蔡銀鳳 何思杰
【摘 要】目的:探討使用SPR技術(shù)快速檢測登革熱患者血清ADE效應(yīng)的價值。方法:納入2018年1月~2019年6月我院收治的疑是登革熱患者200例,制備蛋白質(zhì)芯片,檢測血清樣本,觀察檢測結(jié)果。結(jié)果:通過表面引發(fā)聚合反應(yīng),制備獲得寡聚乙二醇高分子膜。通過microarray針點技術(shù),獲得蛋白質(zhì)陣列芯片。通過SPR技術(shù),檢測蛋白質(zhì)芯片性能。當(dāng)濃度為6.7nmol/L的時候,IgG仍有明顯的信號變化。通過檢測后得出,樣品0.5μL依然存在信號,經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線對照后,對應(yīng)的檢測濃度為3.3nmol/L,IgM和NS1的檢測濃度為3.3nmol/L和6.7nmol/L。通過SPR技術(shù)、酶聯(lián)免疫法以及PCR檢測,所有200份樣本血清,陽性率分別為7.00%(14/200)、5.50%(11/200)、2.50%(5/200)。因此,SPR法的檢測陽性率最高,不同方法對比,P<0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:使用SPR技術(shù)快速檢測登革熱患者血清ADE效應(yīng)的價值較高,值得臨床推廣。
【關(guān)鍵詞】SPR技術(shù);檢測;登革熱;血清ADE效應(yīng)
【中圖分類號】R455【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1005-0019(2019)22--01
登革熱是由黃病毒屬的登革熱病毒經(jīng)傳播后引起的,是一種急性蚊傳疾病,該病癥也是熱帶、亞熱帶地區(qū)的一個嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。登革熱的主要血清學(xué)標(biāo)記物包括NS1、登革熱IgG、IgM等,臨床可通過膠體金法、酶聯(lián)免疫法、免疫熒光法等進(jìn)行檢測,當(dāng)然,各種方法都有其一定的局限性[1]。表面等離子共振儀(SPR)是一種新型的光學(xué)生物傳感器,是比較理想的檢測工具之一。本文研究了使用SPR技術(shù)快速檢測登革熱患者血清ADE效應(yīng)的價值。匯報如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料 納入2018年1月~2019年6月我院收治的疑是登革熱患者200例,患者均在發(fā)熱次日或第3日就診,其中,血清樣本中,核酸檢測陽性4例,IgG、IgM陽性10例。其中,男性130例,女性79例,年齡范圍為7~58歲,平均年齡為(34.79±4.87)歲。采集所有樣本血清2ml,進(jìn)行檢測。
1.2 主要儀器和試劑 SPR芯片;登革熱重組抗原;NS1抗原;登革IgG陽性標(biāo)本;登革IgM陽性標(biāo)本。
1.3 方法 制備蛋白質(zhì)芯片:在芯片表面組裝引發(fā)劑單層,然后制備高分子膜,配置反應(yīng)溶液。將芯片浸泡在10ml的EDC/NHS混合水溶液中活化30min。進(jìn)行各抗體的點樣。血清樣本的檢測:以PBS緩沖溶液為流動相,平穩(wěn)基線后,加入血清樣品、標(biāo)準(zhǔn)品,通過甘氨酸溶液再生芯片。對比基線差值,獲得定量分析依據(jù)。
1.4 觀察指標(biāo) 觀察檢測結(jié)果。
1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)中的計量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,計數(shù)數(shù)據(jù)用百分率(%)表示,使用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,兩個獨立樣本比較采取t檢驗與檢驗,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 蛋白質(zhì)芯片制備效果 通過表面引發(fā)聚合反應(yīng),制備獲得寡聚乙二醇高分子膜。通過microarray針點技術(shù),獲得蛋白質(zhì)陣列芯片。
2.2 蛋白質(zhì)芯片性能檢測 通過SPR技術(shù),檢測蛋白質(zhì)芯片性能。當(dāng)濃度為6.7nmol/L的時候,IgG仍有明顯的信號變化。
2.3 登革熱標(biāo)準(zhǔn)品檢測 通過檢測后得出,樣品0.5μL依然存在信號,經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線對照后,對應(yīng)的檢測濃度為3.3nmol/L,IgM和NS1的檢測濃度為3.3nmol/L和6.7nmol/L。
2.4 臨床樣本的檢測 通過SPR技術(shù)、酶聯(lián)免疫法以及PCR檢測,所有200份樣本血清,在就診第1d的時候陽性率分別為7.00%(14/200)、5.50%(11/200)、2.50%(5/200),在就診第4d、第7d的時候陽性率分別為8.50(17/200)、6.00%(12/200)、3.00(6/200)。因此,SPR法的檢測陽性率最高,不同方法對比,P<0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。具體見表1。
3 討論
登革熱是世界范圍內(nèi)的多發(fā)病,我國南方地區(qū)發(fā)病率較高,而且該病癥存在明顯的季節(jié)性[2-3]。。一旦爆發(fā)登革熱,則將會對整個地區(qū)的社會活動和經(jīng)濟(jì)活動造成嚴(yán)重影響[4]。。因此,準(zhǔn)確的診斷該病癥,對于社會各個方面來說,都具有重要價值。
建立快速的疫情監(jiān)測機制,嚴(yán)防疫情的爆發(fā),十分重要,對于患者病情的及時控制和治療效果的提高,都是十分重要的。本文研究結(jié)果顯示,SPR技術(shù)在快速檢測登革熱患者方面,效果較好。黃熱屬病毒之間存在明顯的交叉反應(yīng),多指標(biāo)聯(lián)合檢測是十分必要的。通過表面化學(xué)的聯(lián)合探討,制備登革熱檢測蛋白質(zhì)芯片,可以在復(fù)雜的血清中檢測到其特異性物質(zhì),對于疾病的診斷和治療,都是十分重要的。
總之,使用SPR技術(shù)快速檢測登革熱患者血清ADE效應(yīng)的價值較高,值得臨床推廣。
參考文獻(xiàn)
祝緋飛, 袁寒艷, 王芝敏, 等.2017年浙江省杭州市拱墅區(qū)登革熱暴發(fā)疫情調(diào)查分析[J].疾病監(jiān)測, 2019, 34(05): 422-426.
范建華, 馮云, 朱進(jìn), 等.2017年云南省西雙版納州登革1型病毒暴發(fā)疫情的調(diào)查研究[J].疾病監(jiān)測, 2019, 34(05): 427-434.
中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會, 中華醫(yī)學(xué)會熱帶病與寄生蟲學(xué)分會, 中華中醫(yī)藥學(xué)會急診分會.中國登革熱臨床診斷和治療指南[J].傳染病信息, 2018, 31(05): 385-392.
牛叢, 王淼, 萬成松, 等.登革病毒非結(jié)構(gòu)蛋白NS1在檢測和免疫預(yù)防中的應(yīng)用[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志, 2018, 18(10): 1394-1397.