盤龍七的質(zhì)量分析研究

張韞 高蘇亞 唐一梅 鄧佩穎 高慧

摘? ? ? 要：對(duì)不同產(chǎn)地的盤龍七藥材進(jìn)行質(zhì)量分析和評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)依據(jù)《中國(guó)藥典》，采用顯微鑒別、理化鑒別、薄層鑒別對(duì)盤龍七藥材進(jìn)行鑒別;對(duì)其水分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物、揮發(fā)性醚溶性浸出物進(jìn)行測(cè)定;采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定盤龍七藥材中巖白菜素和兒茶素含量。結(jié)果表明：不同產(chǎn)地盤龍七藥材中所含水分、浸出物、巖白菜素和兒茶素含量存在差異，為建立盤龍七質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

關(guān)? 鍵? 詞：盤龍七;質(zhì)量分析;巖白菜素;兒茶素

中圖分類號(hào)：R914.1? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A? ? ? ?文章編號(hào)： 1671-0460（2019）09-1938-04

Abstract： The quality of Rhizoma Bergeniae Scopulosae of different areas was analyzed and evaluated. Rhizoma Bergeniae Scopulosae from different areas was identified through microscopical identification， physicochemical identification and thin layer chromatography identification. The water content， the water-soluble extraction content， alcoholic-soluble extraction content and ether -soluble extraction content of Rhizoma Bergeniae Scopulosae were determined. The contents of bergenin and catechin in Rhizoma Bergeniae Scopulosae were determined simultaneously by HPLC.The results showed that the water extract， soluble extraction content， bergenin and catechin contents in Rhizoma Bergeniae Scopulosae from different areas were different. The proposed method can be used to evaluate the quality of Rhizoma Bergeniae Scopulosae.

Key words： Rhizoma Bergeniae Scopulosae; Quality analysis; Bergenin; Catechin

盤龍七（Rhizoma Bergeniae Scopulosae）是虎耳草科（Saxifragaceae）巖白菜屬（Bergenia）植物秦嶺巖白菜Bergenia scopulosa T. P. Wang的干燥根莖[1]。盤龍七主要分布于秦嶺太白山、柞水等地，作為“太白七藥”之一[2]，具有收澀固腸、活血化瘀、祛風(fēng)除濕、消腫止痛等功效[3]，臨床上常作為治療慢性支氣管炎、肺氣腫、支氣管哮喘等呼吸系統(tǒng)疾病的特效藥物[4]。由此可見，盤龍七極具研發(fā)價(jià)值，受到研究人員的廣泛關(guān)注。

崔瑩[5，6]等從盤龍七中分離得到16種化合物：其中巖白菜素和兒茶素為其主要成分。目前有關(guān)盤龍七質(zhì)量分析的研究主要集中在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和含量測(cè)定。馮永輝等[7]考察了盤龍七藥材的水分、總灰分、酸不溶灰分、浸出物、重金屬、砷鹽的含量，并初步建立了盤龍七的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。迄今未見盤龍七系統(tǒng)的質(zhì)量分析研究的報(bào)道。

本文依據(jù)《中國(guó)藥典》（2015年版）對(duì)中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求，主要進(jìn)行鑒別、檢查、水分測(cè)定、浸出物測(cè)定、含量測(cè)定等對(duì)盤龍七進(jìn)行質(zhì)量分析。通過(guò)對(duì)不同產(chǎn)地的盤龍七的質(zhì)量分析，給出不同產(chǎn)地藥材的差異性，為陜西地方藥材盤龍七的深入開發(fā)和質(zhì)量控制提供一定的實(shí)驗(yàn)參考，為盤龍七的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。

1? 實(shí)驗(yàn)部分

1.1? 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀、尼康550D型電子顯微鏡（日本尼康公司）、顯微鏡圖像分析系統(tǒng)Smart V（日本尼康公司）、 KQ 5200DE型超聲提取儀（昆山市超聲儀器有限公司）、GR-202型分析天平（日本AND公司）。

1.2? 試劑與試藥

盤龍七藥材（產(chǎn)地陜西、四川）經(jīng)西安醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥教研室汪興軍老師鑒定為Bergenia scopulosa T. P. Wang的根莖。

巖白菜素對(duì)照品（批號(hào)：B10940-20mg，上海士鋒生物科技有限公司），兒茶素對(duì)照品（批號(hào)：B10081-20mg，上海士鋒生物科技有限公司）。甲醇、乙腈均為色譜純（天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）;其它試劑均為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

2? 實(shí)驗(yàn)方法

2.1? 顯微鑒別

取不同產(chǎn)地的盤龍七藥材適量，用藥碾碾碎制成粗粉備用。用取樣針取粉末適量，滴加2滴水合氯醛試液，用取樣針進(jìn)行攪拌，蓋上蓋玻片，若有氣泡，從一邊滴入適量稀甘油，用濾紙擦拭掉四周的液體，置于顯微鏡下觀察。

2.2? 理化鑒別

2.2.1? 酚類成分

盤龍七藥材粉末過(guò)60目篩，精密稱取1.10 g，用無(wú)水甲醇浸泡1 h，超聲（200 W）提取45 min，抽濾，濾液用無(wú)水甲醇定容于50 mL容量瓶即得供試品溶液。

FeCl3 反應(yīng)：取1 mL供試品溶液于試管加入適量甲醇溶解，加入醋酸酸化后加入1～2滴1% FeCl3溶液觀察現(xiàn)象。

香草醛?鹽酸反應(yīng)：取供試品溶液滴在濾紙片上，干燥，噴灑香草醛-鹽酸試劑，觀察現(xiàn)象。

2.2.2? 香豆素類化合物

異羥肟酸鐵反應(yīng)：取供試品溶液1 mL于試管中，滴加2～3滴7%的鹽酸羥胺醇溶液和10%的氫氧化鈉溶液，水浴加熱至變色，冷卻后滴加1%鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH=3～4，再加入1～2滴FeCl3試液，觀察現(xiàn)象。

熒光反應(yīng)：取供試品溶液1～2滴在濾紙上，干燥后在300 nm紫外燈下觀察，觀察現(xiàn)象。

2.2.3? 苷類化合物

（1）Molisch反應(yīng)

取供試品溶液1 mL，加入1～2滴10% a-萘酚試液，搖勻，傾斜管壁再沿試管壁加入1 mL濃硫酸，觀察試管顏色變化。

（2）Fehling反應(yīng)

取供試品溶液1 mL，加新制Fehling試劑，沸水浴加熱數(shù)分鐘，觀察試管顏色變化。

2.2.4? 黃酮類成分

（1）AlCl3反應(yīng)

取供試品溶液1滴置于濾紙上，滴加1%三氯化鋁乙醇溶液2滴，吹干，于365 nm紫外燈下檢視。

（2）氨試劑反應(yīng)

用膠頭滴管取供試品溶液1～2滴在濾紙上（斑點(diǎn)濃度集中），干燥后，將濾紙?jiān)跐獍彼涎?，立即置?60 nm紫外燈下觀察。

2.3? 色譜鑒別

2.3.1? 巖白菜素和兒茶素對(duì)照品溶液的配制

精密稱取巖白菜素0.51 mg，兒茶素0.55 mg分別置于5 mL容量瓶，用無(wú)水甲醇定容，即得0.10 mg/mL的巖白菜素和0.11 mg/mL的兒茶素對(duì)照品溶液。

2.3.2? 供試品溶液制備

取盤龍七粉末約0.2 g，置于具塞錐形瓶中，加入無(wú)水甲醇20 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理40 min，冷卻，用無(wú)水甲醇補(bǔ)足，搖勻?yàn)V過(guò)，取續(xù)濾液即得供試品溶液。吸取對(duì)照品和供試品溶液1～2μL，分別點(diǎn)樣于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯∶乙酸乙酯∶甲醇∶甲酸（1∶2∶0.2∶0.1）為展開劑展開，在254 nm紫外燈下觀察。

2.4? 水分測(cè)定

2.4.1? 烘干法

按照《中國(guó)藥典》（2015年版）一部附錄IX H水分測(cè)定法中第一法（烘干法）測(cè)定。稱取盤龍七藥材粉末（過(guò)60目篩）3.0 g，在100～105 ℃的烘箱中干燥5 h，冷卻，精密稱定，再干燥1 h，冷卻，根據(jù)減失的重量，計(jì)算盤龍七藥材水分的含量。

2.4.2? 甲苯法

采用藥典（2015年版）一部附錄Ⅸ H的第一法甲苯法，適用于含揮發(fā)性成分的藥品。檢讀水量，并計(jì)算成供試品的含水量（%）。

2.5? 浸出物測(cè)定

按照《中國(guó)藥典》（2015年版）一部浸出物測(cè)定法項(xiàng)下的熱浸法（附錄X A），對(duì)盤龍七進(jìn)行藥材水溶性和醇溶性，揮發(fā)性醚溶性浸出物的含量測(cè)定。

2.5.1? 水溶性浸出物測(cè)定

取供試品約1.0 g，精密稱定，回流1 h，過(guò)濾精密量取濾液10 mL，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量。

2.5.2? 醇溶性浸出物測(cè)定

取供試品約1.0 g，回流1h，放冷，取下錐形瓶，精密量取濾液10 mL，蒸干后，干燥3 h，精密稱定重量。以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量。

2.5.3? 揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定

取供試品2～5 g，索氏提取器提取。加乙醚適量，加熱回流8 h，揮去乙醚，殘?jiān)稍?8 h精密稱定，加熱至105 ℃干燥至恒重。其減失重量即為揮發(fā)性醚浸出物的重量。

2.6? 含量測(cè)定

2.6.1? 色譜條件

色譜柱：Eclipse plus-C18（4.6 nm×100 nm，3.5μm）;流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸溶液（V/V，11∶89），檢測(cè)波長(zhǎng)：275 nm;流速1.0 mL/min，柱溫：室溫;進(jìn)樣量：20 ?L。

2.6.2? 對(duì)照品溶液和供試品溶液的配制

精密稱取巖白菜素對(duì)照品10.1 mg置于10 mL的容量瓶，用甲醇定容，精密稱取兒茶素對(duì)照品11.0 mg置于10 mL的容量瓶，甲醇定容。精密移取巖白菜素和兒茶素對(duì)照品溶液適量混合，制成0.92 mg/mL巖白菜素和0.083 mg/mL兒茶素的混合對(duì)照品溶液。精密稱取陜西盤龍七0.250 7 g，四川盤龍七0.252 6 g分別置于25 mL容量瓶，加入甲醇，靜置1 h，超聲提取45 min，抽濾，續(xù)濾液經(jīng)0.45μm的濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。

精密吸取混合對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL分別置于2 mL容量瓶，甲醇定容。按1.3項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。

2.6.3? 樣品含量測(cè)定

精密稱取盤龍七藥材3份，每份約0.25 g，依據(jù)2.3.2項(xiàng)下制備供試液， 2.6.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄巖白菜素和兒茶素峰面積，計(jì)算盤龍七藥材中巖白菜素和兒茶素的含量。

3? 結(jié)果討論

3.1? 顯微鑒定結(jié)果

3.1.1? 陜西藥材

粉末深灰色。草酸鈣簇晶和棕色塊較多，形狀大小不一，大型簇晶的晶塊較大棱角較尖。淀粉粒較多，螺紋導(dǎo)管和梯形導(dǎo)管較少形狀清晰，見圖1。

3.1.2? 四川藥材

粉末淺灰色。草酸鈣簇晶較多，簇晶晶塊較大，棱角鈍，多單獨(dú)分布。未發(fā)現(xiàn)螺紋導(dǎo)管，梯形導(dǎo)管較小，但淀粉粒和棕色塊明顯，同時(shí)觀察到明顯的薄壁細(xì)胞，見圖2。

盤龍七粉末顯微鑒別結(jié)果表明，不同產(chǎn)地盤龍七的藥材顯微組織差異不大，大都存在淀粉粒、草酸鈣簇晶、棕色塊及梯形導(dǎo)管等顯微特征。

3.2? 理化鑒別結(jié)果

3.2.1? 酚類化合物

FeCl3反應(yīng)：在供試品溶液中加入FeCl3 溶液溶液均顯紫色，說(shuō)明盤龍七中含有酚類物質(zhì)。香草醛-鹽酸反應(yīng)：在濾紙上滴有供試品溶液斑點(diǎn)處噴灑香草醛-鹽酸均顯紅色，說(shuō)明盤龍七中含有酚類物質(zhì)。

3.2.2? 香豆素類反應(yīng)

異羥肟酸鐵反應(yīng)：供試品試管溶液加入異羥肟酸鐵和鹽酸溶液后均顯紫色，說(shuō)明盤龍七中含有香豆素類物質(zhì)。熒光反應(yīng)： 在300 nm紫外燈下觀察，在供試品溶液處顯示黃綠色熒光，說(shuō)明盤龍七中含有香豆素類物質(zhì)。

3.2.3? 苷類化合物

Molisch反應(yīng)：供試品試管內(nèi)在濃硫酸與上層液面交界處出現(xiàn)紫紅色環(huán)，說(shuō)明盤龍七中含有苷類物質(zhì)。Fehling試劑反應(yīng)：滴加有Fehling試劑的供試品溶液試管沸水浴加熱后試管中出現(xiàn)磚紅色沉淀，說(shuō)明盤龍七中含有苷類物質(zhì)。

3.2.4? 黃酮類成分

AlCl3反應(yīng)：濾紙上滴加有供試品溶液處噴灑AlCl3溶液后在365 nm紫外燈下觀察呈黃綠色熒光，說(shuō)明盤龍七中含有黃酮類物質(zhì)。濃氨水溶液反應(yīng)：用氨水熏蒸滴加有供試品溶液的濾紙，在300 nm紫外燈下觀察，顯黃綠熒光，說(shuō)明盤龍七中含有黃酮類物質(zhì)。

3.3? 薄層色譜鑒別結(jié)果

硅膠GF254薄層色譜結(jié)果見圖3。

盤龍七藥材薄層色譜結(jié)果表明，盤龍七供試品色譜在與巖白菜素、兒茶素對(duì)照品具有相同的色譜行為，盤龍七中可能含有巖白菜素和兒茶素成分。

3.4? 水分和浸出物測(cè)定結(jié)果

陜西盤龍七藥材中水分平均含量7.81%，水溶性浸出物平均含量為26.6%，醇溶性浸出物平均含

量為51.0%，醚溶性浸出物平均含量為1.6%;四川盤龍七藥材中水分平均含量為8.6%，水溶性浸出物平均含量為32.8%，醇溶性浸出物平均含量為43.6%;醚溶性浸出物平均含量為2.2%。

3.5? 含量測(cè)定

3.5.1? 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

巖白菜素回歸方程為Y = 27 530X - 210.6（R = 0.999 0），兒茶素回歸方程為? Y = 9 481.9X +1.9（R = 0.998 0），表明巖白菜素在0.092～0.46 mg/mL兒茶素在0.008 3～0.042 mg/mL的范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系。

3.5.2? 樣品含量測(cè)定

盤龍七藥材中巖白菜素和兒茶素的含量測(cè)定結(jié)果見表1。

4? 結(jié) 論

本次實(shí)驗(yàn)從顯微鑒別、理化鑒別、色譜鑒別全面的對(duì)盤龍七藥材進(jìn)行了定性分析，為盤龍七藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立奠定理論基礎(chǔ)。

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