趙姍姍,李玉婉,史 柯,寧曉冬,李 丹,崔艷艷,閆亞群,菅復(fù)春,張龍現(xiàn),王榮軍,寧長(zhǎng)申*

(1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 牧醫(yī)工程學(xué)院,河南 鄭州 450002;2.河南省洛陽(yáng)市洛龍區(qū)科學(xué)技術(shù)協(xié)會(huì),河南 洛陽(yáng) 471000;3.河南應(yīng)用技術(shù)職業(yè)學(xué)院,河南 鄭州 450042;4.海關(guān)總署風(fēng)險(xiǎn)防控中心(黃埔),廣東 廣州 510730;5.商丘師范學(xué)院,河南 商丘 476000)

羊球蟲病是由艾美爾屬球蟲寄生于羊腸粘膜上皮細(xì)胞造成腸道損傷的原蟲病,2～4周齡的哺乳羔羊易發(fā)病,一般多為亞臨床癥狀,如腹瀉、消瘦、生長(zhǎng)受阻等,嚴(yán)重時(shí)動(dòng)物發(fā)生急性腸炎而死亡[1-2]。病理切片可見腸上皮粘膜充血且有出血點(diǎn),炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯,彌漫性回腸粘膜增厚和折疊,空腸遠(yuǎn)端區(qū)域淋巴結(jié)腫大,纖維組織增生等[3]。目前,羊感染的艾美爾球蟲物種共有15個(gè),潛伏期為2～3周[4]。由于球蟲卵囊在高溫、高濕的條件下易發(fā)生孢子化,所以該病一般在夏、秋季多發(fā),導(dǎo)致幼畜死亡率升高、畜品質(zhì)下降,給牧民造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,因此亟需科學(xué)的防控技術(shù)以降低該病對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的危害[5]。藥物治療是養(yǎng)殖場(chǎng)最常用的球蟲病防控方法之一,建立最佳的用藥程序進(jìn)而有效防控羊球蟲病對(duì)于畜牧業(yè)的發(fā)展至關(guān)重要[6]。

地克珠利(Diclazuril)作為低毒、高效廣譜抗球蟲藥,已被廣泛應(yīng)用于球蟲病的防治[7-9]。濫用Diclazuril易導(dǎo)致動(dòng)物產(chǎn)生耐藥性、延誤病情和增加養(yǎng)殖成本[10]。因此,制定科學(xué)的用藥方案,嚴(yán)格掌握Diclazuril應(yīng)用的劑量和次數(shù)對(duì)于抗球蟲病十分關(guān)鍵。本研究應(yīng)用Diclazuril對(duì)自然感染球蟲的妊娠母羊及其哺乳羔羊進(jìn)行分組試驗(yàn),根據(jù)球蟲卵囊轉(zhuǎn)陰率、減少率、抗不同種球蟲效果及增重效益進(jìn)行Diclazuril藥效評(píng)估,從而選擇最佳的用藥程序,以期為防控妊娠母羊及其羔羊球蟲病提供技術(shù)依據(jù)和方法。

1 材料與方法

1.1 供試藥物及用法、用量

球畢特,100 g/瓶,含Diclazuril 1 g,購(gòu)自河南新正好生物工程有限公司。用時(shí),取本品1 g,加水10 mL,溶解混勻,按每千克體重1 mL的劑量經(jīng)口灌服。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

24只妊娠母羊及51只哺乳羔羊，均由河南某農(nóng)牧公司羊場(chǎng)提供。

1.3 糞便樣品采集

對(duì)供試的妊娠母羊及其哺乳羔羊的直腸采集糞便,每只羊10～20 g,分別置于潔凈塑料袋中，并記錄羊只的耳號(hào)、放牧方式、用藥情況、精神狀態(tài)等信息；將采集的糞便樣品帶回河南農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲學(xué)實(shí)驗(yàn)室,置4 ℃冰箱內(nèi)待檢。

1.4 球蟲卵囊檢查、計(jì)數(shù)及蟲種鑒定

檢查糞便中的卵囊采用飽和鹽水漂浮法;每克糞便中的卵囊數(shù)(oocysts per gram of feces, OPG)采用麥克馬斯特計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù);依據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[11-13]所描述的方法對(duì)球蟲卵囊進(jìn)行收集、培養(yǎng)和種類鑒定,用Motic顯微圖像分析處理系統(tǒng)測(cè)量并顯微拍照。

1.5 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇經(jīng)糞檢確診自然感染球蟲、生產(chǎn)期相近的24只妊娠母羊，將它們隨機(jī)分為4組,每組6只;第1～3組為藥物試驗(yàn)組,按照表1設(shè)計(jì)的用藥程序進(jìn)行投喂,第4組為不用藥對(duì)照組。每間隔1周對(duì)供試羊進(jìn)行糞便采集,應(yīng)用飽和鹽水漂浮法檢查糞便中有無(wú)球蟲卵囊并進(jìn)行OPG計(jì)數(shù)。在試驗(yàn)過程中羊只的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件均相同；詳細(xì)記錄試驗(yàn)羊的精神狀態(tài)及不良反應(yīng)；在試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)動(dòng)物進(jìn)行驅(qū)蟲。

表1 不同試驗(yàn)組的Diclazuril的用藥程序

1.6 療效考核

1.6.1 觀察臨床癥狀 在試驗(yàn)期間詳細(xì)記錄供試羊每日的飲食狀況、精神狀態(tài)、不良反應(yīng)等。

1.6.2 評(píng)定球蟲卵囊的方法 根據(jù)卵囊轉(zhuǎn)陰率、減少率考核用藥前和用藥后第7、14、21、28、35天的藥物抗球蟲效果;分別收集用藥前和用藥后糞便樣品中的球蟲卵囊并進(jìn)行孢子化培養(yǎng),根據(jù)孢子化卵囊鑒定蟲種，評(píng)定藥物對(duì)不同球蟲種類的防控效果。相關(guān)指標(biāo)的計(jì)算公式如下：

1.6.3 增重效益的評(píng)判 分別對(duì)各組哺乳羔羊的初生齡、2周齡、4周齡進(jìn)行稱重,計(jì)算各組在4周齡時(shí)的平均增重率，評(píng)判羊的增重效益。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行Pearson卡方檢驗(yàn),當(dāng)P<0.01時(shí)數(shù)據(jù)間差異極顯著,P<0.05時(shí)數(shù)據(jù)間差異顯著,P≥0.05時(shí)數(shù)據(jù)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,即數(shù)據(jù)間差異不顯著[14]。

2 結(jié)果與分析

2.1 供試羊健康狀態(tài)的評(píng)估結(jié)果

供試母羊及其羔羊在用藥期間未出現(xiàn)不良反應(yīng),飲食狀況和精神狀態(tài)正常，表明本試驗(yàn)所用藥物及用藥程序?qū)ρ虿划a(chǎn)生副作用。

2.2 用藥后球蟲卵囊評(píng)定結(jié)果

2.2.1 卵囊轉(zhuǎn)陰率 根據(jù)本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的用藥程序?qū)┰嚹秆蜻M(jìn)行投喂,根據(jù)母羊用藥后球蟲卵囊轉(zhuǎn)陰率評(píng)定Diclazuril的藥效。結(jié)果(表2)顯示, Diclazuril 1～3組母羊的球蟲卵囊轉(zhuǎn)陰率均高于對(duì)照組,差異極顯著(P<0.01)，表明在本試驗(yàn)中Diclazuril可有效降低球蟲卵囊數(shù)量,具有明顯的驅(qū)蟲效果。

表2 供試母羊的球蟲卵囊轉(zhuǎn)陰率

注：“a”表示與不用藥對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。

2.2.2 卵囊減少率 根據(jù)母羊用藥前后的OPG值計(jì)算各組母羊的卵囊減少率,評(píng)定Diclazuril的藥效。結(jié)果(表3)顯示:各用藥組母羊在用藥后7 d、14 d的卵囊減少率均明顯高于對(duì)照組,差異極顯著(P﹤0.01);用藥后35 d,地克珠利1組與不用藥對(duì)照組相比,差異顯著(P<0.05),地克珠利2組和地克珠利3組與不用藥對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01);用藥后49 d,地克珠利2組與不用藥對(duì)照組相比差異不顯著(P>0.05),地克珠利3組與不用藥對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01)。上述結(jié)果表明Diclazuril 3組對(duì)卵囊減少率的效果最為顯著。

表3 供試母羊球蟲卵囊減少率

2.2.3 Diclazuril抗不同種球蟲的效果 通過培養(yǎng)和鑒定各組羊用藥前和用藥后14 d的球蟲卵囊,檢測(cè)各組母羊給藥前后不同種球蟲卵囊感染情況。結(jié)果(表4)顯示：用藥前共檢測(cè)到5種艾美爾球蟲(如圖1所示),分別為Eimeriamarsica(感染率34.33%，下同)、E.granulose(46.50%)、E.parva(9.00%)、E.ahsata(7.50%)、E.pallida(2.67%)；在用藥后第14天,1～3組僅檢測(cè)到2種艾美爾球蟲卵囊,分別為E.marsica(62.67%)、E.granulose(37.33%)；不用藥對(duì)照組在用藥前和用藥后14 d均檢測(cè)到4種球蟲卵囊。表明Diclazuril可有效防控E.parva、E.ahsata和E.pallida。

表4 供試母羊受不同種球蟲卵囊的感染率%

2.3 增重效益評(píng)判結(jié)果

通過對(duì)各組哺乳羔羊進(jìn)行稱重計(jì)算平均增重率,評(píng)價(jià)不同用藥程序?qū)Σ溉楦嵫蛟鲋匦Ч挠绊憽＝Y(jié)果(表5)顯示：Diclazuril 3組的哺乳羔羊在4周齡的平均增重率高于不用藥對(duì)照組,差異顯著(P<0.05);各用藥組哺乳羔羊的平均增重率與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。表明在Diclazuril 3組的用藥對(duì)哺乳羔羊增重效果最顯著。

1:馬爾西卡艾美爾球蟲(E.marsica);2:顆粒艾美爾球蟲(E.granulose);3:小型艾美爾球蟲(E.parva); 4:阿撒他艾美爾球蟲(E.ahsata);5:蒼白艾美爾球蟲(E.pallida)。

圖1 湖羊孢子化艾美爾球蟲卵囊圖(400×)表5 不同用藥組哺乳羔羊增重效果

注：“b”表示與不給藥對(duì)照組比較差異顯著(P<0.05)。

3 討論

球蟲病作為危害羊最嚴(yán)重的腸道寄生蟲病之一,在養(yǎng)殖戶或集約化養(yǎng)殖場(chǎng)均普遍發(fā)生,其防控形勢(shì)依然嚴(yán)峻。采取提供充足的營(yíng)養(yǎng)、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、減少應(yīng)激反應(yīng)等措施對(duì)于降低球蟲病的危害有一定作用,但不能完全控制球蟲病的發(fā)生[15-16]。目前,藥物是防治球蟲病的主要途徑,但藥物使用不當(dāng)易導(dǎo)致耐藥性的發(fā)生,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[17]。因此,制定科學(xué)的用藥方案,提前使用抗球蟲藥物對(duì)妊娠母羊進(jìn)行防控,不僅可有效降低球蟲病對(duì)母羊的危害,同時(shí)還可以保證幼齡羊的正常生長(zhǎng)[18]。

本試驗(yàn)選擇Diclazuril作為抗球蟲藥,根據(jù)設(shè)計(jì)的Diclazuril用藥程序分別對(duì)24只經(jīng)糞檢確診的自然感染球蟲的妊娠母羊及其羔羊進(jìn)行藥效試驗(yàn)。在試驗(yàn)期間,供試羊無(wú)不良癥狀;通過應(yīng)用卵囊轉(zhuǎn)陰率、減少率評(píng)定Diclazuril對(duì)用藥后供試羊球蟲的防治效果,結(jié)果表明,用藥后在1～3試驗(yàn)組母羊卵囊轉(zhuǎn)陰率、卵囊減少率均高于不用藥對(duì)照組,說明Diclazuril防控羊球蟲的效果比較顯著，且在母羊產(chǎn)前1周和產(chǎn)后1周,按1 mg/kg劑量投服Diclazuril,每天1次,連用2 d,對(duì)母羊及其哺乳羔羊的自然感染球蟲的防控效果最好;通過鑒定各組羊用藥前和用藥后14 d的球蟲卵囊評(píng)定藥物對(duì)不同種球蟲的效果,表明Diclazuril可有效防控E.pallida、E.parva和E.ahsata，且能保持較長(zhǎng)時(shí)間的藥效,這與周變?nèi)A等[19]報(bào)道的“Diclazuril對(duì)各階段球蟲的防控效果不同”一致;Wang等[20]指出Diclazuril可顯著提高雞的增重效益。在本研究中Diclazuril 3組用藥程序?qū)Σ溉楦嵫虻脑鲋匦б孀詈?。綜上所述,Diclazuril 3組用藥程序?qū)δ秆蚣捌洳溉楦嵫虻淖匀桓腥厩蛳x的防控效果最好，且對(duì)哺乳羔羊的增重效果最顯著。本試驗(yàn)研究結(jié)果可為防控妊娠母羊及其羔羊的球蟲病提供技術(shù)支撐。