武子敬 ，李佳旭 ，胡彥武 ，杜躍中 ，鐘乃順 ，馬雙欣

（1.通化師范學院，通化134002；2.吉林人參研究院，通化134001；3.通化市朝鮮族學校，通化134001）

運動耐力是反映機體疲勞最直接、客觀的指標。大量研究證明，劇烈運動可以促使活性氧的產(chǎn)生，而活性氧可導致機體運動性疲勞及運動損傷。適量的活性自由基承擔著免疫和信號傳遞等重要的生理功能，但過多的自由基則會導致細胞膜上脂類物質的過氧化、細胞膜破壞等一系列問題[1]。所以本論文主要研究松塔多糖是否能通過提高機體抗氧化能力，防止自由基增多，增強小鼠運動機能，來延緩小鼠的疲勞產(chǎn)生，從而提高小鼠運動耐力[2]。

松塔，為松科植物的種子，成熟后內(nèi)有松子。長約6～10cm，寬約3cm。呈棕褐色，具有多層鱗片，鱗片中夾著松子。松塔的主要成分包括萜類、木質素、烯類、醇類、酮類等[3，4]，其中多糖是松塔主要活性成分之一。本文將通過小鼠疲勞轉棒儀實驗及肝糖原含量的測定，對松塔多糖的提高小鼠運動耐力作用進行研究。

1 實驗儀器與材料

1.1 實驗動物

由長春高新醫(yī)學動物實驗研究中心提供的雌性小鼠(合格證號：SCXK(遼)2015-0001)，體重 20～22g。 在恒溫(22±2)℃的條件下；相對濕度(65±4)%。小鼠自由進食和飲水。

1.2 實驗儀器

小鼠灌胃器；疲勞轉棒儀（成都泰盟科技有限公司ZB-200）；電子天平（上海越平科學儀器有限公司）；紫外可見分光光度計 （上海儀電分析儀器有限公司）；水浴鍋（上海博迅實業(yè)有限公司）；移液器；試管；玻璃棒；燒杯。

1.3 實驗試劑

無水乙醇（分析醇）；甲醇（分析醇）；濃硫酸（分析醇）；蒸餾水；雙蒸水；糖原試劑盒(南京建成生物工程研究所20181206)。

2 方法與結果

2.1 提取松塔多糖

取200g的干松塔，每次用10倍的水提取2h，重復進行2次。將2次的提取液過濾并濃縮至200mL。加入4倍的無水乙醇，置于4℃的冰箱中24h，然后抽濾，然后微熱干燥24h，得到粗制松塔多糖。將粗制松塔多糖溶于蒸餾水中，用適量6%H2O2溶液脫色，在50℃的水浴鍋，讓其恒溫反應30min，過濾。濾液放入離心機4500r·min-1中10min，上清液濃縮至適量，干燥后得到精制的松塔多糖[5，6]。

2.2 確定給藥劑量

將小鼠隨機分成4組，每組10只。分別設置空白組進行對照，給予同樣劑量的雙蒸水；然后將松塔多糖配置高、中、低三個劑量組，分別為 2.4mg·kg-1、1.8mg·kg-1、1.2mg·kg-1。

2.3 抗疲勞實驗

連續(xù)給小鼠灌藥7d，第7d末次給藥30min后，設定疲勞轉棒儀轉速16r·min-1，當轉棒勻速運動時，將小鼠放在旋轉棒上，同時遮擋通道落棒感應器，系統(tǒng)發(fā)出提示音，觸發(fā)計時器計時，當任意通道的小鼠落棒時，對應的液晶顯示器上的通道將停止計時。統(tǒng)計各組小鼠在轉棒上的時間，并比較對照組和給藥組小鼠的在疲勞轉棒儀上停留的時間長短，數(shù)據(jù)結果見表2。

2.4 肝糖原的測定

實驗之后注意要將小鼠迅速處死，不可停留過長時間，會影響實驗結果，然后將小鼠的肝臟拿出。用NaCl水溶液沖洗后，表面的水分吸干，稱取一定重量大約75mg[7]。按一定比例加入堿液體積后于試管中水浴加熱20min。注意水分蒸發(fā)等因素，要在試管口扎保鮮膜并打幾個孔。水浴結束之后要注意冷卻。另取一直試管，加入雙蒸水7.2mL，按表1加入試劑制成含量為1%的肝糖原檢測液，沸水浴加熱5min，冷卻后測定吸光度值，注意要在620nm下測定[8]。計算結果，填入表3。

表1 試劑添加量

3 實驗結果

3.1 松塔多糖對小鼠抗疲勞實驗的影響

不同濃度的松塔多糖對延長小鼠在疲勞轉棒儀上的時間有差別。松塔多糖低劑量組在疲勞轉棒儀上的停留時間與空白對照組無顯著差別，而松塔多糖中劑量組和松塔多糖高劑量組小鼠在疲勞轉棒儀上的時間明顯比空白對照組小鼠時間長。由此得出松塔多糖能夠延緩小鼠疲勞產(chǎn)生，增強運動耐力。

3.2 肝糖原含量測定實驗數(shù)據(jù)分析

松塔多糖低劑量的組、中劑量的組和高劑量的組與空白組相比小鼠體內(nèi)的肝糖原含量均有明顯提高。說明三組不同濃度的松塔多糖均能夠增加小鼠體內(nèi)的肝糖原含量。

3.3 實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計結果

實驗數(shù)據(jù)均以X±s表示，應用軟件對其進行方差分析，實驗結果整理見表2。P＜0.05為數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學差異，P＜0.01差異極顯著[9]。通過疲勞轉棒儀實驗可以得出，松塔多糖中劑量組和松塔多糖高劑量組能夠明顯延長疲勞轉棒儀時間，具有抗疲勞的作用。松塔多糖低劑量組、松塔多糖中劑量組、松塔多糖高劑量組的小鼠肝糖原含量與空白對照組相比，都有明顯的提高。說明松塔多糖能夠提高小鼠運動能力，增加運動耐力。

表2 不同劑量的松塔多糖對小鼠耐力實驗的影響 （X±s）

4 討論

糖是肌肉活動時能量的主要來源，機體內(nèi)其儲存形式主要為血糖和糖原，運動后即刻，肝糖原由于在運動過程中作為能源物質被利用，含量均明顯減少[9]。松塔多糖在對運動耐力的作用可能與肝糖原的含量有關，體內(nèi)肝糖原儲備量的高低是衡量機體抗疲勞能力強弱的重要指標[14]。小鼠疲勞轉棒儀的時間也作為反映運動耐力的另一重要指標。

有研究表明，疲勞最主要的表現(xiàn)是運動能力的降低，而肝糖原又是能量的儲備形式，糖原的含量能反映出疲勞發(fā)生的快慢或程度，是評價抗疲勞作用的常用指標，在長時間的運動中，肝糖原會減少，是造成運動疲勞的直接原因[10]。因此，考察運動后機體中肝糖原的含量，能夠間接說明機體運動耐力的強弱。本實驗結果表明，松塔多糖能延長小鼠在疲勞轉棒儀的運動時間，顯著提高了小鼠體內(nèi)肝糖原的含量，延長了糖原的供能時間，增強了小鼠的運動耐力。