羅遠(yuǎn)純 張 磊

（遵義市產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測院 貴州遵義 563000）

1 前言

氯雷他定在生物藥劑學(xué)（BCS）分類中屬于Ⅱ類弱堿性藥物，其溶解度低、滲透性高，它在體內(nèi)溶出是吸收的限速步驟。如果建立體內(nèi)外相關(guān)性，可以通過測定體外溶出度來反映藥物在體內(nèi)生物利用度的大致情況，體外溶出度實(shí)驗(yàn)是評價(jià)口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要方法。在溶出度的考察中，現(xiàn)行《中國藥典》2015版以鹽酸溶液（9→1 000）500 mL 為溶出介質(zhì)[1]，但由于氯雷他定是水不溶性物質(zhì)，且在25℃下氯雷他定的電離常數(shù)為4.85～6.00，同時(shí)也是弱堿性藥物，其溶解特性為：在強(qiáng)酸溶液中溶解，而在弱酸溶液或水中幾乎不溶，在較低的pH環(huán)境下，如0.1 mol/L的鹽酸中易溶，但形成質(zhì)子化的含氮堿，透膜能力反而下降，影響體內(nèi)吸收[2]。鹽酸的酸性較強(qiáng)，能使弱堿性的氯雷他定較好地溶出，但這種以鹽酸為介質(zhì)的測定方法不能真實(shí)體現(xiàn)出與體內(nèi)溶出相似的條件，同時(shí)也無法區(qū)別仿制藥與原研藥的溶出度差異。因此，對于藥物的溶出度檢查，除了《中國藥典》2015版的方法之外，有必要進(jìn)一步研究。在以往對氯雷他定片劑溶出度的研究中，崔飆等[3]、李蓉等[4]均采用紫外分光光度法測定氯雷他定片的含量，該方法簡便快捷，精密度和穩(wěn)定性良好，準(zhǔn)確度高，應(yīng)用較為廣泛。劉屹等[5，6]則用不同pH的溶劑作為溶出介質(zhì)，進(jìn)行溶出度的考查。因此，本文試圖尋找一種更為合理的溶出介質(zhì)用于紫外分光光度計(jì)法測定氯雷他定片劑的體外溶出度，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。再利用所建立的方法用于不同廠家氯雷他定制劑的溶出度測定，并與現(xiàn)行《中國藥典》方法進(jìn)行比較。

2 儀器、試劑及樣品

2.1 儀器

賽多利斯電子天平（BSA224S）；梅特勒—托利多電子分析天平（AB265—S）；智能藥物溶出儀（D—800 LS）（天津天大天發(fā)科技有限公司）；KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；紫外分光光度計(jì)（島津UV-2700）。

2.2 試劑及樣品

鹽酸；一水合檸檬酸；磷酸氫二鈉；氯雷他定片（10 mg）。

3 方法與結(jié)果

3.1 溶出介質(zhì)的配制

（1）pH 1.0 的鹽酸溶液：根據(jù)《中國藥典》（ChP）2015版，以鹽酸（9→1 000）配制成pH 1.0的濃度為0.1 mol/L的鹽酸溶液，經(jīng)0.45 nm濾膜過濾備用。

（2）pH 3.0磷酸鹽緩沖溶液：精密稱取0.485 9 g磷酸氫二鈉、3.861 1 g一水合檸檬酸，加水稀釋至5 000 mL，充分?jǐn)嚢枋怪旌暇鶆?，用磷酸或氫氧化鈉試液調(diào)節(jié)至溶液pH為3.0±0.05，經(jīng)0.45 nm濾膜過濾備用。

3.2 專屬性實(shí)驗(yàn)

精密稱取氯雷他定對照品10.12 mg于10 mL容量瓶中，用鹽酸（9→1 000）溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，得氯雷他定儲備液。精密量取儲備液1 mL到50 mL量瓶中，用鹽酸（9→1 000）溶液稀釋至刻度，搖勻，得氯雷他定對照品溶液1。另精密稱取處方比例的輔料，用同一稀釋劑制成空白輔料溶液，經(jīng)0.45 nm濾膜過濾，取續(xù)濾液，待測。以0.1 mol/L的鹽酸溶液為空白對照，照《中國藥典》（ChP）2015版四部通則0401紫外分光光度法，在200～400 nm波長范圍內(nèi)掃描，記錄紫外吸收光譜曲線（圖1）。根據(jù)掃描的結(jié)果可知，氯雷他定在273.4 nm處有最大吸收，輔料在276 nm附近基本無吸收，說明不干擾本品的溶出度測定。另精密稱取氯雷他定對照品10.33 mg，以pH 3.0磷酸鹽緩沖液為溶劑，同法掃描，結(jié)果表明氯雷他定在277.6 nm波長處有最大吸收（圖2），因此，測定波長仍設(shè)定為（276±3）nm。

3.3 線性關(guān)系考察（標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備）

精密量取儲備液1 mL到50 mL容量瓶中，用pH 3.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋至刻度，搖勻，得氯雷他定對照品溶液2。分別精密量取對照品溶液1、2各1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL 分置 10 個(gè) 10mL EP管中，并分別用0.1 mol/L鹽酸溶液和pH 3.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋至5 mL，搖勻，即得2個(gè)系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照《中國藥典》（ChP）2015版四部通則0401紫外-可見分光光度法于276 nm波長測定各溶液吸光度。以對照溶液的濃度（X）為橫坐標(biāo)，吸光度（Y）為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線，分別得以pH 1.0鹽酸為溶劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3），回歸方程為y=0.0233x+0.028，R2=0.999 8（n=5）；以pH 3.0磷酸鹽緩沖液為溶劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖 4），回歸方程為 y=0.021 5x-0.011，R2=0.999 1（n=5）。結(jié)果表明，氯雷他定在質(zhì)量濃度為4.05～20.24（4.13～20.66） μg/mL 時(shí)，與吸光度線性關(guān)系良好。

圖1 光譜掃描圖（介質(zhì)鹽酸）

圖2 光譜掃描圖（介質(zhì)緩沖液）

3.4 溶出度測定

選取3個(gè)不同廠家生產(chǎn)的氯雷他定片，照《中國藥典》（ChP）2015版四部通則 0931：溶出度與釋放度測定法第二法，即轉(zhuǎn)速為50 r/min，分別用2種溶出介質(zhì)測定溶出度（鹽酸為吸光度1和溶出度1，緩沖液為吸光度 2和溶出度 2）。 分別于 5、15、30、45、60 min時(shí)取溶液5 mL經(jīng)0.45 nm濾膜過濾，用續(xù)濾液作為供試品溶液，同時(shí)向溶出杯中補(bǔ)充5 mL介質(zhì)。依法在上述測定的最大吸收波長處測定吸光度，帶入回歸方程計(jì)算其不同時(shí)間點(diǎn)下的濃度及溶出度（表 1）。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線1

圖4 標(biāo)準(zhǔn)曲線2

表1 不同時(shí)間濃度與溶出度

4 討論

本文根據(jù)建立的紫外-可見分光光度法測定氯雷他定片體外溶出度的方法，進(jìn)行方法學(xué)考察驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分證明了本法用于測定氯雷他定片體外溶出度的可行性和準(zhǔn)確性。且用于不同廠家氯雷他定片溶出度測定結(jié)果表明，以鹽酸（9→1 000）溶液為溶出介質(zhì)時(shí)，各廠家氯雷他定片劑的溶出過程略有差異，但溶出曲線基本相同，3個(gè)廠家的制劑均符合要求，但這種介質(zhì)的區(qū)分力不大，無法更加突出地表明各廠家制劑的溶出差異；以pH 3.0磷酸鹽緩沖液為溶出介質(zhì)時(shí)，各溶出曲線相似性較差，體外溶出行為有較大的差異，可能會導(dǎo)致生物利用度的差異。氯雷他定是弱堿性藥物，在pH 1.0鹽酸溶液中溶解度大于在pH3.0磷酸鹽緩沖液中的溶解度，但是pH3.0磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)其區(qū)分力優(yōu)于pH 1.0鹽酸溶液。為了更好地根據(jù)體外溶出實(shí)驗(yàn)反映體內(nèi)溶出行為，建議采用能夠建立起體內(nèi)外相關(guān)性較強(qiáng)的具有區(qū)分力的溶出介質(zhì)進(jìn)行溶出度實(shí)驗(yàn)。