高海娟， 劉澤東， 孫 蕊， 吳建新

（1.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)分院，黑龍江齊齊哈爾161005；2.內(nèi)蒙古自治區(qū)退耕還林和外援項目管理中心，內(nèi)蒙古呼和浩特010020）

苜蓿（Medicago sativa L.）有“牧草之王”的美稱，其莖葉柔軟，營養(yǎng)豐富，粗蛋白質含量高，適口性好，是家畜最為理想的飼草飼料，尤其對于奶牛，可以顯著提高奶產(chǎn)量和乳品質。 青貯是苜蓿商品化開發(fā)利用的主要方式之一， 相對于生產(chǎn)干草其具有不受環(huán)境條件限制， 可最大限度地減少葉片的損失， 且能夠保持青鮮飼料鮮態(tài)和大部分營養(yǎng)， 調節(jié)飼料季度與年度間供應平衡（陳喜梅等，2017）。 但因苜蓿青貯飼料中蛋白質含量高，緩沖能值高，碳水化合物含量低，乳酸菌數(shù)量少， 直接青貯很難獲得優(yōu)質青貯飼料（高海娟等，2015）。 苜蓿半干青貯或通過添加乳酸菌、 纖維素酶等添加劑進行青貯能夠有效的改善青貯效果（徐煒等，2014；葛劍等，2014；王瑩等，2010）。 本試驗以含水量為65.79%的紫花苜蓿為原料，添加纖維素酶（0.3 g/kg）進行袋裝青貯，通過測定干物質含量、粗蛋白質、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、氨態(tài)氮含量、pH、有機酸含量（乳酸、乙酸、丙酸、丁酸）等技術指標研究不同青貯時期（45、60、75、90 d）的營養(yǎng)成分和發(fā)酵品質的動態(tài)變化。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 青貯原料：選擇頭茬初花期的紫花苜蓿， 來自黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)分院科研基地。

試驗藥品及用品：纖維素酶、聚乙烯袋、吸塵器、噴壺等。

1.2 試驗設計 試驗采用完全隨機區(qū)組設計，設計45、60、75、90 d 共4 個貯藏時間處理， 每個處理3 次重復。

1.3 試驗方法

1.3.1 青貯飼料的制作 初花期用鐮刀刈割苜蓿，留茬高度6 cm，將刈割后的苜蓿在晾曬場進行晾曬后采用鍘草機將苜蓿切割成3 ～4 cm 長的小段。 青貯原料多點采樣帶回實驗室，烘干法測定含水量。 將青貯原料與添加劑纖維素酶（0.3 g/kg）攪拌均勻后裝入大聚乙烯青貯袋（0.7 m×1.2 m）中，每袋20 kg，邊裝邊踩實壓緊，最后用吸塵器抽空氣后用繩子扎緊，透明膠帶纏繞封口，室溫條件下避光保存。

1.3.2 青貯飼料營養(yǎng)成分的測定 烘干法60 ℃下烘干24 h 測定苜蓿原料含水量；烘干法105 ℃烘干8 h 測定干物質含量； 采用改良式凱氏定氮法測定粗蛋白質含量；采用Van Soest 的方法測定中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量。

1.3.3 青貯飼料發(fā)酵品質指標測定 取苜蓿青貯樣品，準確稱取20 g 后，用剪刀剪短，長度1 cm左右，加180 mL 去離子水搖勻，放入4 ℃恒溫冰箱中24 h， 取出搖勻用4 層粗紗布過濾燒杯中，再用定量濾紙過濾到三角瓶中， 濾液測定pH，取測完pH 的濾液使用ICS-1100 離子色譜儀（色譜柱型號：AS23； 進樣量：25 μL； 流動相：4.5 mmol Na2CO3，0.8mmol NaHCO3；流速：1 mL/min）檢測濾液中的乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量，采用苯酚-次氯酸鈉比色法測定氨態(tài)氮含量。

1.4 統(tǒng)計分析 采用Excel 和SAS 9.0 對數(shù)據(jù)進行計算和方差分析。

2 結果與分析

2.1 青貯飼料的營養(yǎng)成分 青貯后45、60、75、90 d 的營養(yǎng)成分各項指標，結果如表1 所示。

表1 不同貯藏天數(shù)苜蓿青貯飼料營養(yǎng)成分%

2.1.1 干物質含量 不同貯藏天數(shù)苜蓿青貯飼料的干物質含量為32.39% ～32.73%， 方差分析各處理間差異不顯著（P ＞0.05）。

2.1.2 粗蛋白質含量 不同貯藏天數(shù)苜蓿青貯飼料的粗蛋白質含量為14.76% ～18.62%， 其中貯藏60 d 粗蛋白質含量最高，為18.62%，貯藏90 d最低，為14.76%，貯藏45 d 和75 d 粗蛋白質分別為15.17%和15.36%，方差分析結果，貯藏60 d 青貯料粗蛋白質含量與其他貯藏時間粗蛋白質含量差異均顯著（P ＜0.05），貯藏45、75、90 d 之間粗蛋白質含量差異不顯著（P ＞0.05）。

2.1.3 中性洗滌纖維含量 不同貯藏天數(shù)青貯料的中性洗滌纖維含量為32.25% ～41.64%， 貯藏45 d 中性洗滌纖維含量為32.25%， 貯藏60 d 中性洗滌纖維含量升高至41.64%， 貯藏75 d 和95 d后降到37.30%和38.19%。 方差分析結果， 貯藏60 d 中性洗滌纖維含量與貯藏45、75 d 和95 d中性洗滌纖維含量差異均顯著（P ＜0.05）。

2.1.4 酸性洗滌纖維含量 貯藏45 d 的青貯飼料酸性洗滌纖維含量為28.44%， 貯藏60 d 酸性洗滌纖維含量降至26.43%， 隨著貯藏天數(shù)的增加， 酸性洗滌纖維含量呈明顯的上升趨勢， 貯藏75 d 和95 d 升高到32.28%和32.57%。 方差分析結果， 貯藏45、60 d 和貯藏75、95 d 的酸性洗滌纖維含量差異性顯著 （P ＜0.05）， 貯藏45 d 和60 d 的酸性洗滌纖維含量差異不顯著 （P ＞0.05）， 貯藏75 d 和貯藏95 d 酸性洗滌纖維含量差異不顯著（P ＞0.05）。

2.2 青貯飼料的發(fā)酵品質 青貯后45、60、75、95 d 的發(fā)酵品質指標，結果如表2 所示。

表2 不同貯藏天數(shù)苜蓿青貯飼料發(fā)酵品質

2.2.1 氨態(tài)氮含量 不同貯藏天數(shù)青貯料氨態(tài)氮含量為4.15% ～9.30%，其中貯藏45 d 和60 d 氨態(tài)氮含量比較偏低，分別為4.16%和4.15%，隨著貯藏時間的推移，氨態(tài)氮含量明顯增加，貯藏75 d 增加到8.14%，貯藏90 d 高達9.30%，說明蛋白質降解的速度加快。方差分析，貯藏75、90 d 氨態(tài)氮含量與貯藏45、60 d 差異顯著（P ＜0.05）。

2.2.2 有機酸含量 不同貯藏時間青貯料乳酸含量為2.92% ～4.01%，青貯60 d 乳酸含量最高，為4.01%，青貯90 d 最低，為2.92%，青貯45、75 d 乳酸含量分別為3.70%和3.92%， 隨著貯藏時間的推移， 乳酸含量呈現(xiàn)先升高后降低的規(guī)律。 方差分析， 青貯90 d 乳酸含量與青貯45、60、75 d 乳酸含量差異性顯著（P ＜0.05），其他貯藏時間之間乳酸含量差異性不顯著（P ＞0.05）。

苜蓿青貯45、60、75、90 d 乙酸含量分別為0.86%、0.72%、0.76%、0.75%，方差分析，不同貯藏時間乙酸含量差異不顯著（P ＞0.05）。

不同貯藏時間苜蓿青貯料丙酸含量為0.55%～0.73%，青貯60 d 丙酸含量最低，為0.55%，青貯75 d 丙酸含量最高，為0.78%，青貯45、90 d 丙酸含量分別為0.70%和0.73%，方差分析，各貯藏時間丙酸含量差異不顯著（P ＞0.05）。

青貯45、60 d 苜蓿沒有檢測到丁酸， 青貯75 d丁酸含量為0.06%，青貯90 d 丁酸含量為0.19%，方差分析，青貯90 d 丁酸含量與青貯45、60、75 d差異顯著（P ＜0.05），其他貯藏時間之間丁酸含量差異不顯著（P ＞0.05）。

3 結論與討論

原料的含水量是苜蓿青貯效果的關鍵因素之一， 過高和低水分青貯效果均不佳。 陳喜梅等（2017） 研究發(fā)現(xiàn)， 苜蓿青貯最適含水量約為70%；聶柱山（1990）研究表明，青貯原料水分含量控制在60% ～68%為宜。 本試驗中苜蓿青貯原料含水量為65.79%，這個含水量保證了青貯飼料發(fā)酵的品質。

添加纖維素酶能夠有效改善苜蓿青貯飼料的營養(yǎng)價值和發(fā)酵品質。 鄧艷芳等（2008）報道，在青貯過程中添加纖維素酶能將青貯原料的結構性碳水化合物降解為單糖或雙糖，為青貯發(fā)酵提供更多可供利用的底物，加速乳酸菌在青貯早期的繁殖， 使青貯pH 快速降低。 萬里強等（2011）研究表明，苜蓿青貯時添加纖維素酶能降低青貯料的氨態(tài)氮含量和保存更多的粗蛋白質以及生成更多的乳酸。薛艷林等（2010）應用纖維素酶進行青貯發(fā)現(xiàn)，苜蓿青貯飼料的pH 和氨態(tài)氮含量，極顯著低于對照組（P ＜0.01），乳酸含量顯著高于對照組（P ＜0.05），發(fā)酵品質和飼用價值均得到改善。 本青貯試驗中添加纖維素酶，添加量為0.3 g/kg。

不同貯藏天數(shù)粗蛋白質含量為14.76% ～18.62%， 貯藏60 d 粗蛋白質含量最高，為18.62%， 貯藏60 d 與其他3 個貯藏時間粗蛋白質含量差異均顯著（P ＜0.05）；不同貯藏天數(shù)青貯料的氨態(tài)氮含量為4.15% ～9.30%，貯藏45 d和60 d 氨態(tài)氮含量低， 分別為4.16%和4.15%，隨著青貯天數(shù)的增加， 氨態(tài)氮含量明顯增加，75 d增加到8.14%，90 d 后高達9.30%； 苜蓿青貯料pH 隨著青貯天數(shù)的延長呈現(xiàn)由高到低再升高的過程，貯藏60 d 的pH 最低，為4.54；乳酸含量隨著貯藏時間的推移， 呈現(xiàn)先升高后降低的規(guī)律，青貯60 d 乳酸含量最高，為4.01%。青貯45、60 d 的苜蓿沒有檢測到丁酸，青貯75、90 d 丁酸含量分別為0.06%和0.19%。

粗蛋白質含量、氨態(tài)氮含量、pH、乳酸含量、丁酸含量是評判苜蓿青貯品質主要關鍵性指標。青貯飼料粗蛋白質含量越高， 氨態(tài)氮含量越低，說明青貯飼料中蛋白質及氨基酸的分解程度越低，青貯質量越好。 乳酸含量越高，丁酸含量越低，青貯以乳酸發(fā)酵為主，pH 也就越低，青貯質量也就越好（高海娟等，2017；許慶方等，2006；郭旭生等，2005）。本試驗中選取4 個貯藏時間中貯藏60 d 粗蛋白質含量和乳酸含量最高，pH 和氨態(tài)氮含量最低，沒有檢測到丁酸。綜合各項指標，貯藏60 d 紫花苜蓿青貯飼料的營養(yǎng)價值和發(fā)酵品質好于其他3 個貯藏時間。