輔酶Q10對(duì)D-半乳糖致雄性小鼠骨微結(jié)構(gòu)和肌原纖維的影響

王可欣，陳彩玲，鄭曉艷，劉翠娟，崔 燎,2，許碧蓮,2，吳 鐵,2,3

(1.廣東醫(yī)科大學(xué)藥理教研室；2.廣東天然藥物研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 湛江 524023；3.廣東醫(yī)科大學(xué)·廣東潤(rùn)和生物科技有限公司輔酶Q10聯(lián)合研究中心，廣東 東莞 523808)

隨著社會(huì)人口老齡化的到來(lái)，與增齡相關(guān)的肌肉骨骼系統(tǒng)疾病日益受到關(guān)注。骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis，OP)是指骨質(zhì)減少和骨組織微結(jié)構(gòu)惡化導(dǎo)致骨脆性增加和易感性骨折的疾病[1]。而肌少癥(sarcopenia，SP)則被認(rèn)為能影響機(jī)體平衡增加跌倒風(fēng)險(xiǎn)，從而使老年人功能受限[2]。兩種疾病相互影響，緊密關(guān)聯(lián)，如何解決老年性肌少癥伴隨而來(lái)的骨質(zhì)疏松骨折風(fēng)險(xiǎn)，是一個(gè)不容忽視的問(wèn)題。輔酶Q10是生物體內(nèi)廣泛存在的一類(lèi)脂溶性醌類(lèi)物質(zhì)，具有較強(qiáng)抗氧化和清除氧自由基的的能力，還能改善線粒體的功能障礙[3]。隨著年齡增長(zhǎng)，輔酶Q10合成能力下降，老年人體內(nèi)輔酶Q10含量降低，因此通過(guò)外源性補(bǔ)充十分必要[4]。一方面[5]，輔酶Q10能促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化，并抑制破骨細(xì)胞的分化，從而使骨量增加。另一方面[6]，輔酶Q10對(duì)缺血/再灌注造成的骨骼肌損傷具有保護(hù)作用，該損傷是由于氧自由基的產(chǎn)生和促炎細(xì)胞因子的合成與釋放造成。因此，本研究建立D-半乳糖小鼠的亞急性衰老模型，觀察輔酶Q10是否能夠同時(shí)作用于肌肉骨骼系統(tǒng)，為臨床上治療“骨質(zhì)疏松癥-肌少癥”的難題提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物40只SPF級(jí)8周齡雄性KM小鼠，體質(zhì)量(30±5) g，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SYXK(粵)2013-0002。

1.2 藥物與試劑骨化三醇，購(gòu)于Hoffmann-La Roche AG，批號(hào)：B4208。D-半乳糖，購(gòu)于索萊寶，批號(hào)：129G051。生理鹽水，購(gòu)于石家莊四藥有限公司，批號(hào)1703032103。

1.3 儀器PTY-224-423電子天平(福州華志科學(xué)儀器有限公司)；數(shù)控超聲波清洗器KQ5200DB(昆山超聲儀器有限公司)；858 Mini Bionix型材料測(cè)試系統(tǒng)(美國(guó)MST公司)；Viva Micro CT 40(SCANCO Medical AG)；ZTS-20N拉力檢測(cè)儀(日本IMADA)；JEM 1400(日本JEOL)

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥根據(jù)體質(zhì)量按隨機(jī)區(qū)組法，將小鼠平均分配到4組，每組10只，具體分組及給藥為：(1)正常對(duì)照組(Control)：皮下注射及灌胃給予生理鹽水；(2)D-半乳糖模型組(Model)：皮下注射500 mg·kg-1·d-1D-半乳糖(生理鹽水溶解D-半乳糖，濃度為0.28 mol·L-1)，并灌胃給予生理鹽水；(3)骨化三醇組(Calcitriol)：造模方法同模型組，然后按0.076 μg·kg-1·d-1灌胃骨化三醇混懸液(取一粒含0.25 μg骨化三醇的膠囊，加入33.3 mL生理鹽水，室溫超聲60 min，超聲功率為70%)。(4)輔酶Q10組(CoQ10)：造模方法同模型組，然后按250 mg·kg-1·d-1灌胃輔酶Q10紫蘇籽油溶液(將1 250 mg輔酶Q10加入到50 ml紫蘇籽油中，攪拌溶解即得)。所有小鼠連續(xù)給藥12周。每周稱(chēng)體質(zhì)量1次，從第8周開(kāi)始，每7 d測(cè)一次雙前肢肌力。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取左側(cè)股骨進(jìn)行micro-CT及骨生物力學(xué)檢測(cè)，取腓腸肌做超微透射電子顯微鏡檢查。

1.5 觀察指標(biāo)及測(cè)定方法

1.5.1體質(zhì)量的檢測(cè) 每周稱(chēng)體質(zhì)量1次，實(shí)驗(yàn)結(jié)束取材前稱(chēng)體質(zhì)量，作為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的體質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前和實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的體質(zhì)量的差值，即為體質(zhì)量?jī)粼鲩L(zhǎng)值(△W)。

1.5.2股骨質(zhì)量和質(zhì)量指數(shù)的檢測(cè) 取股骨，除凈表面附著組織，用濾紙吸干表面體液，電子天平稱(chēng)重，即得股骨質(zhì)量。股骨質(zhì)量/實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)體質(zhì)量，即為股骨質(zhì)量指數(shù)。

1.5.3雙前肢肌力的檢測(cè) 將小鼠雙前肢放在拉力計(jì)的感應(yīng)網(wǎng)處，待小鼠適應(yīng)1 min后輕輕提起尾部使之與身體平行， 向小鼠前傾的相反方向緩慢用力拖拽，0.5～1 min讀數(shù)，每只小鼠測(cè)定3次，取拉力讀數(shù)最大的數(shù)值。

1.5.4骨生物力學(xué)的檢測(cè) 用858 Mini Bionix型材料測(cè)試系統(tǒng)進(jìn)行三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)，分析股骨生物力學(xué)性能。把股骨放在MTS實(shí)驗(yàn)機(jī)上，加載速度為0.155 mm·s-1，跨距5 mm。繪制載荷-形變曲線，從曲線上讀取數(shù)據(jù)，根據(jù)相應(yīng)的公式計(jì)算參數(shù)指標(biāo)：最大載荷(maximum load)、 斷裂載荷(break load)、彈性載荷(elastic load)、剛性系數(shù)(stiffness) 。

1.5.5micro-CT的檢測(cè) 將股骨沿著長(zhǎng)軸放在固定器內(nèi)，用viva CT40對(duì)股骨干骺端進(jìn)行掃描。viva CT40選擇掃描參數(shù)：能量/強(qiáng)度為70 kVP，114 μA，8 W，掃描時(shí)間為29.7 min，片數(shù)Slice為505。掃描完成后，選取距生長(zhǎng)板遠(yuǎn)端1.0 mm、層厚2.0 mm的骨組織為松質(zhì)骨感興趣區(qū)域(region of interest，ROI)行三維重建，以最低閾值為148提取圖像信息。使用其軟件(SCANCO Medical AG)進(jìn)行重建定量分析。參數(shù)如下：連接密度(connectivity density，Conn.D.)、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)(structure model index，SMI)、骨密度(bone mineral density，BMD)、骨體積分?jǐn)?shù)(bone volume/tissue volume，BV/TV)、骨小梁數(shù)量(trabecular number，Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness，Tb.Th)、骨小梁分離度(trabecular separation，Tb.Sp)。

1.5.6腓腸肌透射電子顯微鏡的檢測(cè) 將新鮮組織沿縱軸用鋒利手術(shù)刀片切成寬為1 mm，長(zhǎng)為2～3 mm的組織塊，投入質(zhì)量濃度為30 g·L-1的戊二醛溶液中，4 ℃固定24 h。依次經(jīng)磷酸緩沖溶液漂洗、質(zhì)量濃度為10 g·L-1的鋨酸溶液固定、逐級(jí)乙醇和丙酮脫水、包埋劑浸透與聚合，1～2 μm半薄切片定位后，切60 nm超薄切片，染色后干燥并在透射電子顯微鏡下觀察。

使用Gantan832軟件，隨機(jī)視野拍10張，放大倍數(shù)分別為15 000倍和40 000倍。畫(huà)出并統(tǒng)計(jì)肌原纖維中的肌小節(jié)(sarcomere，S)、明帶(I-band, I)、暗帶(A-band，A)、H帶(H-zone, H)、M線(M-line, M)、Z線(Z-line, Z)和重疊肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白肌絲(overlapped actin and myosin myofilaments，O)長(zhǎng)度。

Tab 1 Body weight changes of mice n=10)

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠體質(zhì)量變化和體質(zhì)量?jī)粼鲩L(zhǎng)比較由Tab 1可見(jiàn)，各組間小鼠體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。由Tab 2可見(jiàn)，與正常對(duì)照組相比，模型組體質(zhì)量?jī)粼鲩L(zhǎng)明顯減少(P<0.01)。與模型組相比，骨化三醇組和輔酶Q10組體質(zhì)量增長(zhǎng)均明顯增加(P<0.05)。

Tab 2 Changes of net weight gain n=10)

**P<0.01vscontrol;#P<0.05vsmodel

2.2 各組小鼠股骨質(zhì)量及質(zhì)量指數(shù)變化由Tab 3可見(jiàn)，與正常對(duì)照組相比，模型組股骨質(zhì)量明顯減少(P<0.05)，股骨質(zhì)量指數(shù)有下降的趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組相比，骨化三醇組和輔酶Q10組股骨質(zhì)量及質(zhì)量指數(shù)均明顯增加(P<0.05)。

2.3 各組小鼠前肢肌力的變化由Tab 4可見(jiàn)，第8周開(kāi)始，與正常對(duì)照組相比，模型組雙前肢肌力有下降趨勢(shì)。與模型組相比，用藥組雙前肢肌力無(wú)明顯改變。

Tab 3 Changes of femur mass and femur mass index n=10)

*P<0.05vscontrol;#P<0.05vsmodel

2.4 各組小鼠股骨生物力學(xué)參數(shù)的變化由Tab 5可見(jiàn)，與正常對(duì)照組相比，模型組股骨最大載荷、剛性系數(shù)分別下降19.8%、23.7%(P<0.01)。與模型組相比，骨化三醇組最大載荷、剛性系數(shù)分別增加26.9%(P<0.05)、13.2%(P<0.01)；輔酶Q10組最大載荷增加26.5%(P<0.01)。

2.5 各組小鼠股骨遠(yuǎn)端松質(zhì)骨micro-CT定量參數(shù)的變化由Tab 6可見(jiàn)，與正常對(duì)照組相比，模型組micro-CT參數(shù)Conn.D、BMD降低(P<0.05)，而Tb.Sp增加(P<0.05)。與模型組相比，骨化三醇組BMD、Tb.Th增加(P<0.05)，而Tb.Sp降低(P<0.05)；輔酶Q10組Conn.D.、BMD、Tb.Th均增加(P<0.05)，而SMI、Tb.Sp明顯下降(P<0.01)。

2.6 各組小鼠股骨遠(yuǎn)端松質(zhì)骨micro-CT二維圖和三維圖的變化由Fig 1 可見(jiàn)，正常對(duì)照組股骨骨小梁數(shù)量豐富而致密。與正常對(duì)照組相比，模型組骨小梁數(shù)量較少，排列稀疏。與模型組相比，骨化三醇組和輔酶Q10組骨小梁數(shù)量豐富而密集，連續(xù)性好。

Fig 1 2D reconstruction of micro-CT of mouse femur from control mice(A), model mice(B), calcitriol mice(C) and CoQ10mice(D)

由Fig 2 可見(jiàn)，正常對(duì)照組股骨骨小梁較粗，空隙較小，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯。與正常對(duì)照組相比，模型組骨小梁缺失明顯，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)退化。與模型組相比，骨化三醇組和輔酶Q10組骨小梁較粗，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯。

Tab 4 Changes of grip strength of forelimb n=10)

Fig 2 ROI region 3D reconstruction of micro-CT of mouse femur from control group(A), model group(B), calcitriol group(C) and CoQ10 group(D)

Tab 5 Changes of biomechanical properties in femur

*P<0.05 ,**P<0.05vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel

Tab 6 Changes of micro-CT scanning

*P<0.05vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsmodel

2.7 各組小鼠腓腸肌透射電子顯微鏡的變化由Fig 3A和Fig 4A可見(jiàn)，正常組腓腸肌肌纖維排列有序，肌絲排列整齊，肌纖維間可見(jiàn)卵圓形線粒體，線粒體嵴較為清晰。由Fig 3B和Fig 4B可見(jiàn)，模型組腓腸肌肌纖維和肌絲排列不夠緊密，肌絲或肌原纖維間存在縫隙和空洞，A帶出現(xiàn)斷裂，肌原纖維間出現(xiàn)數(shù)量豐富且異常增大的線粒體，其形狀不規(guī)則，有的長(zhǎng)度可超過(guò)一個(gè)肌小節(jié)。Fig 3C和Fig 4C可見(jiàn)，骨化三醇組的肌絲排列整齊，可見(jiàn)豐富的肌質(zhì)網(wǎng)和橫管系統(tǒng)，肌原纖維間存在少量卵圓形線粒體。Fig 3D和Fig 4D可見(jiàn)，輔酶Q10組的肌原纖維束排列有序而緊湊，可見(jiàn)卵圓形線粒體，線粒體嵴較為清晰。

2.8 各組小鼠腓腸肌肌原纖維各功能結(jié)構(gòu)的長(zhǎng)度測(cè)量由Tab 7可見(jiàn)，與正常對(duì)照組相比，模型組腓腸肌纖維的肌小節(jié)、I帶、H帶、M線和Z線長(zhǎng)度明顯增加(P<0.01)，重疊肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白肌絲長(zhǎng)度明顯縮短(P<0.01)。與模型組相比，骨化三醇組和輔酶Q10組腓腸肌肌纖維的I帶、H帶、M線和Z線均明顯縮短(P<0.01)，而重疊肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白肌絲長(zhǎng)明顯增長(zhǎng)(P<0.01)。

Tab 7 Changes of structural parameters of myofibril in gastrocnemius n=3)

**P<0.01vscontrol;##P<0.01vsmodel

Fig 3 Electron micrographs of longitudinal sections of gastrocnemius myofibers from control group(A), model group(B), calcitriol group(C) and CoQ10 group(D)(15 000×)

S, sarcomeres; A, A-band; I, I-band; white arrowheads, intermyofibrillar mitochondria

Fig 4 Electron micrographs of longitudinal sections of gastrocnemius myofibers from control group(A), model group(B),calcitriol group(C) and CoQ10 group(D)(40 000×)

H, H-zone; M, M-line; white arrowheads, intermyofibrillar mitochondria; black arrowheads, cavity

3 討論

與正常對(duì)照組相比，D-半乳糖模型組小鼠體質(zhì)量?jī)粼鲩L(zhǎng)值明顯下降，說(shuō)明D-半乳糖能導(dǎo)致小鼠體質(zhì)量減輕。micro-CT定量參數(shù)的結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，D-半乳糖組的Conn.D.和BMD降低，而Tb.Sp增加。micro-CT的三維重建圖中可見(jiàn)，模型組骨小梁排列稀疏，存在較大空洞，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯退化。結(jié)果表明，連續(xù)12周皮下注射500 mg·kg-1·d-1D-半乳糖，能致雄性小鼠骨量減少及骨微結(jié)構(gòu)損傷。本次研究結(jié)果與課題組前期研究[7]相一致。D-半乳糖代謝過(guò)程中產(chǎn)生的自由基能破壞膠原蛋白，引起骨礦物質(zhì)流失，加速雄鼠衰老，導(dǎo)致骨量丟失[8]，同時(shí)D-半乳糖轉(zhuǎn)化為晚期糖基化終產(chǎn)物(AGEs)在組織中累積，增加成骨細(xì)胞中蛋白水解酶的活性，從而誘導(dǎo)成骨細(xì)胞凋亡。

通過(guò)超微透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，模型組肌小節(jié)、I帶、H帶、M線和Z線長(zhǎng)度顯著性增長(zhǎng)，重疊肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白的肌絲長(zhǎng)度明顯減少，且肌原纖維間存在大量形狀不一的龐大線粒體。該發(fā)現(xiàn)與Sayed等[9]報(bào)道類(lèi)似，老年鼠的肌原纖維中肌小節(jié)，I帶和H帶長(zhǎng)度隨著年齡增長(zhǎng)而增加，而A帶沒(méi)有變化，并且肌原纖維間線粒體數(shù)量和橫截面積明顯增加。

肌原纖維是骨骼肌細(xì)胞的收縮單位，肌原纖維的成分直接影響著肌肉的生物學(xué)性能。當(dāng)肌纖維被拉伸時(shí)，肌纖維伴隨著I帶延長(zhǎng)而變長(zhǎng)，而當(dāng)肌纖維收到刺激而收縮并重疊時(shí)，肌纖維和I帶會(huì)變短。通過(guò)拉伸和收縮，A帶保持恒定長(zhǎng)度，根據(jù)延長(zhǎng)或縮短肌小節(jié)和I帶，H帶長(zhǎng)度也發(fā)生改變[10]。本研究發(fā)現(xiàn)D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老小鼠腓腸肌收縮性能下降，與老年小鼠的骨骼肌老化相似。這是由于D-半乳糖可以誘導(dǎo)線粒體DNA的缺失增加，導(dǎo)致三磷酸腺苷(ATP)水平下降，電子傳遞鏈復(fù)合物水平下降，最終誘導(dǎo)線粒體功能障礙[11]。模型組出現(xiàn)的大量龐大的線粒體，可能由于線粒體損傷，骨骼肌需要更多的能量，從而引發(fā)線粒體代償性增加，以此供應(yīng)氧化磷酸化障礙所致的能量缺乏[12]。

本研究還發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，輔酶Q10組小鼠體質(zhì)量?jī)粼鲩L(zhǎng)值明顯增加，說(shuō)明外源性補(bǔ)充輔酶Q10能保護(hù)D-半乳糖導(dǎo)致的小鼠體質(zhì)量減輕。與模型組相比，輔酶Q10組小鼠股骨質(zhì)量和股骨質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯增加。此外，與模型組相比，輔酶Q10能明顯增加股骨最大載荷、BMD和Tb.Th，并降低Tb.Sp。股骨micro-CT三維重建圖可見(jiàn)，輔酶Q10組骨小梁較粗而厚且數(shù)量豐富。結(jié)果提示，輔酶Q10能增加股骨質(zhì)量，改善D-半乳糖所致的骨微結(jié)構(gòu)損傷，從而使骨骼的質(zhì)量和功能上得到保護(hù)。

超微透射電子顯微鏡檢查的結(jié)果顯示，與模型組相比，輔酶Q10組的腓腸肌肌原纖維排列更為整齊，肌絲排列緊湊，線粒體形狀規(guī)則且清晰。輔酶Q10組I帶、H帶、M線和Z線長(zhǎng)度明顯縮短，而重疊肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白肌絲長(zhǎng)度明顯增加，同時(shí)，輔酶Q10組并無(wú)觀察到龐大線粒體。研究結(jié)果提示，輔酶Q10能夠改善D-半乳糖造成的小鼠肌纖維收縮性能下降，維持肌原纖維結(jié)構(gòu)的完整。進(jìn)一步說(shuō)明輔酶Q10對(duì)肌肉有保護(hù)作用。

輔酶Q10是人體重要的抗氧化劑和非特異性免疫增強(qiáng)劑，其生理功能廣泛，除具有較強(qiáng)清除自由基和抗氧化功能、增強(qiáng)心臟動(dòng)力和調(diào)節(jié)血脂等功能[3]，還在抗骨質(zhì)疏松作用方面有良好效果。研究表明[13]，輔酶Q10既是成骨細(xì)胞生成核因子κB 受體活化因子配體(RANKL)誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化的抑制劑，也是成骨細(xì)胞分化的促進(jìn)劑，其能明顯抑制破骨細(xì)胞NFATc 1、TRAP和破骨細(xì)胞相關(guān)免疫球蛋白樣受體的基因表達(dá)，并通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子活性促進(jìn)骨分化過(guò)程中的再生。

輔酶Q10能改善D-半乳糖致雄性小鼠腓腸肌肌原纖維超微結(jié)構(gòu)，主要原因可能是一方面外源性補(bǔ)充輔酶Q10能加速清除D-半乳糖代謝產(chǎn)生的自由基堆積，降低氧化應(yīng)激的水平，抑制線粒體的過(guò)氧化保護(hù)生物膜結(jié)構(gòu)的完整性[14]，使線粒體中氧化磷酸化活動(dòng)得以維持，因而機(jī)體的能量負(fù)荷減輕。另一方面，輔酶Q10彌補(bǔ)了D-半乳糖致衰老小鼠體內(nèi)輔酶Q10的缺失，輔助線粒體中ATP的磷酸還原作用，讓細(xì)胞能量供應(yīng)系統(tǒng)快速活化，從而增強(qiáng)老年機(jī)體的體能和精力[4]。此外，輔酶Q10還能通過(guò)復(fù)雜的分子機(jī)制作用于骨骼肌細(xì)胞。Boroujeni等[6]發(fā)現(xiàn)，輔酶Q10能通過(guò)抑制核因子κB(NF-κB)的活化作用，減少骨骼肌缺血再灌注模型大鼠腓腸肌中腫瘤壞死因子(TNF-α)和 NF-κB的表達(dá)，從而減輕肌纖維變性和肥大細(xì)胞浸潤(rùn)。

本研究中還同時(shí)觀察了骨化三醇對(duì)D-半乳糖致雄性小鼠骨骼和肌肉的影響，發(fā)現(xiàn)骨化三醇對(duì)改善骨微結(jié)構(gòu)破壞和肌肉肌原纖維的損壞也有益處。已有證據(jù)表明[15]，維生素D能增加肌肉內(nèi)蛋白質(zhì)合成及肌質(zhì)網(wǎng)內(nèi)鈣的吸收，并且可以調(diào)節(jié)骨鈣蛋白和相關(guān)炎癥因子從而影響肌肉系統(tǒng)的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。

本研究發(fā)現(xiàn)，連續(xù)12周皮下注射500 mg·kg-1·d-1D-半乳糖可致小鼠發(fā)生骨微結(jié)構(gòu)破壞，并引起肌原纖維結(jié)構(gòu)損傷。本研究創(chuàng)新之處在于首次觀察輔酶Q10對(duì)這種D-半乳糖致亞急性衰老小鼠骨骼和肌原纖維損傷有明顯的保護(hù)作用，提示了輔酶Q10能夠同時(shí)作用于肌肉系統(tǒng)和骨骼系統(tǒng)，為臨床上預(yù)防和治療男性骨質(zhì)疏松合并肌肉減少的患者提供了實(shí)驗(yàn)研究數(shù)據(jù)，為臨床解決“骨質(zhì)疏松癥-肌少癥”的治療難題提供參考依據(jù)。但輔酶Q10究竟如何作用于D-半乳糖誘導(dǎo)的亞急性衰老小鼠的骨骼肌細(xì)胞仍需進(jìn)一步地探討。

(致謝：本實(shí)驗(yàn)在廣東醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成，感謝各位老師和同學(xué)的幫助)