王林浩 劉兆霞

摘要：本文首先從國際和國內(nèi)兩個角度分別分析了動物試驗(yàn)替代方法在獸用疫苗檢驗(yàn)中的應(yīng)用概況，其次從試驗(yàn)動物替代方法、血清學(xué)替代方法、疫苗抗原定量方法三個角度分析了動物試驗(yàn)替代方法在獸用疫苗檢驗(yàn)中的應(yīng)用方式，旨在為動物試驗(yàn)替代方法在獸用疫苗檢驗(yàn)中的應(yīng)用提供參考意見。

關(guān)鍵詞：動物試驗(yàn);替代方法;獸用疫苗檢驗(yàn);應(yīng)用

中圖分類號：S851.4?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B文章編號：2095-9737（2020）01-0018-02

在獸用疫苗檢驗(yàn)中應(yīng)用動物試驗(yàn)替代方法，目前已經(jīng)成為了疫苗檢驗(yàn)的發(fā)展趨勢，但是動物試驗(yàn)替代方法在我國的應(yīng)用發(fā)展速度較慢，其中最顯著的便是體外抗原測定方法應(yīng)用及檢驗(yàn)產(chǎn)品研制的滯后，這導(dǎo)致部分獸用疫苗檢驗(yàn)應(yīng)用的仍然是傳統(tǒng)檢驗(yàn)方式，由此可見，動物試驗(yàn)替代方法的應(yīng)用還需要進(jìn)一步探索。

1?動物試驗(yàn)替代方法在獸用疫苗檢驗(yàn)中的應(yīng)用概述

1.1?國際應(yīng)用概述

早在1959年，便有英國動物學(xué)家提出了3R原則（減少、替代、優(yōu)化），具體含義如下：減少科學(xué)研究活動的動物應(yīng)用量，尋找能夠替代傳統(tǒng)檢驗(yàn)方式的動物試驗(yàn)替代方法，優(yōu)化動物試驗(yàn)方法來減輕試驗(yàn)動物痛苦。1978年，David Smyth 教授對3R進(jìn)行了進(jìn)一步概括，3R也成為了動物試驗(yàn)替代方法的研究核心和主要內(nèi)容。國際上建立了很多研究機(jī)構(gòu)，用來研究動物試驗(yàn)替代方法，同時投入了大量的資金和技術(shù)，以推動新技術(shù)的開發(fā)和應(yīng)用。此外，很多發(fā)達(dá)國家制定了動物保護(hù)法來對動物試驗(yàn)進(jìn)行約束，世界上第一個涉及到了試驗(yàn)動物保護(hù)條例的法律是英國在1876年頒布的《防止虐待動物法》[1]。

1.2?國內(nèi)應(yīng)用概述

我國關(guān)于動物試驗(yàn)替代方法的研究起步較晚，因此與國際上還存在較大差距，但是這種差距在逐漸縮小。我國第一次將3R納入到法律文件中是1997年，并且將動物試驗(yàn)替代方法作為動物試驗(yàn)研究的重要部分，2001年，科學(xué)技術(shù)部指出，我國的動物福利保障制度與國際接軌，同時實(shí)現(xiàn)對試驗(yàn)動物的法制化管理。2006年，建立了中國替代方法研究評價中心，旨在為我國動物試驗(yàn)替代方法的研究提供平臺。目前，3R在我國已經(jīng)受到了廣泛關(guān)注，同時有很多生命科學(xué)工作人員積極參與到了動物試驗(yàn)替代方法研發(fā)和應(yīng)用中。

2?動物試驗(yàn)替代方法在獸用疫苗檢驗(yàn)中的應(yīng)用方式

2.1?試驗(yàn)動物替代方法

目前，應(yīng)用在獸用疫苗檢驗(yàn)中的小型試驗(yàn)動物，如雞、鼠、兔等，其供應(yīng)量較為充足，實(shí)驗(yàn)人員獲得試驗(yàn)動物的難度較低。但是一些大型試驗(yàn)動物，如豬、馬、牛、羊等，一些特殊動物，如貂、狐等，實(shí)驗(yàn)人員獲得試驗(yàn)動物的難度較高，實(shí)驗(yàn)人員通常需要到散養(yǎng)戶或者是養(yǎng)殖場進(jìn)行篩選，但這樣篩選出來的動物嚴(yán)格意義上不能被稱之為試驗(yàn)動物[2]。再加上國家針對重大動物疫病執(zhí)行強(qiáng)制免疫制度，例如尋找豬藍(lán)耳病抗體獸用疫苗檢驗(yàn)試驗(yàn)動物，這便進(jìn)一步增加了實(shí)驗(yàn)人員獲得試驗(yàn)動物的難度。

為此，實(shí)驗(yàn)人員便開始在獸用疫苗檢驗(yàn)中試驗(yàn)動物替代方法，旨在通過小型動物來替代大型動物和特殊動物，以此來降低試驗(yàn)難度和試驗(yàn)成本，同時也是在踐行3R原則中的“減少”標(biāo)準(zhǔn)。例如，在豬瘟兔化弱毒獸用疫苗檢驗(yàn)中，可以以兔為試驗(yàn)動物，通過兔體定型熱方式來代替陰性豬，這樣不但能夠減輕檢驗(yàn)難度，提高檢驗(yàn)效率，還能夠減少病毒污染。在豬圓環(huán)病毒2型滅活苗檢驗(yàn)中，可以以鼠、兔為試驗(yàn)動物，通過免疫試驗(yàn)方式來代替陰性豬，解決試驗(yàn)動物篩選難的問題。

2.2?血清學(xué)替代方法

在很多滅活苗獸用疫苗檢驗(yàn)中，由于受到滅活加之佐劑的影響，應(yīng)用半數(shù)感染量方法測定抗原滴度的難度較高，為此，很多滅活苗獸用疫苗檢驗(yàn)需要應(yīng)用本動物攻毒法檢驗(yàn)方式。但是這種檢驗(yàn)方式的應(yīng)用不符合3R原則，同時飼養(yǎng)試驗(yàn)動物的難度較大，需要嚴(yán)格處理動物糞便和尸體，以此來預(yù)防病原菌污染。

為此，針對部分滅活苗獸用疫苗檢驗(yàn)工作，應(yīng)用了血清學(xué)替代方法，具體是采集應(yīng)用了疫苗的動物的血清，測定其特異性抗體滴度，將滴度作為疫苗效果的檢驗(yàn)指標(biāo)。血清學(xué)替代方法的應(yīng)用能夠避免病原菌污染，還能夠避免給試驗(yàn)動物帶來痛苦。從疫苗檢驗(yàn)的角度而言，血清學(xué)替代方法的應(yīng)用能夠?qū)崿F(xiàn)對攻毒實(shí)驗(yàn)的定量判斷，能夠更好的評估疫苗檢驗(yàn)效果，而血清易保存的特點(diǎn)還降低了檢驗(yàn)難度。例如，在雞新城疫、減蛋綜合征二聯(lián)滅活疫苗疫苗檢驗(yàn)中，應(yīng)用血清學(xué)替代方法，檢驗(yàn)效果視免疫雞血清中HI抗體效價而定。

2.3?疫苗抗原定量方法

抗原含量是獸用疫苗檢驗(yàn)效果的直接決定因素，目前，體外抗原定量方式在活疫苗檢驗(yàn)中的應(yīng)用已經(jīng)取得了顯著效果，并且已經(jīng)成功取代了免疫攻毒方式，具體的抗原定量方式有：通過培養(yǎng)微量細(xì)胞來觀察細(xì)胞病變，并計算細(xì)胞培養(yǎng)物的半數(shù)組織培養(yǎng)物感染量;通過免疫熒光方式計算半數(shù)感染量，此方式只適用于不致細(xì)胞病變抗原定量;部分病毒會在細(xì)胞單層上留下蝕斑，利用這一特性，可以通過計算蝕斑方式來計算疫苗蝕斑形成數(shù)量;通過計算活菌方式來計算菌落形成數(shù)量，此方式只適用于細(xì)菌活疫苗抗原定量。疫苗抗原定量方法在獸用疫苗檢驗(yàn)中應(yīng)用，能夠最大限度的做到動物試驗(yàn)替代，不但符合3R原則，還能夠節(jié)省檢驗(yàn)成本和時間[3]。

3?結(jié)束語

在獸用疫苗檢驗(yàn)中應(yīng)用動物試驗(yàn)替代方法最關(guān)鍵的便是要建立傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法和替代檢驗(yàn)方法的平行關(guān)系，并且需要在不同批次產(chǎn)品之間來回確認(rèn)，同時應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)理論對兩種檢驗(yàn)方式進(jìn)行相關(guān)性分析，以此來確保兩種檢驗(yàn)方式檢驗(yàn)效果的一致程度，同時建立起動物試驗(yàn)替代方法在獸用疫苗檢驗(yàn)中的應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王曉卉，李翠，蔣卉，等.動物試驗(yàn)替代方法在獸用疫苗檢驗(yàn)中的應(yīng)用概況[J].中國獸藥雜志，2015（04）：60-64.

[2] 農(nóng)業(yè)部.獸用疫苗生產(chǎn)企業(yè)生物安全三級防護(hù)標(biāo)準(zhǔn)[J].江西畜牧獸醫(yī)雜志，2017（05）：39-43.

[3] 陳永僩，倪亞瑋.美國獸用疫苗生產(chǎn)及管理[J].獸醫(yī)藥品通訊，1986（03）：43-44.