使用SPR技術(shù)快速檢測登革熱患者血清ADE效應(yīng)

蔡銀鳳　何思杰

【摘 要】目的：探討使用SPR技術(shù)快速檢測登革熱患者血清ADE效應(yīng)的價值。方法：納入2018年1月～2019年6月我院收治的疑是登革熱患者200例，制備蛋白質(zhì)芯片，檢測血清樣本，觀察檢測結(jié)果。結(jié)果：通過表面引發(fā)聚合反應(yīng)，制備獲得寡聚乙二醇高分子膜。通過microarray針點技術(shù)，獲得蛋白質(zhì)陣列芯片。通過SPR技術(shù)，檢測蛋白質(zhì)芯片性能。當(dāng)濃度為6.7nmol/L的時候，IgG仍有明顯的信號變化。通過檢測后得出，樣品0.5μL依然存在信號，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線對照后，對應(yīng)的檢測濃度為3.3nmol/L，IgM和NS1的檢測濃度為3.3nmol/L和6.7nmol/L。通過SPR技術(shù)、酶聯(lián)免疫法以及PCR檢測，所有200份樣本血清，陽性率分別為7.00%（14/200）、5.50%（11/200）、2.50%（5/200）。因此，SPR法的檢測陽性率最高，不同方法對比，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：使用SPR技術(shù)快速檢測登革熱患者血清ADE效應(yīng)的價值較高，值得臨床推廣。

【關(guān)鍵詞】SPR技術(shù);檢測;登革熱;血清ADE效應(yīng)

【中圖分類號】R455【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1005-0019（2019）22--01

登革熱是由黃病毒屬的登革熱病毒經(jīng)傳播后引起的，是一種急性蚊傳疾病，該病癥也是熱帶、亞熱帶地區(qū)的一個嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。登革熱的主要血清學(xué)標(biāo)記物包括NS1、登革熱IgG、IgM等，臨床可通過膠體金法、酶聯(lián)免疫法、免疫熒光法等進(jìn)行檢測，當(dāng)然，各種方法都有其一定的局限性[1]。表面等離子共振儀（SPR）是一種新型的光學(xué)生物傳感器，是比較理想的檢測工具之一。本文研究了使用SPR技術(shù)快速檢測登革熱患者血清ADE效應(yīng)的價值。匯報如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 納入2018年1月～2019年6月我院收治的疑是登革熱患者200例，患者均在發(fā)熱次日或第3日就診，其中，血清樣本中，核酸檢測陽性4例，IgG、IgM陽性10例。其中，男性130例，女性79例，年齡范圍為7～58歲，平均年齡為（34.79±4.87）歲。采集所有樣本血清2ml，進(jìn)行檢測。

1.2 主要儀器和試劑 SPR芯片;登革熱重組抗原;NS1抗原;登革IgG陽性標(biāo)本;登革IgM陽性標(biāo)本。

1.3 方法 制備蛋白質(zhì)芯片：在芯片表面組裝引發(fā)劑單層，然后制備高分子膜，配置反應(yīng)溶液。將芯片浸泡在10ml的EDC/NHS混合水溶液中活化30min。進(jìn)行各抗體的點樣。血清樣本的檢測：以PBS緩沖溶液為流動相，平穩(wěn)基線后，加入血清樣品、標(biāo)準(zhǔn)品，通過甘氨酸溶液再生芯片。對比基線差值，獲得定量分析依據(jù)。

1.4 觀察指標(biāo) 觀察檢測結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析 數(shù)據(jù)中的計量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，計數(shù)數(shù)據(jù)用百分率（%）表示，使用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，兩個獨立樣本比較采取t檢驗與檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 蛋白質(zhì)芯片制備效果 通過表面引發(fā)聚合反應(yīng)，制備獲得寡聚乙二醇高分子膜。通過microarray針點技術(shù)，獲得蛋白質(zhì)陣列芯片。

2.2 蛋白質(zhì)芯片性能檢測 通過SPR技術(shù)，檢測蛋白質(zhì)芯片性能。當(dāng)濃度為6.7nmol/L的時候，IgG仍有明顯的信號變化。

2.3 登革熱標(biāo)準(zhǔn)品檢測 通過檢測后得出，樣品0.5μL依然存在信號，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線對照后，對應(yīng)的檢測濃度為3.3nmol/L，IgM和NS1的檢測濃度為3.3nmol/L和6.7nmol/L。

2.4 臨床樣本的檢測 通過SPR技術(shù)、酶聯(lián)免疫法以及PCR檢測，所有200份樣本血清，在就診第1d的時候陽性率分別為7.00%（14/200）、5.50%（11/200）、2.50%（5/200），在就診第4d、第7d的時候陽性率分別為8.50（17/200）、6.00%（12/200）、3.00（6/200）。因此，SPR法的檢測陽性率最高，不同方法對比，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。具體見表1。

3 討論

登革熱是世界范圍內(nèi)的多發(fā)病，我國南方地區(qū)發(fā)病率較高，而且該病癥存在明顯的季節(jié)性[2-3]。。一旦爆發(fā)登革熱，則將會對整個地區(qū)的社會活動和經(jīng)濟(jì)活動造成嚴(yán)重影響[4]。。因此，準(zhǔn)確的診斷該病癥，對于社會各個方面來說，都具有重要價值。

建立快速的疫情監(jiān)測機制，嚴(yán)防疫情的爆發(fā)，十分重要，對于患者病情的及時控制和治療效果的提高，都是十分重要的。本文研究結(jié)果顯示，SPR技術(shù)在快速檢測登革熱患者方面，效果較好。黃熱屬病毒之間存在明顯的交叉反應(yīng)，多指標(biāo)聯(lián)合檢測是十分必要的。通過表面化學(xué)的聯(lián)合探討，制備登革熱檢測蛋白質(zhì)芯片，可以在復(fù)雜的血清中檢測到其特異性物質(zhì)，對于疾病的診斷和治療，都是十分重要的。

總之，使用SPR技術(shù)快速檢測登革熱患者血清ADE效應(yīng)的價值較高，值得臨床推廣。

參考文獻(xiàn)

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