水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）食用安全性毒理學(xué)評價

【摘 要】目的：評價水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）的食用安全性。方法：通過大鼠經(jīng)口急性毒性試驗、遺傳毒性試驗及大鼠30天喂養(yǎng)試驗，評價Fruitflow?的食用安全性。結(jié)果：水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）對大鼠的急性經(jīng)口最大耐受劑量大于20.0g/kg。Ames 試驗、小鼠骨髓微核試驗和精子畸形試驗結(jié)果均為陰性;大鼠30天喂養(yǎng)試驗各項指標(biāo)也未見明顯的中毒癥狀，也無死亡。結(jié)論：水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）為無毒、無致突變作用的保健食品。

【關(guān)鍵詞】水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）;毒性試驗;安全評價

水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）是經(jīng)物理工藝去除脂溶性成分后得到一種水溶性濃縮物，含有天然存在的抗血小板化合物，攝入后減少血小板聚集，從而將血液保持在流體和低凝狀態(tài)。這有助于防止在循環(huán)系統(tǒng)中形成微聚集體，以及防止血小板粘附到血管壁或脂肪斑上，從而保持健康的血液流通。但血小板功能沒有被完全抑制，并且保持在適當(dāng)?shù)乃?，使得血小板在血管損傷時可以聚集[1]，國外對其功效進(jìn)行了大量的人體試驗研究，但未對該濃縮物物進(jìn)行毒理學(xué)評價。因此，本研究以GB15193.1-2014《食品安全性毒理學(xué)評價程序》為依據(jù)，對Fruitflow?進(jìn)行毒理學(xué)研究，以評價其安全性，為Fruitflow?在保健食品、功能食品等領(lǐng)域的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物

水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）（批號：201701），由湯臣倍健股份有限公司提供，人體口服推薦劑量為0.15g/天，試驗時樣品均用蒸餾水配制和稀釋。

1.2 動物

SPF級ICR小鼠（體重18～22 g），雌雄各半，昆明小鼠（體重25～30 g）、SD大鼠（體重180～220 g）由廣東省醫(yī)學(xué)試驗動物中心提供，許可證號SCXK（粵）2013-002。動物飼養(yǎng)在屏障環(huán)境，飼養(yǎng)溫度為23～25℃，相對濕度在50%～70%之間，自然光照和黑暗交替12h/d，各組自由攝食和飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)3-5天后隨機(jī)分組進(jìn)行試驗。

1.3 試驗方法

1.3.1 急性毒性試驗

采用最大耐受量法，ICR小鼠，雌雄各半，采用最大耐受量 （MTD） 法。試驗前動物禁食16h。灌胃體積為0.2 ml/10g體重，折合劑量為20.0g/kg.BW，受試液混懸液經(jīng)口灌胃2次。灌胃后連續(xù)觀察14d，觀察期間記錄小鼠的中毒癥狀、異常反應(yīng)與死亡情況。

1.3.2 Ames試驗

采用經(jīng)鑒定符合要求的鼠傷寒沙門氏茵組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株進(jìn)行試驗。采用多氯聯(lián)苯（PCB）誘導(dǎo)的大鼠肝微粒體酶（S-9）作為體外代謝活化系統(tǒng)。試驗設(shè)立8、40、200、1000、5000?g/皿5個劑量，同時設(shè)立自發(fā)回變組、溶劑對照組和陽性對照組。按平板摻入法在加與不加代謝活化系統(tǒng)（±S9）的條件下進(jìn)行，每組設(shè)3個平行皿，重復(fù)2次。

1.3.3 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗

昆明種小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為陰性對照（植物油）、陽性對照（環(huán)磷酰胺40mg/kg）、fruitflow?（2.5g/kg，5.0g/kg和10g/kg）組。復(fù)合提取物用植物油配成相應(yīng)劑量的受試液給小鼠灌胃。采用間隔 24h 兩次經(jīng)口灌胃法進(jìn)行試驗，按20 ml/kg體重灌胃，末次給樣后6小時處死動物，取胸骨骨髓制片。每只動物計數(shù)200個嗜多染紅細(xì)胞（PCE），計算嗜多染紅細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞的比值 （PCE/NCE）;同時計數(shù)1000個PCE中含微核的細(xì)胞數(shù)，計算微核率。

1.3.4 小鼠精子畸形試驗

將雄性昆明小鼠隨機(jī)分為5組，每組5只，分別為陰性對照（植物油），陽性對照（環(huán)磷酰胺40mg/kg），fruitflow?（2.5g/kg，5.0g/kg和10g/kg）組，按20ml/kg體重灌胃給藥，每日灌胃一次，連續(xù)5d。末次灌胃后第30d處死動物，取雙側(cè)附睪，做精子涂片，伊紅染色，每只動物計數(shù)1000個完整精子，計算精子畸形率。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。微核試驗采用Poisson分布U檢驗，精子畸形試驗采用卡方檢驗對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理，大鼠 30d喂養(yǎng)試驗各數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，以P<0.05作為顯著性水平。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗

由表1可見，以20.0g/kg劑量給兩種性別的ICR種小鼠灌胃后未見明顯中毒癥狀，觀察14天未出現(xiàn)死亡。觀察期末將動物處死進(jìn)行解剖檢查，肝、脾、胃、腸、心、肺等主要臟器，未見明顯的異常改變。表明Fruitflow?對雌、雄ICR小鼠的最大耐受劑量均大于20.00g/kg，屬無毒級。

2.2 Ames試驗

由表2可見，在Ames試驗中無論是否加S9， Fruitflow?各劑量組的回變菌落數(shù)都沒有超過自發(fā)對照組的2倍，并且各劑量組之間未出現(xiàn)劑量—反應(yīng)關(guān)系。說明Fruitflow?不具有致突變作用。

2.3 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗

由表3可見，與陰性對照組相比， Fruitflow?各劑量組的微核率未出現(xiàn)顯著性差異（P>0.05），而環(huán)磷酰胺陽性組的微核率差異顯著（P<0.05）。Fruitflow?各劑量組嗜多染紅細(xì)胞 （PCE）與成熟紅細(xì)胞 （NCE） 的比值未少于陰性對照組的20%，說明Fruitflow?未表現(xiàn)出細(xì)胞毒性。

2.4 小鼠精子畸形試驗

由表4可見，與陰性對照組相比， Fruitflow?各劑量組的小鼠精子畸形發(fā)生率未見顯著性差異（P>0.05），而環(huán)磷酰胺陽性對照組差異顯著（P<0.05）。說明Fruitflow?對小鼠精子無致畸作用。

3 結(jié)論

水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）是第一個獲得歐洲食品安全局（EFSA）13.5健康聲稱條款批準(zhǔn)的天然健康安全配料，經(jīng)多個科學(xué)研究證明可促進(jìn)健康血液循環(huán)，可廣泛應(yīng)用于保健食品、功能食品等健康產(chǎn)品領(lǐng)域。研究表明，血小板在動脈粥樣硬化的形成過程中起著非常重要的作用，可誘導(dǎo)、加速動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。炎癥等因素的刺激下，活化的血小板粘附血管內(nèi)皮，釋放一系列生物活性物質(zhì)，增強(qiáng)白細(xì)胞募集、活化和遷移，增加脂質(zhì)在血管壁的沉積，誘導(dǎo)動脈粥樣硬化斑塊的形成，阻礙血流的正常運(yùn)行[2]。對于已發(fā)生動脈粥樣硬化的患者而言，他們的血管壁上會出現(xiàn)許多斑塊，這些斑塊一旦破裂，生理性止血反應(yīng)便會被“放大”，形成 病理性血栓[3]，堵塞血管，發(fā)生 腦缺血、 腦卒中、 心絞痛、 心肌梗塞等一系列嚴(yán)重的心血管事件。流行病學(xué)研究證據(jù)也表明，動脈粥樣硬化性心血管?。ü谛牟4]、腦卒中[5]、周圍動脈疾病[6]）患者血小板聚集率、血小板活化后分泌的生物活性物質(zhì)顯著升高。除此以外，動脈彈性的減弱也與血小板的異常活化有關(guān)[7]。因此，維持正常血小板功能（防止異常活化和聚集）是防治動脈粥樣硬化及心血管疾病的基礎(chǔ)。Fruitflow?具有“維持正常的血小板聚集，有助于血流健康”的功效，其安全性在動物試驗中也得到了進(jìn)一步的驗證。

在本實驗室條件下， Fruitflow?對ICR小鼠的急性經(jīng)口最大耐受量（MTD）大于20.00g/kg; Ames試驗、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗和小鼠精子畸形試驗結(jié)果未見Fruitflow?有致突變作用。因此，本研究結(jié)果表明Fruitflow?未見明顯毒副作用，為水溶性番茄濃縮物（Fruitflow?）作為保健食品的研究開發(fā)提供了重要的毒理學(xué)科學(xué)依據(jù)。

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作者簡介

汪玉芳（1982-），女，安徽省太湖縣人。碩士研究生學(xué)歷。職稱：執(zhí)業(yè)中藥師、執(zhí)業(yè)醫(yī)師。主要研究方向為藥品與保健食品研發(fā)。