張興城，高明海 ，游曉蕾 ，董勇波 ，張維清 ，趙 愛

（1.文山華信三七股份有限公司，文山663099；2.文山學(xué)院文山三七研究院，文山663099）

三七[Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen]為五加科植物，全株可入藥，臨床應(yīng)用廣泛。三七具有止血消炎、對(duì)中樞神經(jīng)抑制、增強(qiáng)免疫力等的功效作用[1]。丹參為唇形科鼠尾草屬多年生草本植物，現(xiàn)代研究認(rèn)為，丹參具有較好的活血化瘀作用，廣泛用于心血管系統(tǒng)疾病，具有改善微循環(huán)、抗菌等作用[2]。本文通過經(jīng)口給予小鼠不同劑量的三七丹參片實(shí)驗(yàn)，研究三七丹參片的增強(qiáng)免疫力功能，為進(jìn)一步開發(fā)產(chǎn)品提供幫助。

1 材料、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)條件

1.1 樣品

由文山華信三七股份有限公司出品 （北京御生堂保健食品有限公司生產(chǎn)），批號(hào)：20170801。送檢樣品為片劑，實(shí)驗(yàn)前將樣品用粉碎機(jī)粉碎，以1%羧甲基纖維素鈉為溶媒配制成不同濃度的樣品液供實(shí)驗(yàn)用。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)用ICR小鼠由選浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK （浙）2014-0001，SPF級(jí)，雄性，體重為18～22g。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK（浙）2014-0008。

1.3 實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件

實(shí)驗(yàn)條件為：室溫20～25℃，相對(duì)濕度40%～70%。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 劑量設(shè)計(jì)

實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組和陰性對(duì)照組（1%羧甲基纖維素鈉）。 低、中、高三個(gè)劑量分別為 0.43、0.86、2060g/kg BW，相當(dāng)于人體推薦攝入量的5、10、30倍。分別取樣品 8.6、17.2、52.0g加1%羧甲基纖維素鈉至 200mL，灌胃給予受試物，灌胃體積為0.1mL/10g BW，對(duì)照組予以等體積的溶劑，每天灌胃一次，連續(xù)一個(gè)月。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 ConA誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（MTT法）

2.2.2 綿羊紅細(xì)胞（SRBC）誘導(dǎo)小鼠DTH實(shí)驗(yàn)（足跖增厚法）

2.2.3 抗體生成細(xì)胞檢測（Jerne改良玻片法）

2.2.4 小鼠血清溶血素測定（血凝法）

2.2.5 小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)

2.2.6 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（滴片法）

2.2.7 NK細(xì)胞活性測定（LDH測定法）

2.2.8臟器/體重比值

2.3 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件分析。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 受試物對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力的影響，結(jié)果見表1。原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求 （P＞0.05）。各劑量組ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增值能力實(shí)驗(yàn)光密度差值與陰性對(duì)照組比較，差異均無顯著意義（P＞0.05）。

表1 受試物對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠淋巴細(xì)胞增值能力的影響（x±s）

3.2 受試物對(duì)綿羊紅細(xì)胞（SRBC）誘導(dǎo)小鼠DTH的影響，結(jié)果見表2。原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求（P＞0.05）。各劑量組小鼠左足后跖部24h和0h厚度差值與陰性對(duì)照組比較，差異均無顯著性意義（P＞0.05）。

表2 受試物對(duì)綿羊紅細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠DTH的影響（x±s）

3.3 受試物對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響，結(jié)果見表3。原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求（P＞0.05）。各劑量組溶血空斑數(shù)與陰性對(duì)照組比較，差異均無顯著性意義（P＞0.05）。

表3 受試物對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞的影響（x±s）

3.4 受試物對(duì)小鼠血清溶血素影響，結(jié)果見表4。原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求（P＞0.05）。與陰性對(duì)照組比較，三個(gè)劑量組小鼠血清溶血素抗體積數(shù)值均升高，差異均有顯著性意義（P＞0.01）

表4 受試物對(duì)小鼠血清溶血素的影響（x±s）

3.5 受試物對(duì)小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)吞噬指數(shù)的影響，結(jié)果見表5。原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求（P＞0.05）。各劑量組小鼠的吞噬指數(shù)與陰性對(duì)照組比較，差異均無顯著性意義（P＞0.05）。

表5 受試物對(duì)小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)吞噬指數(shù)的影響（x±s）

3.6 受試物對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的影響，結(jié)果見表6。吞噬百分率通過X=Sin-1P1/2進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)符合方差齊性要求（P＞0.05），吞噬指數(shù)的原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求（P＞0.05），與陰性對(duì)照組比較，中、高劑量小組腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率、吞噬指數(shù)均升高，差異均有顯著性意義（P＞0.05，P＞0.01）

表6 受試物對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的影響（x±s）

3.7 受試物對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響，結(jié)果見表7.NK細(xì)胞活性X=Sin-1P1/2進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)符合方差齊性的要求（P＞0.05）。劑量組小鼠NK細(xì)胞活性與陰性對(duì)照組比較，差異均無顯著性意義（P＞0.05）。

表7 受試物對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響（x±s）

3.8 受試物對(duì)小鼠臟器/體重比值的影響，結(jié)果見表8。原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求（P＞0.05）。與陰性對(duì)照組比較，三個(gè)劑量組小鼠胸腺/體重比值及脾臟/體重比值的差異均無顯著性意義（P＞0.05）。

表8 受試物對(duì)小鼠臟器/體重比值的影響（x±s）

3.9 受試物對(duì)小鼠體重的影響，結(jié)果見表9a-9e。為ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)和NK細(xì)胞活性測定實(shí)驗(yàn)小鼠體重；表9b為綿羊紅細(xì)胞（SRBC）誘導(dǎo)小鼠DTH、小鼠血清溶血素測定、抗體生成細(xì)胞檢測小鼠體重；表9c為小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)小鼠體重；表9d為小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)小鼠體重，表9e為臟器/體重比值測定小鼠體重。實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)符合方差齊性要求（P＞0.05），三劑量組小鼠體重在實(shí)驗(yàn)的初期、中期及終期分別與陰性對(duì)照組比較，差異均無顯著性意義（P＞0.05）。

表9 a受試物對(duì)小鼠體重的影響（x±s）

表9 b受試物對(duì)小鼠體重的影響（x±s）

表9 c受試物對(duì)小鼠體重的影響（x±s）

表9 e受試物對(duì)小鼠體重的影響（x±s）

4 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與陰性對(duì)照組比較，三個(gè)劑量組對(duì)小鼠血清溶血素抗體積數(shù)值均升高；中、高劑量組小鼠小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的吞噬率、吞噬指數(shù)均升高；以上差異均有顯著性意義（P＞0.05，P＞0.01）。三七丹參片具有增強(qiáng)免疫力功能。