TWEAK 基因多態(tài)性與老年急性心肌梗死的關(guān)系研究

呂煒俊 王云鄉(xiāng) 應(yīng)婕

急性心肌梗死（acute myocardial infarction，AMI）是冠狀動(dòng)脈急性、持續(xù)性缺血缺氧的基礎(chǔ)上發(fā)生的，多表現(xiàn)為胸骨后疼痛，可并發(fā)心率失常、休克等，常危及生命[1]。AMI 是多基因疾病，其發(fā)生、發(fā)展與多種易感基因有關(guān)。相關(guān)研究表明，腫瘤壞死因子凋亡微弱誘導(dǎo)劑（tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis，TWEAK）參與了AMI 的病程進(jìn)展，但其機(jī)制仍未闡述清楚[2]。TWEAK 基因序列可改變其轉(zhuǎn)錄活性，從而使蛋白質(zhì)表達(dá)水平受到影響[4]。本研究以126 例老年AMI 作為研究對(duì)象，探討TWEAK 基因多態(tài)性與老年AMI 之間的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取我院2016 年7 月至2018 年3 月收治的，符合《2016 年中國(guó)成人血脂異常防治指南》[3]、《急性心肌梗死診斷和治療指南》[4]等標(biāo)準(zhǔn)的126 例老年AMI患者作為病例組。納入標(biāo)準(zhǔn)：意識(shí)清晰，無(wú)精神病史；無(wú)嚴(yán)重瓣膜病、心房顫動(dòng)等；無(wú)嚴(yán)重凝血功能障礙、肝腎疾??；無(wú)腦梗死、惡性腫瘤者；依從性良好者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重肝腎疾病者；腦梗死者；周?chē)鷦?dòng)脈栓塞者；惡性腫瘤者；嚴(yán)重肝腎疾病者；依從性差者等。并選取同期132 例健康體檢者作為對(duì)照組。兩組受檢者性別、年齡、吸煙史、飲酒史、糖尿病史、高血壓史、平均收縮壓、血小板計(jì)數(shù)、甘油三酯、高密度脂蛋白及總膽固醇的比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；病例組平均舒張壓、心率、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、低密度脂蛋白、空腹血糖及肌鈣蛋白均高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表1。本研究取得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，得到受檢者或其家屬知情同意，并簽署相關(guān)同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 提取外周血白細(xì)胞DNA方法所有受檢者均晨起空腹采集外周靜脈血5ml，低溫儲(chǔ)存于乙二胺四乙酸抗凝管，備用。采用酚-氯仿有機(jī)油提法對(duì)受試者外周血白細(xì)胞DNA 進(jìn)行提取，并低溫保存于TE 緩沖液，備用。

1.2.2 指標(biāo)檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定TWEAK水平；采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCRRFLP）技術(shù)檢測(cè)TWEAK3 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)rs11552708、rs12937543 及rs4968211 的基因型和等位基因；采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血糖、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、總膽固醇等水平。操作步驟均嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件。測(cè)得計(jì)量資料以表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法。采用Haploview4.2軟件進(jìn)行Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)；基因頻率及基因型頻率分布采用優(yōu)勢(shì)比（OR）及其95%可信區(qū)間（95%CI）表示；采用多因素logistic 回歸分析3 個(gè)位點(diǎn)的基因型頻率分布及等位基因頻率分布在兩組中的差異。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 遺傳平衡檢驗(yàn) Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗(yàn)結(jié)果提示，TWEAK 基因3 個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)rs11552708、rs12937543 及rs4968211 在兩組人群中均符合HWE 平衡（均P＞0.05），適合進(jìn)一步進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

表1 兩組受檢者的基線資料

2.2 TWEAK 各位點(diǎn)基因型頻率分布情況 見(jiàn)表2。

由表2 可見(jiàn)，位點(diǎn)rs12937543 基因型頻率分布在兩組人群中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；rs11552708及rs4968211 兩個(gè)位點(diǎn)基因型頻率分布在兩組人群中的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

2.3 TWEAK 各位點(diǎn)等位基因頻率分布情況 見(jiàn)表3。

由表3 可見(jiàn)，rs11552708 及rs4968211 兩個(gè)位點(diǎn)中A、G 等位基因頻率分布在兩組人群中的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；rs12937543 位點(diǎn)A、T 等位基因頻率分布在兩組人群中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其中，攜帶等位基因T 者患AMI 的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶等位基因A 者的1.74 倍。

2.4 兩組中TWEAK 水平比較 根據(jù)上述位點(diǎn)分析，設(shè)定rs12937543-T 為危險(xiǎn)等位基因。病例組攜帶AT+TT 基因者血清TWEAK 水平高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），兩組攜帶AA 基因者血清TWEAK水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；病例組攜帶T 基因患者血清TWEAK 水平高于非T 基因攜帶患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表2 TWEAK 各位點(diǎn)基因型頻率分布情況[例（%）]

表3 TWEAK 各位點(diǎn)等位基因頻率分布情況[例（%）]

表4 兩組中TWEAK 水平比較（pg/ml）

3 討論

AMI 是在冠狀動(dòng)脈病變的基礎(chǔ)上發(fā)生的一種缺血性心肌壞死[5]。本病病因復(fù)雜，可能與高血壓、糖尿病、生活壓力、體力勞動(dòng)等有關(guān)[6]。近年來(lái)，大量研究發(fā)現(xiàn)TWEAK 參與了冠脈粥樣斑塊慢性炎癥的每個(gè)環(huán)節(jié)[7]。Chorianopoulos 等[8]研究發(fā)現(xiàn)，sTWEAK 在ST 段抬高型AMI 患者血清中高表達(dá)，且與患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。然而，也有研究發(fā)現(xiàn)TWEAK mRNA 水平在AMI 患者中存在低表達(dá)情況[9]。此外，許多動(dòng)物研究模型也表明TWEAK 參與了AMI 患者的心肌纖維重構(gòu)[10-11]。目前，關(guān)于TWEAK 參與AMI 的機(jī)制尚不明確。相關(guān)研究表明，基因序列變異能改變其表達(dá)，并導(dǎo)致產(chǎn)生的蛋白質(zhì)功能異常，從而影響疾病的進(jìn)展[12]。為此，推測(cè)TWEAK 基因多態(tài)性可能與AMI 的發(fā)生發(fā)展存在一定關(guān)系。

相關(guān)研究表明，AMI 的發(fā)生發(fā)展與各類炎性因子有關(guān)，其中，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）可促進(jìn)炎癥及血栓的形成[13]。另有研究表明，Th1、Th2 等細(xì)胞因子的基因多態(tài)性與AMI 的進(jìn)展存在一定相關(guān)性[14]。TNF-α 啟動(dòng)子（-308）的多態(tài)性位點(diǎn)基因參與了ST 段抬高型AMI缺血損傷過(guò)程。表明TNF-α 啟動(dòng)子的多態(tài)性位點(diǎn)與ST段抬高型AMI 的發(fā)生、發(fā)展明顯相關(guān)。另外，TNF-α 啟動(dòng)子（-308）多態(tài)性位點(diǎn)攜帶A 等位基因AA+AG 者，其血清心肌缺血指標(biāo)存在高表達(dá)現(xiàn)象，且AA 者與不穩(wěn)定心絞痛有關(guān)。Listi 等[15]研究發(fā)現(xiàn)，連接蛋白37（Cx37）的多態(tài)性位點(diǎn)與AMI 的發(fā)生相關(guān)。另有研究表明，AMI 患者的Cx37（C1019）多態(tài)性位點(diǎn)的T 等位基因頻率分布高于正常對(duì)照組[16]。本研究與上述研究結(jié)果相類似，發(fā)現(xiàn)兩組TWEAK 多態(tài)性位點(diǎn)rs12937543 基因型頻率分布存在差異。另外，兩組rs12937543 中A、T 等位基因頻率分布存在差異，且攜帶等位基因T 患AMI 的風(fēng)險(xiǎn)較等位基因A 高1.74 倍。表明TWEAK 多態(tài)性位點(diǎn)rs12937543與AMI 的發(fā)生有關(guān)，且攜帶等位基因T 患者發(fā)生AMI的風(fēng)險(xiǎn)較高。另外，本研究發(fā)現(xiàn)，病例組攜帶AT+TT 基因者血清TWEAK 水平均高于對(duì)照組，且病例組間攜帶T 基因患者血清TWEAK 水平高于非T 基因攜帶患者，但兩組攜帶AA 基因者血清TWEAK 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明TWEAK 在AMI 患者中高表達(dá)，且攜帶T基因患者TWEAK 水平較高。本研究提示，TWEAK 多態(tài)性位點(diǎn)與AMI 有關(guān)，TWEAK 基因多態(tài)性可能參與了老年AMI 的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，但具體機(jī)制仍需要深入研究。綜上所述，TWEAK 基因多態(tài)位點(diǎn)rs12937543 與老年AMI 患者有關(guān)，可能參與了老年AMI 的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。但本研究收集的樣本量較小，存在一定局限，下一步筆者將繼續(xù)收集樣本，增加研究中心，擴(kuò)大研究范圍，進(jìn)行驗(yàn)證性探討，以期進(jìn)一步闡釋TWEAK 基因參與AMI的機(jī)制。