì)價(jià)秤，ACS-JJ-Tiger，梅特勒-托利多(常州)測量技術(shù)有限公司；全自動生化分析儀，日立7180，日本株式會社日立高新技術(shù)有限公司；全自動血凝分析儀，SYSMEX CA1500，日本SYSMEX公司；全自動血液分析儀，SYSMEX XT-2000iv，日本SYSMEX公司。

2.2 建立巴馬小型豬肺出血模型

用速眠新(0.1 mL/kg)進(jìn)行小型豬基礎(chǔ)麻醉，待臥倒后，再用1%戊巴比妥鈉(20 mg/kg)維持麻醉。常規(guī)消毒，打開胸腔，在肺底部邊緣剪下長約1 cm肺組織，清除周圍血液，暴露出血點(diǎn)，立即將供試品直接噴在出血部位，直至止血完成并觀察止血情況。記錄止血時(shí)間，出血量及樣品使用量。上市對照組做同樣處理。紗布對照組使用已精確稱重的無菌紗布壓創(chuàng)口，持續(xù)按壓1 min，此后每隔30 s觀察一次，直至止血完畢，用少量生理鹽水浸透紗布，輕輕揭開，以免造成再次出血，如止血超過5 min，則記錄5 min，認(rèn)為紗布止血無效。

術(shù)后處理：術(shù)后包扎固定傷口，返回籠中飼養(yǎng)7 d。術(shù)后連續(xù)3 d肌注頭孢噻肟鈉20 mg/kg/次/d，每天觀察動物活動情況。術(shù)前，剖檢前進(jìn)行臨檢相關(guān)指標(biāo)檢測。

2.3 巴馬小型豬各臟器解剖觀察

所有實(shí)驗(yàn)組的小型豬于術(shù)后7 d進(jìn)行解剖，取心、肝、脾、肺、腎、腦，觀察各臟器體重變化及樣品組織粘附性、降解情況、組織反應(yīng)及有無血栓形成情況。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 止血試驗(yàn)結(jié)果

紗布對照組、供試品組與上市對照組的止血試驗(yàn)結(jié)果見表1。與紗布對照組比較，供試品組與上市對照組肺出血創(chuàng)面止血時(shí)間均顯著縮短(P<0.01)，供試品組肺創(chuàng)面出血量明顯減少(P<0.05)，上市對照組出血量減少，但與紗布對照組比較，無顯著差異(P>0.05)；供試品組肺出血創(chuàng)面樣品用量比上市對照組減少(P<0.05)，止血時(shí)間和出血量無顯著差異(P>0.05)。

紗布對照組、供試品組與上市對照組術(shù)中止血效果觀察評分見表1。與紗布對照組比較，供試品組與上市對照組肺出血創(chuàng)面的止血效果均為優(yōu)良(P<0.01)，且供試品組的出血量少，手術(shù)視野比更好 ，見圖1。

術(shù)后7 d，各組小型豬肺部創(chuàng)面全部愈合，因此，供試品組和上市對照組對傷口愈合時(shí)間未見明顯影響。

組別止血時(shí)間(s)出血量(mL)止血材料用量(mg)止血評分紗布對照組250.17±80.231.35±0.850.00±0.000.67±1.03供試品組33.69±19.31??0.43±0.36?144.00±76.96△3.83±0.41??上市對照組40.95±20.22??0.80±0.78421.17±248.593.50±0.84??

注：n=3，*P<0.05，**P<0.01，與紗布對照組比較；△P<0.05，與上市對照組比較。

3.2 術(shù)后臨床及解剖觀察

各組小豬術(shù)后3 d，精神稍差，活動減少，飲食稍偏少，二便正常。術(shù)后7 d，查體傷口愈合良好，可見少許線結(jié)反應(yīng)，未見明顯感染跡象，見圖1。

圖1各組巴馬小型豬傷口愈合情況

Fig.1Wound healing of Bama mini pig in each group

肺出血創(chuàng)面剖檢觀察：7 d后剖檢，各組小型豬胸壁切口與肺組織有黏連，肺切口處部分組織實(shí)變，未見明顯血栓形成病變，見圖2。因此，可吸收多糖止血材料對傷口愈合沒有明顯影響。

圖2各組巴馬小型豬胸壁與周圍肺組織黏連情況

Fig.2Adhesion of chest wall and peripheral lung tissue of Bama mini pig in each group

3.3 所有實(shí)驗(yàn)組各臟器體重變化比較

各組解剖臟器體重占比見表2。術(shù)后7 d，供試品組與紗布對照組腦體重占比分別為3.01±0.33、3.29±0.53，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著差異(P<0.05)。術(shù)后7 d，供試品組和上市對照組腦體重均減輕，供試品組減輕更明顯。

項(xiàng)目名稱紗布對照組供試品組上市對照組心5.19±0.485.44±0.375.21±0.29肝28.95±3.1823.37±1.7425.38±8.47脾2.54±0.172.32±0.242.22±0.32肺13.99±5.1219.89±10.7716.10±1.63腦3.29±0.533.01±0.33?3.13±0.39腎3.20±0.383.10±0.133.11±0.31

注：n=3，*P<0.05，與紗布對照組比較。

3.4 臨床檢測測定

3.4.1血液學(xué)指標(biāo)檢查結(jié)果 血液學(xué)指標(biāo)屬于正常范圍。紗布對照組、供試品組和上市對照組的小型豬肺部手術(shù)前后血液學(xué)指標(biāo)自身對照及變化率比較，組間有差異，見表3、表4，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著差異(P>0.05)。

3.4.2血凝指標(biāo)檢測結(jié)果 血凝指標(biāo)屬于正常范圍。巴馬小豬肺部手術(shù)前后紗布對照組凝血酶原時(shí)間分別為(11.3±0.17) s，(11.93±0.12) s，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示有顯著差異(P<0.05)；各組凝血酶原時(shí)間均增加，但紗布對照組增加更明顯，見表5；各組血凝指標(biāo)變化率組間比較有差異，但無顯著差異(P>0.05)，見表6。

表3 巴馬小型豬肺部創(chuàng)傷d0與d7血液學(xué)指標(biāo)檢查結(jié)果Table 3 The results of hematology indexes inpulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，P>0.05，d0與d7自身對照比較.

表4 巴馬小型豬肺部創(chuàng)傷d0與d7血液學(xué)指標(biāo)變化率Table 4 Thechange rate of hematology indexes in pulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，P>0.05，與紗布對照組比較。

3.4.3血生化指標(biāo)檢查結(jié)果 巴馬小型豬血生化指標(biāo)屬于正常范圍，d0與d7自身對照及三組血生化指標(biāo)變化率比較均無顯著差異。

表5 巴馬小型豬肺部創(chuàng)傷d0與d7血凝指標(biāo)檢查結(jié)果Table 5 The results of coagulation index inpulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，*P<0.05，d0與d7比較.

表6 巴馬小型豬肺部創(chuàng)傷d0與d7血凝指標(biāo)變化率比較Table 6 The change rate ofcoagulation index in pulmonary wound of Bama mini pig on d 0 and d

注：n=3，P>0.05，與紗布對照組比較。

4 討論

臨床上理想的止血材料應(yīng)具備安全、無毒、有效的同時(shí)還應(yīng)不影響組織的愈合，減少或不產(chǎn)生組織黏連，不增加感染率等特征[9-10]。目前止血材料止血試驗(yàn)的文獻(xiàn)很多，但大部分的止血研究以小動物或兔的腹腔臟器和體表出血模型為主，且對止血材料進(jìn)行安全性評價(jià)的很少[11]。本研究旨在對可吸收多糖止血材料在大動物豬胸腔肺出血模型進(jìn)行止血效果研究，并對其安全性進(jìn)行評價(jià)。通過止血模型止血效果對比，可吸收多糖止血材料止血效果明顯，在止血時(shí)間、出血量和術(shù)中出血觀察效果略優(yōu)于上市對照組。結(jié)合臨檢指標(biāo)、術(shù)后大體觀察及剖檢進(jìn)行生物安全性評價(jià)，結(jié)果顯示，可吸收多糖止血材料不影響組織愈合，不增加感染幾率，僅切口附近有少部分肺組織產(chǎn)生黏連，肺組織未見明顯血栓形成病變。

綜上所述，可吸收多糖止血材料對豬胸腔肺出血模型具有較好的止血作用，同時(shí)不影響組織愈合，無感染，傷口無血栓形成，不引起組織廣泛黏連，可作為臨床胸外科手術(shù)中一種理想的止血材料。