復(fù)合膜固定化酶提高米糠穩(wěn)定性

于殿宇，陳書曼，王 彤，李 丹，張 雪，吳 楠，唐洪琳，秦蘭霞,，姚 凱

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；2.湖北天星糧油股份有限公司，湖北 隨州 441300）

米糠是稻谷加工中主要副產(chǎn)物，含有稻谷中大部分的生理活性成分[1-3]。但目前我國(guó)對(duì)米糠的利用率只有20%左右，大部分用作動(dòng)物飼料或者廢物丟棄，造成嚴(yán)重的資源浪費(fèi)[4-5]。米糠本身化學(xué)性質(zhì)極不穩(wěn)定，碾米后米糠中的脂肪酶與油脂接觸，脂肪被水解生成游離脂肪酸，進(jìn)而在過氧化物酶、光、熱等因素的共同作用下發(fā)生脂肪氧化酸敗，使米糠酸敗變質(zhì)[6-9]，難以長(zhǎng)期貯存。

目前國(guó)內(nèi)外穩(wěn)定米糠的方法有很多，但熱穩(wěn)定米糠會(huì)使部分米糠蛋白質(zhì)變性，抗氧化劑含量降低等問題[10-11]。 化學(xué)法穩(wěn)定米糠所需的化學(xué)試劑用量過多，不僅會(huì)造成米糠體系pH值過低，還可能存在化學(xué)殘留等問題[12-13]。酶法穩(wěn)定米糠是將蛋白酶與米糠和水混合，在一定溫度下維持一段時(shí)間以使脂肪酶失活的方法[14]。相比其他方法，酶法穩(wěn)定米糠不僅作用條件溫和，還能減少米糠成分變化和抗氧化劑化合物的損失。Laokuldilok等[15]選用 5 種蛋白酶對(duì)米糠進(jìn)行穩(wěn)定化處理，以處理前后米糠脂肪酶活力為指標(biāo)，結(jié)果表明木瓜蛋白酶是穩(wěn)定米糠的最佳處理酶。

木瓜蛋白酶對(duì)蛋白質(zhì)的水解具有較好的催化活性[16-18]， 但以游離酶的形式作用米糠，會(huì)存在易變性失活、反應(yīng)條件不易控制等缺點(diǎn)，而將其進(jìn)行固定化，不僅利于酶的分散和回收、增加循環(huán)使用次數(shù)還可提高穩(wěn)定性[19]。利用醋酸纖維素（cellolose acetate，CA）和聚四氟乙烯膜（polytetrafluoroethylene，PTFE）制成的CA-PTFE復(fù)合膜具有吸附性、化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械性能優(yōu)異等特點(diǎn)[20-22]，以此為載體固定化木瓜蛋白酶，不僅能使蛋白酶與底物快速分離，提高酶的重復(fù)利用率，降低生產(chǎn)成本，也實(shí)現(xiàn)了酶的催化功能和膜的分離、載體功能的有機(jī)結(jié)合。

本實(shí)驗(yàn)利用CA修飾PTFE制備了CA-PTFE復(fù)合膜，再以CA-PTFE復(fù)合膜為載體通過吸附交聯(lián)法固定化木瓜蛋白酶，以復(fù)合膜固定化酶對(duì)米糠進(jìn)行鈍化處理，探究酶膜鈍化米糠效果及工藝條件，考察酶膜的重復(fù)使用次數(shù)對(duì)酶活力的影響，研究鈍化后米糠的貯存穩(wěn)定性，為工業(yè)化連續(xù)生產(chǎn)提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

新鮮米糠（水分13.6%） 湖北天星糧油股份有限公司；醋酸纖維素、木瓜蛋白酶（300 U/mg） 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；聚四氟乙烯微孔膜（平均孔徑0.1 μm） 海寧市益博過濾器材廠；其他有機(jī)溶劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

DF-集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 上海耀特儀器設(shè)備有限公司；DK-2000-恒溫水浴鍋 天津市泰斯特儀器有限公司；LD4-2離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠； SM-03B型電子霧化加濕器 江蘇濕美電氣制造有限公司； S-3400N型高分辨場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡 日本日立公司；UV9000紫外-可見分光光度計(jì) 上海元都有限公司；JY10002型號(hào)電子分析天平 上海精密儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 復(fù)合膜的制備

將15.0 g醋酸纖維素60 ℃溶于85.0 g二甲基酰胺中得到鑄膜液。將PTFE膜先用0.1 mol/L的NaOH溶液和0.1 mol/L的HCl溶液清洗，再用去離子水清洗，真空干燥后平鋪在潔凈的玻璃板上?？刂坪穸?，將醋酸纖維素鑄膜液用刮刀均勻涂在PTFE表面，在室溫下?lián)]發(fā)適當(dāng)?shù)臅r(shí)間完成干相轉(zhuǎn)換后，浸入去離子水完成濕相轉(zhuǎn)換。12 h后用去離子水清洗，自然干燥待用。

1.3.2 木瓜蛋白酶的固定化

采用吸附-交聯(lián)相結(jié)合的固定化方法，將7.5 g木瓜蛋白酶溶解于55 ℃、500 mL、pH 6的磷酸鹽緩沖溶液中配制成酶液，將CA-PTFE復(fù)合膜浸潤(rùn)在酶液中，恒溫?cái)嚢栉? h后，加入2.5 mL戊二醛進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)3 h，反應(yīng)結(jié)束后用去離子水沖洗酶膜，放于干燥處待其風(fēng)干后測(cè)定酶活力。

1.3.3 固定化酶膜載酶量的測(cè)定

用單位面積的酶膜所固定的酶蛋白含量表示載酶量，采用Bradford[23]方法測(cè)定固定化前后的木瓜蛋白酶的酶液含量，同時(shí)測(cè)定清洗液中的酶蛋白含量，同一條件下平行重復(fù)實(shí)驗(yàn)3 次，取平均值，實(shí)驗(yàn)誤差在5%以下。根據(jù)式（1）計(jì)算載酶量：

式中：C0為固定化前酶溶液蛋白質(zhì)量濃度/（mg/mL）； C為固定化后溶液中蛋白質(zhì)量濃度/（mg/mL）；Cw為清洗溶液蛋白質(zhì)量濃度/（mg/mL）；V為固定化所用酶溶液體積/mL；Vw為清洗溶液體積/mL；W為浸入酶溶液中膜的面積/cm2。

1.3.4 固定化酶膜酶活力的測(cè)定

固定化酶活力用酶活力單位表示，測(cè)定固定化酶活力時(shí)，每次固定化酶膜兩份，其中一份做空白實(shí)驗(yàn)，另一份加入樣品瓶中，參照游離酶活力測(cè)定[24]過程。將初始酶膜的酶活力記為100%，其余酶活力與其對(duì)比，即相對(duì)酶活力，如式（2）：

式中：A為初始固定化酶膜酶活力/（U/cm2）；B為使用后固定化酶膜酶活力/（U/cm2）。

1.3.5 米糠中脂肪酶活力測(cè)定

參照Laokuldilok等[15]的對(duì)硝基苯酚月桂酸法并加以修改。溶液A：0.2 g PNPL溶解在30.0 mL異丙酮中；溶液B：6.0 g TritonX-100+3.0 g阿拉伯膠溶解在500 mL磷酸鹽緩沖液中。稱取0.5 g米糠分別加入0.2 mL溶液A和10 mL溶液B，振蕩混勻，35 ℃反應(yīng)30.0 min，沸水滅酶5.0 min后快速冷卻至室溫，混合液以4 000 r/min離心10 min，上清液即為米糠脂肪酶提取液。取上清液于410 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算對(duì)硝基苯酚濃度，根據(jù)取樣量計(jì)算脂肪酶活力，以相同條件下未經(jīng)酶解的米糠脂肪酶活力為基準(zhǔn)計(jì)算處理后米糠脂肪酶的相對(duì)活力。

1.3.6 掃描電鏡

將聚四氟乙烯膜、醋酸纖維素-聚四氟乙烯復(fù)合膜和醋酸纖維素-聚四氟乙烯復(fù)合膜固定的木瓜蛋白酶進(jìn)行電鏡掃描，觀察其形貌變化情況。

1.3.7 復(fù)合膜固定化酶鈍化米糠中脂肪酶的方法

在400 mm×400 mm×400 mm玻璃板制作的具有排風(fēng)的密封室內(nèi)，支撐一塊300 mm×300 mm帶有溫控的電熱板，電熱板上放置一張不銹鋼網(wǎng)架，網(wǎng)架與電熱板溫度誤差為2 ℃，在網(wǎng)架上鋪一層酶膜，將厚度大約5 mm的米糠平鋪在酶膜上，米糠上再蓋一層酶膜。調(diào)節(jié)電熱板至一定溫度，為防止物料吸濕，使用電子霧化器調(diào)節(jié)密封室內(nèi)空氣的相對(duì)濕度，期間每隔10 min將米糠攪拌并翻置1 次，一定鈍化時(shí)間后，取樣于50 ℃真空干燥至含水量10.0%以下，測(cè)定米糠的脂肪酶活力并計(jì)算相對(duì)酶活力。

1.3.8 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

研究在固定化酶鈍化米糠脂肪酶工藝參數(shù)的優(yōu)化，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇空氣相對(duì)濕度、鈍化溫度和鈍化時(shí)間3 個(gè)因素對(duì)相對(duì)脂肪酶活力進(jìn)行單因素試驗(yàn)。選擇優(yōu)化酶解鈍化工藝，單因素固定條件分別為空氣相對(duì)濕度80%、溫度70 ℃、時(shí)間100 min。研究空氣相對(duì)濕度分別為50%、60%、70%、80%、90%時(shí)對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響；研究鈍化溫度分別為50、60、70、80、90 ℃時(shí)對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響；研究鈍化時(shí)間分別為40、60、80、100、120 min對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響。

1.3.9 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)

綜合單因素試驗(yàn)結(jié)果，采Box-Behnken模型，對(duì)空氣相對(duì)濕度（A）、鈍化溫度（B）、鈍化時(shí)間（C）這3 個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化，以相對(duì)脂肪酶活力（Y）為響應(yīng)值，進(jìn)行3因素3水平的響應(yīng)面分析，使用Design-Expert 8.0.6設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn)以優(yōu)化制油工藝參數(shù)。Box-Behnken設(shè)計(jì)試驗(yàn)因素與水平見表1。

表 1 Box-Behnken試驗(yàn)因素與水平Table 1 Code and level of independent variables used in Box-Behnken design

1.3.10 固定化酶膜操作穩(wěn)定性分析

在響應(yīng)面優(yōu)化的最佳條件下對(duì)米糠進(jìn)行鈍化處理，每次結(jié)束后，從酶膜上取約1 cm2的酶膜測(cè)定其酶活力，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)過程，計(jì)算相對(duì)酶活力，考察重復(fù)使用次數(shù)對(duì)酶膜相對(duì)酶活力的影響。

1.3.11 復(fù)合酶膜鈍化后米糠的貯存穩(wěn)定性

對(duì)在最佳鈍化條件下處理后的米糠進(jìn)行貯存穩(wěn)定性研究，以未經(jīng)任何處理的新鮮米糠為對(duì)照（相對(duì)酶活力100%），將每個(gè)米糠樣品包裝在聚丙烯袋中并在一定環(huán)境溫度下貯存2 個(gè)月，在整個(gè)貯存期間測(cè)定米糠樣品相對(duì)脂肪酶活力。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析方法

所得數(shù)據(jù)均為3 次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值，數(shù)據(jù)采用Origin 9.0與Design Expert 8.0.6進(jìn)行分析和繪制。用SPSS 17.0進(jìn)行ANOVA單因素方差分析，并檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的差異顯著性，P＜0.05，差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶膜載酶量及酶活力測(cè)定

通過采用Bradford方法測(cè)定酶蛋白含量計(jì)算出單位面積酶膜的載酶量為0.75 mg/cm2，固定化酶膜的酶活力達(dá)到224.25 U/mg。雖然酶活力有所降低，但可增加重復(fù)利用次數(shù)，避免了酶的大量流失。

2.2 掃描電鏡分析

圖 1 微孔膜及固定化酶膜的掃描電鏡圖Fig. 1 Scanning electron micrographs of microporous membrane and immobilized enzyme membrane

從圖1a可知，空白PTFE微孔膜內(nèi)部呈纖維狀，錯(cuò)亂交叉，排列不規(guī)則，開孔率比較高，其平均孔徑為0.1 μm，有較大的空間負(fù)載酶，但這種結(jié)構(gòu)表面平整光滑，不利于酶的固定化[25]。圖1b中CA-PTFE復(fù)合膜的表面平整、致密且均勻，這是由于經(jīng)醋酸纖維素修飾后，聚四氟乙烯膜內(nèi)部微孔被醋酸纖維素交織成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性和生物兼容性得到提高，從而利于酶的固定[26]。圖1c中CA-PTFE復(fù)合膜表面大部被酶覆蓋，且在表面分布均勻，表明大部分的酶被固定在CA-PTFE的界面上，這種結(jié)構(gòu)較利于木瓜蛋白酶的固定化。

2.3 單因素試驗(yàn)結(jié)果分析

2.3.1 鈍化時(shí)空氣相對(duì)濕度對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響

圖 2 空氣相對(duì)濕度對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響Fig. 2 Effect of relative humidity of air on relative lipase activity

由圖2可以看出，隨著操作室內(nèi)空氣相對(duì)濕度的增大，米糠相對(duì)脂肪酶活力呈先降低后平緩趨勢(shì)，在50%的空氣相對(duì)濕度下，脂肪酶相對(duì)酶活力最高為59.4%，當(dāng)空氣相對(duì)濕度大于80%時(shí)，相對(duì)酶活力的降低趨于平穩(wěn)，這是因?yàn)轶w系濕度較大，利于酶膜對(duì)米糠的鈍化作用，但是由于酶的催化作用只與少部分與酶結(jié)合的“結(jié)合水”有關(guān)，增大空氣相對(duì)濕度后，過高的水分含量會(huì)將酶和底物稀釋，從而降低酶促反應(yīng)速率[27]，所以操作室內(nèi)的相對(duì)濕度要適當(dāng)。綜合考慮，空氣相對(duì)濕度在80%為宜。

2.3.2 鈍化溫度對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響

圖 3 鈍化溫度對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響Fig. 3 Effect of deactivation temperature on relative lipase activity

由圖3可知，隨著溫度的升高，相對(duì)脂肪酶活力呈先降低后增加趨勢(shì)，當(dāng)溫度達(dá)到70 ℃時(shí)，相對(duì)酶活力達(dá)到最低。這是由于溫度升高后，木瓜蛋白酶的催化活性部位逐漸暴露，活性逐漸增強(qiáng)[28]，與底物油脂競(jìng)爭(zhēng)性的結(jié)合脂肪酶活性中心，從而阻礙脂肪酶與油脂結(jié)合，致使脂肪酶被鈍化，酶活力降低。而溫度繼續(xù)升高后，相對(duì)酶活力出現(xiàn)上升趨勢(shì)，這可能是因?yàn)檩^高溫度使酶膜上固定化酶部分失活所導(dǎo)致的，木瓜蛋白酶的有效作用溫度范圍是20～80 ℃，超過80 ℃時(shí)，木瓜蛋白酶活性會(huì)下降，溫度升高到90 ℃時(shí)木瓜蛋白酶會(huì)鈍化[29]。因此，固定化木瓜蛋白酶膜作用的最佳溫度在70 ℃左右。

2.3.3 鈍化時(shí)間對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響

由圖4可以看出，隨著鈍化時(shí)間的延長(zhǎng)，米糠的相對(duì)脂肪酶活力先急劇降低，在超過100 min后酶活力降低的速度減緩，在第120分鐘時(shí)達(dá)到最低，這是因?yàn)殡S著時(shí)間的延長(zhǎng)，酶膜的作用效果逐漸體現(xiàn)出來，雖然延長(zhǎng)鈍化時(shí)間，有利于脂肪酶的鈍化效果，但時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致效率的下降，因此綜合考慮鈍化時(shí)間以100 min為宜。

圖 4 鈍化時(shí)間對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響Fig. 4 Effect of deactivation time on relative lipase activity

2.4 響應(yīng)面法優(yōu)化鈍化工藝

2.4.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

綜合單因素試驗(yàn)的結(jié)果，以空氣相對(duì)濕度（A）、鈍化溫度（B）、鈍化時(shí)間（C）3 個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化，以相對(duì)脂肪酶活力（Y）為響應(yīng)值，進(jìn)行3因素3水平的響應(yīng)面分析，使用Design-Expert 8.0.6設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn)以優(yōu)化參數(shù)。Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2。

表 2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Box-Behnken design with experimental results

2.4.2 響應(yīng)面模型方程建立與顯著性分析

利用Design-Expert軟件進(jìn)行擬合得到的空氣相對(duì)濕度（A）、鈍化溫度（B）和鈍化時(shí)間（C）與相對(duì)脂肪酶活力（Y）之間的二次多項(xiàng)回歸方程如下：

利用Design Expert 8.0.6軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，響應(yīng)面二次模型的方差分析見表3。

表 3 響應(yīng)面二次模型的方差分析Table 3 Analysis of variance of response surface quadratic model

由表3可知，整體模型的F＝174.65，P＜0.000 1，模型極顯著，表明回歸方程描述各因素與響應(yīng)值之間的關(guān)系時(shí)，因變量與所有自變量之間的線性關(guān)系顯著，即這種實(shí)驗(yàn)方法是可靠的。失擬項(xiàng)是用來表示模型與試驗(yàn)擬合的程度，即二者差異的程度。表3中失擬項(xiàng)F值為1.09，P值為0.450 9，失擬項(xiàng)不顯著，表明該模型選擇正確，且模型中的調(diào)整系數(shù)R2Adj為98.99%，說明98.99%的響應(yīng)值變化可通過擬合模型進(jìn)行解釋，相關(guān)系數(shù)R2為99.56%，表明模型與實(shí)驗(yàn)擬合良好，可以用此模型來分析和預(yù)測(cè)相對(duì)脂肪酶活力。從回歸方程系數(shù)的顯著性檢驗(yàn)可看出：一次項(xiàng)A和C對(duì)響應(yīng)值的影響極顯著，B對(duì)響應(yīng)值的影響不顯著。

2.4.3 響應(yīng)面交互作用分析

本研究考察空氣相對(duì)濕度、鈍化溫度和鈍化時(shí)間3 個(gè)因素對(duì)米糠的相對(duì)脂肪酶活力的影響，鈍化參數(shù)交互作用對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響如圖5所示。

圖 5 鈍化參數(shù)交互作用對(duì)相對(duì)脂肪酶活力的影響Fig. 5 Response surface plots showing the interactive effect of various factors on relative lipase activity

從圖5可以看出，空氣相對(duì)濕度、鈍化時(shí)間、鈍化溫度3 個(gè)變量在兩兩交互時(shí)，保持其中1 個(gè)變量不變，隨著另外2 個(gè)變量的增加，相對(duì)脂肪酶活力呈現(xiàn)先降低的趨勢(shì)，當(dāng)達(dá)到一定值時(shí)又呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)。3 個(gè)因素中AC和BC交互作用為極顯著，AB是不顯著，即空氣相對(duì)濕度和鈍化時(shí)間之間以及鈍化溫度和鈍化時(shí)間之間有極顯著交互作用，空氣相對(duì)濕度和鈍化溫度之間的交互作用不顯著。通過試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化得到酶膜穩(wěn)定米糠的最佳工藝參數(shù)為空氣相對(duì)濕度72.2%、鈍化溫度70.5 ℃、鈍化時(shí)間113.4 min，該條件下米糠的相對(duì)脂肪酶活力預(yù)測(cè)值為34.8%。根據(jù)實(shí)際情況將工藝參數(shù)進(jìn)行整理，得出整理值為空氣相對(duì)濕度72%、鈍化溫度71 ℃、鈍化時(shí)間113 min。在此條件下進(jìn)行3 次平行實(shí)驗(yàn)，該條件下相對(duì)脂肪酶活力平均值為35.2%。實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值之間具有良好的擬合性，從而證實(shí)了模型的有效性。同時(shí)，測(cè)定了在此最佳工藝參數(shù)下固定化酶膜鈍化后米糠的過氧化物酶活力[30]，以新鮮米糠的過氧化物酶活力記為100%，測(cè)定結(jié)果為過氧化物酶的相對(duì)酶活力降到了23.3%，結(jié)果表明此方法可以有效鈍化米糠中的關(guān)鍵酶，從而提高米糠的貯存穩(wěn)定性。

2.5 固定化酶膜的操作穩(wěn)定性

圖 6 重復(fù)使用次數(shù)對(duì)固定化酶膜相對(duì)酶活力的影響Fig. 6 Effect of number of repeated use on relative activity of immobilized enzyme membrane

在響應(yīng)面優(yōu)化的最佳條件下（空氣相對(duì)濕度72%、鈍化溫度71 ℃、鈍化時(shí)間113 min）處理米糠后，重復(fù)使用次數(shù)對(duì)固定化酶膜相對(duì)酶活力的影響如圖6所示。由圖6可看出，酶膜的相對(duì)酶活力隨重復(fù)使用次數(shù)的增加而降低，經(jīng)10 次使用后，相對(duì)酶活力為54.2%。這可能是由于隨著重復(fù)使用次數(shù)的增加，酶膜受到的機(jī)械損傷增加，出現(xiàn)部分破損、部分固定化酶脫落的現(xiàn)象，均會(huì)導(dǎo)致固定化酶活性的降低。同時(shí)由于酶本身的失活也會(huì)直接導(dǎo)致固定化酶相對(duì)酶活力的降低。但酶膜在重復(fù)使用6 次后，相對(duì)酶活力仍可保持在73.0%以上，這一結(jié)果與梁?jiǎn)苇偟萚21]研究固定化脂肪酶膜的結(jié)果一致，說明此酶膜具有良好的操作穩(wěn)定性。

2.6 復(fù)合酶膜鈍化后米糠的貯存穩(wěn)定性

圖 7 貯存期間固定化酶膜鈍化后米糠中相對(duì)脂肪酶活力的變化Fig. 7 Changes in relative lipase activity of rice bran treated with the immobilized enzyme membrane during storage

由圖7可以看出，在2 個(gè)月的貯存期間里，經(jīng)固定化木瓜蛋白酶膜鈍化后的米糠，其相對(duì)脂肪酶活力仍低于36.0%，幾乎無明顯變化。這與Laokuldilok等[15]研究用木瓜蛋白酶處理的米糠，在2 個(gè)月貯存期間里脂肪酶活力變化基本一致，結(jié)果證實(shí)，應(yīng)用固定化木瓜蛋白酶膜穩(wěn)定米糠是一種能有效提高米糠貯存穩(wěn)定性的方法。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)針對(duì)米糠的不穩(wěn)定性質(zhì)導(dǎo)致其利用率低的缺點(diǎn)，應(yīng)用CA-PTFE復(fù)合膜固定化木瓜蛋白酶對(duì)米糠進(jìn)行鈍化處理，降低了米糠中脂肪酶的活力并以此為指標(biāo)，通過響應(yīng)面法優(yōu)化了空氣相對(duì)濕度、鈍化溫度和鈍化時(shí)間對(duì)鈍化效果的影響，確定了固定化酶膜鈍化米糠脂肪酶的最佳鈍化條件，在最佳條件下處理后的米糠相對(duì)脂肪酶活力為35.2%，表明米糠中的脂肪酶得到有效鈍化。且穩(wěn)定后的米糠貯存2 個(gè)月后，其相對(duì)脂肪酶活力仍低于36.0%，同時(shí)固定化木瓜蛋白酶酶膜重復(fù)使用6 次后的相對(duì)酶活力仍保持在73.0%以上。本實(shí)驗(yàn)在提高米糠穩(wěn)定性同時(shí)，解決了傳統(tǒng)游離蛋白酶鈍化米糠不可重復(fù)利用的問題，降低了生產(chǎn)成本，為酶法穩(wěn)定米糠提供了新工藝與理論依據(jù)。