佐劑在牛病疫苗中的應(yīng)用進(jìn)展

趙培杰 李文康 譚旭宸 劉镕奇 鄧立新 王新衛(wèi)

河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州450002

佐劑（adjuvant）是指能增強抗原物質(zhì)的免疫應(yīng)答的物質(zhì)，在一些疫苗中發(fā)揮輔助或者輔佐作用。佐劑的出現(xiàn)，是因為許多疫苗不能刺激機(jī)體產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，有時需要將抗原物質(zhì)與一類大分子共同使用，以增強免疫反應(yīng)[1]。目前，隨著生物技術(shù)的進(jìn)展，新疫苗研發(fā)產(chǎn)生了基因工程亞單位疫苗、多肽疫苗、DNA 等疫苗，伴隨這些新型疫苗，免疫佐劑逐漸成為眾多研究者的焦點，其在實際生產(chǎn)中的應(yīng)用也更為廣泛[2]。免疫佐劑在新型疫苗中也起到了增強這些疫苗免疫反應(yīng)的作用，彌補了該類疫苗抗原性不足的問題。但目前也存在因缺乏相匹配的合適佐劑而影響到諸多重組蛋白、多肽等疫苗開發(fā)和研制。所以通過疫苗免疫途徑來達(dá)到疾控的目的時，相關(guān)的免疫佐劑的研發(fā)也顯得至關(guān)重要。佐劑的開發(fā)在人和動物疫苗研制中報道的很多，而本文將佐劑在牛病疫苗研發(fā)中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 疫苗佐劑類別

1.1 傳統(tǒng)的顆粒性佐劑

1）鋁鹽佐劑。常見的鋁鹽佐劑有氫氧化鋁膠、明礬、磷酸三鈣等，這些佐劑容易制備、價格相對低廉，其安全性好而被廣泛用于生產(chǎn)動物或者人類疫苗。但鋁鹽佐劑也有自己的缺點，如因其不能進(jìn)行干凍保存，貯存與運輸成為生產(chǎn)中的一大難題[3]，另外鋁佐劑會在接種部位形成結(jié)節(jié)，包括無菌性膿腫、紅斑、皮下結(jié)節(jié)、肉芽腫炎癥與接觸性超敏反應(yīng)。鋁積聚還被認(rèn)為與老年癡呆癥的發(fā)生有密切關(guān)系[4]。此外鋁鹽佐劑主要激活對象為Th2 免疫細(xì)胞以誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答，對誘導(dǎo)細(xì)胞介導(dǎo)免疫無明顯作用。因此其適用于制造以體液免疫為主的疫苗，如用于人類的很多疫苗（白喉、破傷風(fēng)等疫苗），用于牛出敗、口蹄疫滅活疫苗等疫苗。

2）油乳佐劑。當(dāng)前，在畜牧生產(chǎn)中最常用的油佐劑當(dāng)屬弗氏佐劑，弗氏佐劑包括完全弗氏佐劑與不完全弗氏佐劑。不完全弗氏佐劑是指將油（石蠟油或礦物油）與乳化劑混合，形成W/O 型乳化劑，其中白油應(yīng)用的最為廣泛。完全弗氏佐劑是在制作好不完全弗氏佐劑后，添加失活的分枝桿菌而制備得來的。完全弗氏佐劑與不完全弗氏佐劑都能誘導(dǎo)高滴度的抗體產(chǎn)生，完全弗氏佐劑除了能提高體液免疫，還可以增強細(xì)胞免疫。但是，弗氏佐劑在具體生產(chǎn)應(yīng)用中，常造成注射部位組織損傷出現(xiàn)長期炎癥反應(yīng)，且不容易被吸收。

盡管如此，礦物油佐劑得到了廣泛應(yīng)用。水包油（O/W）、油包水（W/O）、水包油包水（W/O/W）等油佐劑已經(jīng)商品化并用于動物生產(chǎn)實踐。O/W 型的油佐劑其乳狀液的安全性相對較高，但因其易擴(kuò)散而導(dǎo)致實際的免疫增強活性降低；W/O 型油佐劑的乳狀液能在免疫組織貯存較長時間，能長期刺激動物機(jī)體起到免疫增強作用，其佐劑活性相對較高，但是因其可引起局部組織炎性而存在相對的安全隱患；W/O/W 型油佐劑的乳狀液在動物機(jī)體的貯存時間久而且其活性介于O/W 型和W/O 型之間，缺點是其穩(wěn)定性相對較差，某些情況下可能轉(zhuǎn)變?yōu)閃/O型。目前，研究者們關(guān)注的焦點是安全性和佐劑活性都比較好的新型油佐劑。實際上水包油（O/W）型佐劑因為出色的安全性受到人們的青睞，歐盟和美國已經(jīng)批準(zhǔn)了MF59 和AS03 兩種O/W 型佐劑應(yīng)用于人用疫苗。在牛類疫苗中，還沒有發(fā)現(xiàn)該類佐劑商品化的使用。

1.2 新型非顆粒性佐劑

1）細(xì)胞因子免疫佐劑。細(xì)胞因子是動物機(jī)體的一些免疫細(xì)胞或某些非免疫細(xì)胞在受到抗原刺激后而分泌的一類小分子蛋白，其具有良好的生物學(xué)活性。細(xì)胞因子作為佐劑使用時，細(xì)胞因子可以和特異性受體結(jié)合，從而加強機(jī)體內(nèi)細(xì)胞和體液免疫功能。例如，李世芳等[5]的研究顯示，IL-2 能誘導(dǎo)Th2 型細(xì)胞的免疫應(yīng)答并使之向Th1 型轉(zhuǎn)變，同時上調(diào)CD80、CD83、CD84 等細(xì)胞蛋白因子的表達(dá)，誘導(dǎo)更多的IL-12 和INF-α 的表達(dá)。Zhang[6]的研究發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合使用GM-CFS 與IL-12 作為口蹄疫病毒VP1 重組蛋白的佐劑，可刺激機(jī)體產(chǎn)生良好的體液與細(xì)胞免疫。

目前，據(jù)研究報道顯示，一些細(xì)胞因子，如干擾素（IFN-α、IFN-β、INF-γ），淋巴因子（IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-10 等），單核因子（IL-1、IL-6、IL-8、IL-12等）及TNF、GM-CSF 等均具有免疫佐劑效應(yīng)。

2）天然來源佐劑。目前，研究者也關(guān)注到植物提取物具有毒性較小、容易代謝等生物學(xué)特點，不斷從天然植物中提取能做為免疫佐劑的活性物質(zhì)并加以研究。其中，主要代表為蜂膠佐劑、皂苷和QuilA 等。蜂膠是由蜜蜂工蜂采植物芽孢或樹干樹脂并與自身消化腺和蜂蠟腺分泌物混合產(chǎn)生的一種膠狀固體物質(zhì)。蜂膠具有多種免疫增強的作用，可輔佐疫苗激活補體功能與免疫系統(tǒng)，增強機(jī)體免疫效應(yīng)，提高機(jī)體免疫力[7]。目前，對蜂膠佐劑研究和應(yīng)用最為廣泛的是中國，其次是巴西、古巴、保加利亞、俄羅斯、埃及等國家[8]。曾群輝等[9]在牦牛ETEC 滅活疫苗的研制和免疫效力中比較了氫氧化鋁膠、油佐劑、蜂膠3 種不同佐劑腸毒素性大腸桿菌病滅活苗的免疫效果，發(fā)現(xiàn)在分別免疫接種家兔7 d 后，測得蜂膠苗產(chǎn)生的抗體效價最高，但3 種佐劑滅活苗均能有效保護(hù)家兔免于死亡。某些中草藥，其本身就有提高免疫功能的作用，有作為佐劑的潛力，如李瑞麗等[10]的研究發(fā)現(xiàn)，口服一定劑量的白術(shù)能夠提高經(jīng)口蹄疫疫苗免疫的小鼠的體液免疫和細(xì)胞免疫，并上調(diào)Th1/Th2 型免疫應(yīng)答。而杜繼紅等[11]也發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖粉能夠提高奶牛免疫口蹄疫疫苗的免疫效果。這些都提示我們天然來源的免疫活性物質(zhì)具有巨大應(yīng)用空間。但是，天然來源的免疫活性物質(zhì)成分比較復(fù)雜，作用機(jī)理尚不明確，這些在一定程度上限制其作為佐劑的應(yīng)用。

3）CpG ODN 疫苗佐劑。CpG ODN 即非甲基化胞嘧啶和鳥嘌呤二核酸的寡核苷酸序列。CpG ODN 是一種Toll 樣受體9（TLR9）的激活劑，能促進(jìn)Th1 免疫應(yīng)答，同時可以提高疫苗的免疫原性并具有較好的安全性。2017年7月，美國FDA 批準(zhǔn)了HBsAg-1018 疫苗，該疫苗是使用CpG 佐劑的乙肝病毒疫苗。這顯示了CpG 佐劑巨大的應(yīng)用空間。該類佐劑在牛疫苗上的應(yīng)用罕見報道。

2 常見牛病疫苗佐劑

2.1 結(jié)核桿菌病

牛結(jié)核病是一種嚴(yán)重威脅到人類健康和動物生產(chǎn)的主要人獸共患病傳染病，其病原為牛結(jié)核分支桿菌，該菌宿主范圍廣，不但感染牛，也感染人、禽類和野生動物等[12]。目前防控該病的主要手段是檢疫凈化和疫苗防控。

卡介苗（bacillus calmette-guerin vaccine，BCG疫苗）是目前仍被廣泛使用且研究最多的疫苗，為控制人類及牛結(jié)核病做出了巨大貢獻(xiàn)。但其免疫保護(hù)存在的局限性激發(fā)了研究者開發(fā)了新型疫苗的興趣。如重組卡介苗、減毒結(jié)核分枝桿菌疫苗、亞單位疫苗、DNA 疫苗、重組活病毒載體疫苗等[12]，但這些疫苗的免疫原性仍然不足，缺少病原相關(guān)分子識別模式不能被動物機(jī)體的免疫細(xì)胞很好地識別，不足以誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的有效信號，往往需要添加佐劑以增強疫苗的免疫保護(hù)效應(yīng)[13]。

作為佐劑中最為經(jīng)典的——鋁鹽佐劑，在結(jié)核病疫苗開發(fā)中也受到重視。研究表明，鋁鹽佐劑具有激活補體的功能，并且能提高M(jìn)HC-Ⅱ類分子和共刺激分子的表達(dá)，進(jìn)而提高外周單核細(xì)胞IL-4 的mRNA 的轉(zhuǎn)錄水平以及促進(jìn)IL-1、IL-6 和TNF 的表達(dá)。但由于鋁鹽佐劑只要誘導(dǎo)體液免疫，而結(jié)核分枝桿菌主要刺激機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫，這就使得有利用鋁鹽佐劑開發(fā)結(jié)核疫苗的研究。如付麗麗[14]研究顯示，氫氧化鋁佐劑和PolyIC 佐劑的聯(lián)合使用可以誘導(dǎo)小鼠免疫應(yīng)答，2 種佐劑物質(zhì)能協(xié)同增強結(jié)核分枝桿菌抗原Ag85b 和EC 的細(xì)胞免疫反應(yīng)和體液免疫反應(yīng)。但是霍宇娟等[15]指出，鋁鹽佐劑可誘導(dǎo)lgE 介導(dǎo)的超敏反應(yīng)，可引起注射部位的炎癥并刺激局部紅斑，肉芽腫和皮下結(jié)節(jié)。

因鋁鹽佐劑存在不足，新型佐劑的開發(fā)就顯得尤為重要。2005年，Grode 等[16]將李斯特單核細(xì)菌分泌的膜穿孔素（membrane-perforating listeriolysin,Hly）與卡介苗混合使用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這可增強機(jī)體對抗結(jié)核桿菌的能力，將Hly 基因與BCG 整合構(gòu)建的重組BCG（recombinant BCG,rBCG）具有比親本BCG 更具保護(hù)性。2011年，Desel 等[17]證明，重組BCG 除可誘導(dǎo)產(chǎn)生與親本BCG 相同的1 型細(xì)胞因子應(yīng)答外，還可誘導(dǎo)產(chǎn)生17 型細(xì)胞因子應(yīng)答，這對增強機(jī)體抵抗結(jié)核桿菌的能力是非常有意義的。但由于Hly 具有一定的毒副作用，不能廣泛應(yīng)用于臨床，所以若能將其改造成無毒又具有佐劑作用，將具有很廣的應(yīng)用前景[18]。

2.2 牛支原體

支原體（Mycoplasma），舊稱霉形體，是自然界中已知的最小、最簡單的可以進(jìn)行自我復(fù)制的原核微生物[19]。其中有數(shù)百種支原體可感染動物體與人體[20]，有超過20 種可以感染牛，歐洲25%～33%的牛肺炎與牛支原體有關(guān)[21]。牛支原體可長期在牛體內(nèi)存在并引起牛發(fā)生乳腺炎、角膜結(jié)膜炎、肺炎、關(guān)節(jié)炎、泌尿生殖道炎癥等病，影響牛只健康。其中絲狀支原體引起的牛傳染性胸膜肺炎即牛肺疫對牛影響最大。在非洲，該病于2014年被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為對其養(yǎng)殖業(yè)影響最大的動物傳染病。在我國，每年牛支原體感染給牛業(yè)生產(chǎn)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失，甚至影響到牛肉和牛奶制品的銷量[22]。雖然我國消滅了該病，但于2008年在湖北地區(qū)又發(fā)現(xiàn)有牛支原體肺炎感染，此后，我國的貴州、寧夏、內(nèi)蒙古、廣西、重慶、青海、吉林、新疆等地陸續(xù)有該病的報道。因抗生素的治療效果不佳，研制出有效的支原體疫苗成為了免疫防治相關(guān)疾病的關(guān)鍵所在。近年來在相關(guān)疫苗領(lǐng)域的研究主要集中在弱毒苗、滅活苗以及亞單位疫苗3 個方面。

至今，牛肺疫疫苗學(xué)界公認(rèn)最有效的依然是T1/44 弱毒苗，即經(jīng)過雞胚中44 代傳代半弱毒培養(yǎng)弱毒苗。該苗自研發(fā)之日沿用至今已歷時近70年。T1/44 疫苗具有多種缺陷，如免疫周期短，疫苗本身的穩(wěn)定性較差，免疫效價較低[23]以及運輸過程要求全程冷鏈運輸[24]等。

在滅活苗方面佐劑的使用更為重要，早至30年前的包括牛支原體、殊異支原體（Mycoplasma dispar.）、呼吸道合胞體病毒、副流感病毒三型的油乳佐劑乳化的四聯(lián)滅活苗[25]，2008年報道了牛支原體、睡眠嗜血桿菌、化膿隱秘桿菌、多殺性巴氏桿菌A 型、溶血性曼氏桿菌A 型組成的以氫氧化鋁和ISA25 佐劑制備的五聯(lián)滅活疫苗[26]。后來，Dudek 等[27]于2016年配合商業(yè)化佐劑EmulsigenR制備出牛支原體滅活苗，Dudek 等[27]還將皂苷與Emulsigen?制成混合佐劑使用。皂苷(saponin)廣泛分布于陸地高等植物中，許多中草藥如甘草、柴胡、知母、遠(yuǎn)志、人參和桔梗等都含有皂苷[28]，其中人參皂苷被認(rèn)為與癌細(xì)胞的增生和轉(zhuǎn)移的抑制以及抑制癌細(xì)胞功能有關(guān)[29]。Dudek 等[27]通過試驗研究皂苷、Emulsigen 雙佐劑牛支原體疫苗的免疫效應(yīng)。試驗使用波蘭牛支原體菌株（BankIt1801634 Mbovis KP795974）在Eaton 培養(yǎng)基中微震蕩培養(yǎng)，后分別將皂苷和Emulsigen 加入制成佐劑疫苗。在經(jīng)過攻毒后存活的小牛安樂死后的尸檢中，可以明顯觀察到注射皂苷和Emulsigen混合佐劑苗的小牛在上呼吸道的病原菌定殖活動（colonization）被明顯抑制，鼻腔排毒受抑制以及呼吸道組織損傷減少等現(xiàn)象。該實驗證明了皂苷和Emulsigen 雙佐劑牛支原體疫苗可以有效免疫宿主及抑制動物間的傳染。另外單次免疫就可引發(fā)機(jī)體長達(dá)10月之久的體液免疫，并且還可以刺激引發(fā)粘膜免疫[27]。

此外，2015年陳穎鈺[30]將湖北地區(qū)得到的臨床分離株滅活處理后分別于白油佐劑、免疫刺激復(fù)合物（Immunostimulating Complexes,ISCOM） 以及Seppic206R配合使用，在牛體評價其免疫效果。其中免疫刺激復(fù)合物主要成分為酯類儲存液（0.1g 的磷脂和0.1g 的膽固醇溶于20%的Mega-10 中）、滅活菌液以及終濃度為0.1%的QuilA。血清抗體檢測結(jié)果顯示在免疫后第14 天，免疫組的抗體水平出現(xiàn)大幅度升高，且之后一直處于較高水平，3 個免疫組之間無較大差異。通過觀察臨床癥狀以及病理學(xué)觀察可以看出3 組佐劑免疫組相比對照組對牛保護(hù)作用明顯，其中白油組和ISCOM 組觀察到輕微病理變化，免疫保護(hù)率(PE)分別為73%和68%，而Seppic 組幾乎無法觀察到病理變化，免疫保護(hù)率最高，為100%。

2.3 口蹄疫

口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是偶蹄獸的、一種危害很大的、急性傳染性疾病[31]。其病原有多型、易變異、對外界環(huán)境抵抗力強且易感動物品種多[32]，不僅嚴(yán)重威脅人類健康，也嚴(yán)重威脅我國養(yǎng)牛業(yè)的發(fā)展[33]。開發(fā)預(yù)防和控制口蹄疫的疫苗也成為研究的熱點，為此，世界各國進(jìn)行了探索?？紤]到活毒的散毒和毒力返祖現(xiàn)象，以及口蹄疫病毒毒株致弱結(jié)果和致弱時間都不能確定性、變異和亞型多樣性，1964年歐洲口蹄疫防治委員會決定歐洲國家不用弱毒疫苗免疫,停止了弱毒疫苗的研究[34]。而在實際應(yīng)用中，新型基因工程疫苗在臨床保護(hù)效率、誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答能力等方面仍然不如常規(guī)疫苗。因此目前世界上絕大多數(shù)國家和地區(qū)在應(yīng)對口蹄疫（FMD）疫情爆發(fā)時仍然以全病毒滅活疫苗（inactivated whole virus vaccines）為主進(jìn)行免疫預(yù)防或應(yīng)急免疫。Dar 等[35]研究Montanide ISA-201、ISA-206 (SeppicR,法國)以及GAHOL 這3 種油佐劑對FMD 滅活疫苗的免疫增強效應(yīng)，實驗結(jié)果顯示配合Montanide ISA-201 佐劑的FMD 滅活苗對牛體的免疫保護(hù)效應(yīng)和免疫刺激效應(yīng)明顯提高。

研究通過改進(jìn)疫苗佐劑以達(dá)到更有效的免疫保護(hù)作用，以及減少抗原的用量。傳統(tǒng)上常使用礦物油佐劑配合FMD 疫苗使用，包括弗氏不完全佐劑(IFA)[36]以及近年來在亞洲以及美洲國家廣泛用到的Montanide ISA 系列油乳佐劑（SeppicR）。盡管油乳佐劑在刺激細(xì)胞免疫方面效果顯著，但也存在諸如礦物油殘留牲畜體內(nèi)的肉品安全隱患，在注射疫苗部位發(fā)生腫脹壞死等不良反應(yīng)，更有研究表明其對肝臟功能具有影響[37]。研究顯示油乳佐劑中礦物油的分子結(jié)構(gòu)對佐劑效果與安全性有決定性作用。短碳鏈型礦物油效果好但可能激發(fā)局部反應(yīng)，而長碳鏈更加安全但效果稍有下降[38]，尋找碳鏈長度適中的高生物適應(yīng)性（bio-compatible）的礦物油作為油乳劑改良的首要目標(biāo)。Chen 等[39]研發(fā)構(gòu)建的口蹄疫納米油乳佐劑以異丙基豆蔻酸酯作為油相，以PGPR與Tween 80 作為表面活性劑，與ISA-206 相比，這種新型納米油乳佐劑在與口蹄疫病毒與卵抗原兩種抗原制成疫苗時具有在細(xì)胞免疫激活、特異性抗體激活、生物相容性及安全性等各方面的優(yōu)勢，可以作為傳統(tǒng)ISA-206 礦物油基佐劑的替代產(chǎn)品。目前商品化的口蹄疫滅活疫苗多利用ISA 206佐劑，還未見適合的乳化佐劑用于新型的口蹄疫基因工程疫苗制造，而劉斌等[40]研究發(fā)現(xiàn)SA201VG佐劑比ISA 206 油佐劑更適合口蹄疫基因工程疫苗生產(chǎn)。

除傳統(tǒng)油佐劑外，因細(xì)胞因子可使體內(nèi)免疫活性細(xì)胞分化增殖且對機(jī)體沒有明顯毒副作用，并且其對基因工程疫苗具有佐劑作用，研究也表明IL-2、IL-6、IL-18、IFN-γ、GM-CSF 作為分子佐劑均能夠增強疫苗的免疫效果，且能同時提高機(jī)體的體液免疫水平和細(xì)胞免疫水平[41]。此外，脊椎動物DNA中存在一種被稱作CPG 抑制的現(xiàn)象，是脊椎動物免疫系統(tǒng)辨別自身和細(xì)菌DNA 等外源性DNA 并對其產(chǎn)生免疫應(yīng)答的機(jī)制。因此CPG-ODN(Oligodeoxy-nucletides，寡聚脫氧核苷酸）可用作一新型的免疫佐劑，其免疫協(xié)調(diào)增強作用更強，并能同時促進(jìn)體液免疫和細(xì)胞免疫。如孫龍等[42]研究表明CPG 佐劑的參與能更快地刺激機(jī)體的免疫反應(yīng)并產(chǎn)生保護(hù)性抗體，且在低劑量時即可發(fā)生強烈的佐劑效應(yīng)[43]。劉燕瑜等[44]在2010年添加Quil A 作為豬O 型口蹄疫疫苗佐劑，通過提高免疫后VP1 結(jié)構(gòu)蛋白抗體、細(xì)胞因子的水平及T 淋巴細(xì)胞增殖率以提高免疫保護(hù)作用，但目前暫時沒有相關(guān)研究將Quil A 應(yīng)用于?？谔阋咭呙?。近年來，隨著中藥功效的國際認(rèn)可度的不斷提高，解慧梅[45]用常用補氣中藥人參和黃芪的主要有效成分：人參皂甙Rbl 和黃芪多糖為代表，發(fā)現(xiàn)其均能提高小鼠及豬的口蹄疫抗體效價。徐巨[46]實驗用人參皂甙Rbl、黃芪多糖、丹參素、硫酸軟骨素為代表制成復(fù)方佐劑，溶解到口蹄疫疫苗中，證明中藥有效成分作為疫苗佐劑是可行的。此外，將來自同源抗原編碼基因的合成肽作為基因疫苗的免疫刺激佐劑也有著廣闊的研究前景[47]。

3 展 望

佐劑一直以來都是臨床和基礎(chǔ)免疫學(xué)領(lǐng)域研究的熱點，理想中的佐劑應(yīng)該是安全、廣譜、有效，同時還便于生產(chǎn)和使用。盡管這些年我們對于免疫學(xué)的認(rèn)知有了很大的進(jìn)展，但目前使用最為廣泛的佐劑依然為鋁鹽佐劑及其復(fù)合物。過去十幾年在理解先天免疫方面的進(jìn)展，使人們對了解現(xiàn)有佐劑如何發(fā)揮作用以及如何改善這些機(jī)制產(chǎn)生了更廣泛的興趣。這些研究有利于我們對新型佐劑進(jìn)行研發(fā)和應(yīng)用。研發(fā)更為安全、高效、廉價的新型免疫佐劑應(yīng)用于動物疫苗的生產(chǎn)是未來的趨勢，也為新型免疫佐劑用于牛病或者其他動物疫病疫苗的開發(fā)提供了更多的選擇性。

（致謝：在本文寫作中，趙培杰、李文康、譚旭宸具有同樣貢獻(xiàn)。）