范艷，程媛媛，韓超，王莉，王菲迪，吳聲敢

(浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥殘留檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所，浙江 杭州 310021)

甲磺草胺(Sulfentrazone)，又名甲基磺酰甲胺，是一種三唑啉酮類除草劑，原卟啉原氧化酶抑制劑。通過抑制葉綠素生物合成過程中原卟啉原氧化酶而破壞細(xì)胞膜，使葉片迅速干枯、死亡。適用于大豆、玉米、花生、向日葵等作物田內(nèi)一年生闊葉雜草、禾本科雜草和莎草，如牽牛、反枝莧、鐵莧菜、曼陀羅、狗尾草、蒼耳、牛筋草、香附子等。甲磺草胺是一種使用范圍較廣，低毒且難降解的除草劑，對(duì)目前較難除的牽?；?、香附子、蒼耳有較好的效果[1-2]，是玉米、大豆和花生等作物的新型高效低毒播后苗前除草劑。這也使得甲磺草胺在農(nóng)作物中有一定量的農(nóng)藥殘留。

飼料是用于農(nóng)業(yè)或牧業(yè)飼養(yǎng)的動(dòng)物食物，包括大豆、豆粕、玉米、魚粉、氨基酸、雜粕、乳清粉、油脂、肉骨粉、谷物、飼料添加劑等十余個(gè)品種的飼料原料，對(duì)飼料中甲磺草胺殘留量的研究至關(guān)重要。美國(guó)和日本已經(jīng)制定了甲磺草胺在部分商品(包括水果、蔬菜、飼料等)中的殘留限量(0.05～1.5 mg·kg-1不等)[3]，我國(guó)目前還沒有對(duì)甲磺草胺做限量規(guī)定，也沒有相關(guān)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。目前，對(duì)甲磺草胺的檢測(cè)方法包括氣質(zhì)聯(lián)用[4-6]，液相色譜法[7-10]和液質(zhì)聯(lián)用[11]。甲磺草胺的不合理使用，不僅會(huì)對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生影響，還會(huì)對(duì)人體健康產(chǎn)生重大威脅。因此，有必要建立一種簡(jiǎn)便、快速的方法檢測(cè)飼料中的殘留。本文采用了有機(jī)溶劑提取、QuEchERS凈化，結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，建立了飼料中甲磺草胺的農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料

試劑：色譜純甲酸(Anaqua Chemicals Supply公司)，色譜純乙腈(Merck公司)，飲用純凈水(廣州屈臣氏食品飲料有限公司)，分析純氯化鈉(蘭溪市屹達(dá)化工試劑有限公司)。

儀器和設(shè)備：ABSciex液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(Exion LCAD-Triple QuadTM5500，美國(guó)ABSciex公司)，ACQUITY UPLCTMBEH C18色譜柱(2.1 mm×100 mm×1.7 μm，美國(guó)Waters公司)，BSA224S 電子天平(感量0.000 1 g，德國(guó)賽多利斯集團(tuán))，OHAUS SPS202F型電子天平(感量0.01 g，奧克斯儀器常州有限公司)，TYZD-IIA振蕩器(姜堰市天儀電子儀器有限公司)，Eppendorf Centrifuge 5430R高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)艾本德股份公司)，MX-S可調(diào)式混勻儀(北京大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)，Cleanert MAS-QuEchERS凈化管，移液槍，不銹鋼單頭長(zhǎng)柄藥勺(長(zhǎng)約20 cm)，50 mL PPTE離心管，刻度管，容量瓶等。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

電子天平稱取甲磺草胺標(biāo)準(zhǔn)品0.016 4 g(純度為98.5%)，用色譜純乙腈定容至10.00 mL，得到濃度為1.62×103mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。用乙腈稀釋甲磺草胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，得到濃度為10.0 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液。用乙腈逐級(jí)稀釋10.0 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液，得到濃度為0.500、0.100、0.050、0.010、0.005、0.002 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.3 質(zhì)譜條件

毛細(xì)管電壓-4.5 kV，氣簾氣35 psi，噴撞氣7 psi，噴霧氣50 psi，輔助加熱氣50 psi，離子源溫度550 ℃，射入電壓-10 V，碰撞室射出電壓-16 V。定性、定量模式均為MRM多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，電離方式為ESI-。甲磺草胺的其余質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)見表1。

表1 甲磺草胺質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)

1.4 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLCTMBEH C18柱(2.1 mm×100 mm×1.7 μm，美國(guó)Waters公司)；色譜柱溫度：40 ℃；進(jìn)樣量：5.00 μL；流速：0.25 mL·min-1；流動(dòng)相A：0.1%甲酸水溶液；流動(dòng)相B：色譜純乙腈；梯度洗脫程序：0～0.5 min，60% A，0.5～4.0 min，60%A～10%A，4.0～4.5 min，10% A，4.5～4.6 min，10%～60%A，4.6～6.5 min，60% A。

1.5 試驗(yàn)基質(zhì)

鵪鶉飼料701主要成分為大豆粉、玉米粉、魚粉等。

1.6 樣品前處理

稱取飼料2.00 g (添加標(biāo)樣靜置30 min后進(jìn)行前處理)，置于50 mL PPTE離心管中，加入飲用純凈水5 mL，渦旋30 s后，加入20 mL乙腈，振蕩30 min，加入3 g氯化鈉，渦旋30 s，1 574g離心10 min，取上清液置于Cleanert MAS-QuEChERS凈化管中，渦旋30 s，靜置5 min后取上清液過0.22 μm濾膜或用乙腈稀釋后過0.22 μm濾膜，待檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的優(yōu)化

選擇了4種有機(jī)溶劑作為提取溶劑，分別為乙腈、乙酸乙酯、甲醇、正己烷。添加濃度為10 mg·L-1，3個(gè)重復(fù)。試驗(yàn)結(jié)果表明，乙腈提取的回收率為95.0%，乙酸乙酯提取的回收率為87.0%，甲醇提取的回收率為80.4%，正己烷提取的回收率為0。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，選擇乙腈作為最終提取溶劑。

2.2 凈化條件的選擇

比較了3種Cleanert MAS-QuEChERS凈化管，分別為PSA 50 mg+MgSO415 mg+C18 50 mg、PSA 50 mg+PC 10 mg+MgSO4150 mg+C18 50 mg、PSA 50 mg+PC 50 mg+MgSO4150 mg+C18 50 mg。添加濃度為10 mg·L-1，5個(gè)重復(fù)。3種凈化管的回收率分別為96.0%、95.5%、95.1%，表明這3種凈化管都可以滿足回收率的要求。因?yàn)橛糜袡C(jī)溶劑提取后的溶液含色素，所以，本試驗(yàn)選用含50 mg PC的Cleanert MAS-QuEChERS凈化管。

2.3 線性關(guān)系、回收率和精密度

將濃度為0.002、0.005、0.010、0.050、0.100、0.500 mg·L-1的甲磺草胺標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)樣分析，以濃度-峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果如圖1所示，得到回歸方程為y=4 226 608x+10 267(R2=0.999 8)。

圖1 甲磺草胺標(biāo)準(zhǔn)曲線

在飼料中添加3檔濃度(0.10、10.00、162.00 mg·kg-1)的甲磺草胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，每檔濃度設(shè)5個(gè)平行樣品?；厥章屎拖鄬?duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見表2，儀器對(duì)甲磺草胺的最小檢出量(LOD)為4.00×10-3ng，甲磺草胺在飼料中的最低檢測(cè)濃度(LOQ)為0.1 mg·kg-1。

表2 不同添加水平下飼料中甲磺草胺的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

3 小結(jié)

本文采用QuEchERS結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立了飼料中甲磺草胺的檢測(cè)方法。飼料用乙腈提取，用Cleanert MAS-QuEChERS凈化，采用0.1%甲酸和乙腈作為流動(dòng)相梯度洗脫，然后進(jìn)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)。在0.10、10.00和162.00 mg·kg-1添加水平下，甲磺草胺的回收率為91.5%～103.0%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=5)為1.39%～5.41%，儀器對(duì)甲磺草胺的最小檢出量為4.00×10-3ng，甲磺草胺在飼料中的最低檢測(cè)濃度為0.1 mg·kg-1。本研究為飼料中甲磺草胺的檢測(cè)提供了一個(gè)簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的方法。