夏鴻林，胡 翔，陳亞飛，張前珍

(1.長江職業(yè)學(xué)院，湖北 武漢 430074；2.上海必奕醫(yī)藥科技有限公司，上海 201318；3.上海玉安藥業(yè)有限公司，上海 201415)

眾所周知，小兒啟脾顆粒是基于小兒啟脾片[1]的處方制備而得，本品主要功效為和胃、健脾和止瀉。用于脾胃虛弱，食欲不振，消化不良，腹脹便溏。顆粒劑同片劑相比具有很多優(yōu)勢，可省去制粒以后壓片與包衣，既簡化了工藝步驟，又可降低成本，并使質(zhì)量易于控制。此外，本品為顆粒劑，更方便小兒服用。另一方面，顆粒劑分劑量準(zhǔn)確，且質(zhì)量較穩(wěn)定。實(shí)驗(yàn)小組在原片劑的基礎(chǔ)上對(duì)本品進(jìn)行了顆粒劑的研制，并對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了相應(yīng)的研究，方便本品的質(zhì)量控制。小兒啟脾片已在市場銷售多年，質(zhì)量穩(wěn)定。因此，改劑型后含量測定方法參照小兒啟脾片的標(biāo)準(zhǔn)而定，檢測樣品中人參皂苷Rg1的含量。

一、儀器與試藥

(一)儀器

LC-10ATVP高效液相色譜儀；C18(Inertsil 4.6×150mm，5μm)色譜柱；N-2000色譜工作站。

(二)試藥

人參皂苷Rg1對(duì)照品(批號(hào)：110703-201128)購自中中國食品藥品檢定研究院；小兒啟脾顆粒(自制，批號(hào)：20140701,20140702,20140703)。乙腈、甲醇為色譜純?cè)噭?水為純化水；其余試劑均為分析純。

二、方法與結(jié)果

(一)色譜條件

色譜柱：Kromasil C18(4.6×250mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)；流速：1.0ml·min-1；檢測波長：203nm；進(jìn)樣量：20μl。理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算不低于2500，且人參皂苷Rg1與相鄰峰的分離度大于2.0。

(二)溶液的制備

1．對(duì)照品溶液的制備。取人參皂苷Rg1對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml中含53μg的溶液。

2．供試品溶液的制備。取本品1.7g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌容器及濾渣，合并洗液和濾液，蒸干，殘?jiān)铀?5ml使溶解，用乙醚洗滌3次，每次10ml，水液用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

3．陰性樣品溶液的制備。取除人參外的其余處方量藥材，按樣品的制備工藝方法制備缺人參的陰性樣品，然后按上述供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。

(三)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液各10μl，按上述色譜條件下進(jìn)樣，測定，記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果表明，該色譜條件下，人參皂苷Rg1峰與其他峰分離良好，峰形對(duì)稱，且陰性樣品無干擾，理論板數(shù)按人參皂苷Rg1峰計(jì)算不低于2500，且人參皂苷Rg1峰與相鄰峰的分離度大于2.0。表明本方法具有良好的專屬性。HPLC圖譜見圖1。

(四)線性關(guān)系考察

精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品10.12mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml中含101.2μg的溶液，作為對(duì)照品貯備液；精密量取貯備液1、2、4、6、8ml,分別置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取各溶液20μl，注入液相色譜儀，測定其峰面積。將濃度C和相應(yīng)的峰面積A進(jìn)行回歸處理，人參皂苷Rg1的回歸方程為：A=1.522×105C-2.7×103(r=0.9998)，線性范圍為0.2024～1.6192μg·ml-1。

圖1 小兒啟脾顆粒的高效液相色譜圖(A.對(duì)照品；B.樣品；C.缺人參陰性對(duì)照樣品；1：人參皂苷Rg1)

(五)精密度試驗(yàn)與重復(fù)性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，以峰面積考察精密度，峰面積的RSD為0.72%。取同一批號(hào)樣品(批號(hào)20140701)，按“二.(二).2”項(xiàng)下的處理方法平行處理6份，依上述色譜條件依法進(jìn)行測定，并計(jì)算含量，結(jié)果樣品中人參皂苷Rg1含量的RSD為1.09%。

(六)穩(wěn)定性試驗(yàn)和回收率試驗(yàn)

取供試品，按照“二.(二).2”項(xiàng)下方法處理，依上述色譜條件分別在0,2,4，6，8h依次進(jìn)行測定，結(jié)果峰面積的RSD為0.40%。精密稱取已知含量為0.270mg/袋(批號(hào)為20140701，每袋平均裝量2.038g)的樣品約1.2g共6份，分別精密加入人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液(50.6μg·ml-1)3.0ml，按照“二.(二).2”項(xiàng)下方法處理，依上述色譜條件測定其中的人參皂苷Rg1的含量,并分別計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

(七)樣品測定

取本品3批樣品，按“二.(二).2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，用外標(biāo)法計(jì)算樣品中人參皂苷Rg1的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

三、結(jié)論

經(jīng)對(duì)人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液進(jìn)行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1在近紫外區(qū)有最大吸收，參考《中國藥典》人參的含量測定方法和有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[2-5]，選用203nm為檢測波長。

本試驗(yàn)參照《中國藥典》人參的含量測定方法和有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[3-5]，在方法研究過程中，流動(dòng)相比較了乙腈-1%磷酸溶液(20:80)、乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)及乙腈-0.05mol·L-1磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.7)(20:80),結(jié)果顯示，采用乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)為流動(dòng)相,系統(tǒng)分離效果較好，故選擇本系統(tǒng)為流動(dòng)相。

三批自制產(chǎn)品的含量測定結(jié)果表明：本方法簡便、快速和結(jié)果準(zhǔn)確，毋容置疑，本含量測定可以用于產(chǎn)品的質(zhì)量控制。