劉歡歡,劉珍珠,婁 愷,晁群芳*,曾 軍*

(1.新疆大學(xué) 生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830046；2.新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所 新疆特殊環(huán)境微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆 烏魯木齊 830091)

【研究意義】近年來，人們對食品的質(zhì)量與安全問題越來越關(guān)注，在肉類消費(fèi)選擇中，無抗生素喂養(yǎng)的健康動物更受青睞。因此，禽類養(yǎng)殖行業(yè)一直在積極的尋找與研究各種可替代抗生素的綠色健康添加劑，而益生菌是研究最為廣泛的替抗添加劑之一。益生菌是常常定殖于動物腸道中的微生物，它們可分泌有益的代謝產(chǎn)物，如消化酶可提高動物營養(yǎng)吸收或抑菌物質(zhì)可形成良性腸道微生態(tài)環(huán)境，還有的益生菌作為抗原可增強(qiáng)動物機(jī)體的免疫功能[1]。許多研究表明不同種群的微生物有不同的益生功能，常見的益生菌如乳酸菌可產(chǎn)酸分泌抑菌物質(zhì)[2]，丁酸梭菌不僅可產(chǎn)酸還可以分泌消化酶[3]，枯草芽孢桿菌和地衣芽孢桿菌可分泌蛋白酶淀粉酶等[4]，雙歧桿菌可提供營養(yǎng)物質(zhì)等[5]，同時應(yīng)用于動物試驗(yàn)中效果顯著?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】黃燕等[6]在蛋雞的基礎(chǔ)飼糧中添加不同比例的復(fù)合益生菌，結(jié)果表明復(fù)合益生菌可以顯著改善蛋雞的產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)；但Maryam A 等[7]在肉雞飼料中添加單種益生菌和復(fù)合益生菌卻發(fā)現(xiàn)，所添加的益生菌改變了肉雞腸道菌群卻沒有提高肉雞的生長性能和蛋品質(zhì)等?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】然而，多種不同的益生菌在動物試驗(yàn)中效果如何，卻未見報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】因此，本實(shí)驗(yàn)將常見益生菌乳酸菌，丁酸梭菌，枯草芽孢桿菌，地衣芽孢桿菌，雙歧桿菌，以及兩種方式復(fù)配的復(fù)合益生菌添加在5日齡柳州麻雞飲水中，比較幾種益生菌對動物的生長性能，腸道酶活和血清免疫指標(biāo)的影響，探索益生功能效果最好的益生菌添加劑，為益生菌的研發(fā)與應(yīng)用提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 益生菌 雞源性益生菌丁酸梭菌DSSJ(活菌數(shù)≥1×107CFU/mL)、乳酸菌KJT(活菌數(shù)≥1×107CFU/mL)、地衣芽孢桿菌Db(活菌數(shù)≥1×107CFU/mL)，枯草芽孢桿菌Kb(活菌數(shù)≥1×107CFU/mL)和雙歧桿菌DD(活菌數(shù)≥1×107CFU/mL)，由新疆農(nóng)科院微生物應(yīng)用研究所擴(kuò)增培養(yǎng)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物 5日齡柳州麻雞2000只，由新疆南山某養(yǎng)殖場提供。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組處理設(shè)計 實(shí)驗(yàn)分組方法見表1，2000只柳州麻雞，分為8組，對照組，KJT組，DSSJ組，Db組，Kb組，DD組，復(fù)合1組和復(fù)合2組。

1.2.2 飼養(yǎng)管理方法 試驗(yàn)雞采用網(wǎng)上平養(yǎng)，自由飲水自由采食，按照程序?qū)υ囼?yàn)雞進(jìn)行嚴(yán)格免疫。前期(1～28日齡)基礎(chǔ)日糧為肉小雞粒狀配合飼料，購于新疆天康飼料有限公司；后期(30日齡之后)為玉米豆粕型基礎(chǔ)日糧；日糧配方和營養(yǎng)水平見表2。

1.2.3 樣品采集和指標(biāo)檢測 (1) 采樣：每組隨機(jī)抓取20只以上的試驗(yàn)雞于試驗(yàn)第 1，6，10，23，30天 早上08: 00 空腹稱量，計算體增重(Body weight gain，BWG)和日增重(Daily gain，DG)；試雞在取樣前禁食 12 h，于試驗(yàn)第34天從各組隨機(jī)選取體重適中的柳州麻雞 10 只，采血 2 mL，于 3000 r/min 離心 10 min，分離血清于 1.5 mL 離心管中，-20 ℃ 冷凍保存，用于血清免疫指標(biāo)測定[8]；頸靜脈放血處死后解剖，分別截取每只雞的十二指腸，空腸，回腸和盲腸段，用于測定腸道的淀粉酶，蛋白酶和脂肪酶活性[9]。

(2)腸道酶活測定：取十二指腸，空腸，回腸和盲腸腸段分別于低溫下稱取0.1 g腸道內(nèi)容物，按照淀粉酶(AMS)試劑盒，脂肪酶試劑盒和糜蛋白酶試劑盒說明書，測定每只雞各個腸段的淀粉酶，脂肪酶和蛋白酶酶活；試劑盒購自于南京建成生物工程研究所。

(3)血清免疫指標(biāo)檢測：選取免疫球蛋白M，A，G為血清免疫指標(biāo)，按照雞免疫球蛋白M(IgM)，雞免疫球蛋白A(IgA)和雞免疫球蛋白G(IgG)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書操作；試劑盒購自于江蘇酶標(biāo)生物有限公司。

(4)數(shù)據(jù)分析：用統(tǒng)計軟件IBM SPSS Statistics 2的one-way ANOVA對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析， Duncan法進(jìn)行多重比較，以P<0.05差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用Mean±SE表示。

表2 基礎(chǔ)日糧與營養(yǎng)水平Table 2 Basic diet and nutritional level

注：a預(yù)混料為每千克飼糧提供：Cu 14.4.0 mg，F(xiàn)e 300.0 mg，Mn 156.0 mg，Zn 116.0 mg，I 1.1 mg，Se 0.5 mg， VA 9600 IU，VD 4500 IU，VE 58 IU，VK 12 mg，B16mg，B215 mg，B6 11 mg，B120.06 mg，煙酸 90 mg，泛酸 20 mg，葉酸 3.5 mg，生物素 0.4 mg。b計算值。
Note:aPremix provided for each kilogram of foodstuff: Cu 14.4.0 mg, Fe 300.0 mg, Mn 156.0 mg, Zn 116.0 mg, I 1.1 mg, Se 0.5 mg,VA 9600 IU, VD 4500 IU, VE 58 IU, VK 12mg,B16 mg, B215 mg, B611 mg, B120.06 mg, niacin 90 mg, pantothenic acid 20 mg, folic acid 3.5 mg, biotin 0.4 mg.bCalculation.

2 結(jié)果與分析

2.1 不同益生菌對柳州麻雞生長性能的影響

2.1.1 不同組柳州麻雞的體增重和日增重結(jié)果 如表3和表4所示，6日內(nèi)F1組柳州麻雞增重高達(dá)67.34 g，平均每只柳州麻雞每日增重11.22 g，與DSSJ，Kb，和F2組差異顯著(P<0.05)，與Db，KJT和對照組差異極顯著(P<0.01)；其次是DD組體增重為62.91 g，平均每日增重10.49 g；對照組平均體增重為46.74 g，與其他各組相比最少。10日內(nèi)體增重最高的也是DD組和F1組，分別為127.51和127.15 g，平均日增重分別為12.75和12.72 g，與Db組差異顯著(P<0.05)，與對照組相比差異極顯著(P<0.01)；對照組平均體增重最少，為92.74 g，平均日增重為9.27 g，與其他組之間差異顯著(P>0.05)。23日內(nèi)，柳州麻雞平均體增重最多的依舊是F1組，為449.78 g，每日平均增重19.56 g，與對照組和Db組相比，差異極顯著(P<0.01)；其次是F2組和Kb組，分別為434.98和432.98 g，平均日增重分別為18.83和18.91 g；對照組的平均體增重依舊最少，為378.58 g，均顯著低于試驗(yàn)組(P<0.05)。試驗(yàn)期到了30 d，F(xiàn)1組平均日增重高達(dá)21.61 g/只·天，平均每只柳州麻雞增重648.18 g，比對照組平均體重多出112 g，差異極顯著(P<0.01)，其次為Kb組，平均每只雞每日增重20.38 g，比對照組生長速度多了2.5 g/只·天。

2.1.2 不同組柳州麻雞的強(qiáng)壯雞與弱雞比例統(tǒng)計 試驗(yàn)期6 d，以柳州麻雞體重小于90 g的為弱雞，大于130 g的為強(qiáng)雞；試驗(yàn)期10 d，以柳州麻雞體重低于120 g為弱雞，體重高于200 g為強(qiáng)雞；試驗(yàn)期23日，以柳州麻雞體重小于350 g的為弱雞，大于550 g的為強(qiáng)雞；試驗(yàn)期30日，以柳州麻雞體重小于500 g的為弱雞，大于800 g的為強(qiáng)雞。

如表5和表6所示，F(xiàn)1組在各時期，柳州麻雞弱雞所占比例皆為最低，分別為3 %，0 %，3 %和3 %；試驗(yàn)初期(6日)和實(shí)驗(yàn)中期(10日)，弱雞率最高的為Db組，但弱雞平均體重卻高于對照組；實(shí)驗(yàn)后期(23日)和實(shí)驗(yàn)?zāi)┢?30日)對照組柳州麻雞弱雞率為最高分比為24 %和24 %，其次為Db組，22 %和21 %。同時F1組在所有時期的強(qiáng)雞比例比其他各組高，分比為24 %，17 %，17 %和10 %；KJT組在試驗(yàn)初期和試驗(yàn)后期的強(qiáng)雞較高，Kb組強(qiáng)雞率在試驗(yàn)中、后期較高；對照組的強(qiáng)雞率在各時期為最低，分別為2 %，3 %，3 %，2 %。

表3 不同組柳州麻雞的體增重結(jié)果Table 3 Results of body weight gain of different groups of Liuzhou Ma chicken

注：同列數(shù)據(jù)字母相同表示差異不顯著(P>0.05),相鄰字母表示差異顯著(P<0.05),相間字母表示差異極顯著(P<0.01);下同。
Note: The same data in the same column indicates that the difference is not significant (P>0.05), the adjacent letters indicate significant difference (P<0.05), and the interphase letters indicate that the difference is extremely significant (P<0.01);The same as below.

表4 不同組柳州麻雞的日增重結(jié)果Table 4 Daily weight gain results of different groups of Liuzhou Ma chicken

表5 不同組柳州麻雞弱雞率Table 5 Different groups of Liuzhou Ma chicken weak chicken rate

表6 不同組柳州麻雞強(qiáng)雞率Table 6 Different groups of Liuzhou Ma chicken strong chicken rate

2.2 不同益生菌對腸道酶活的影響

2.2.1 柳州麻雞腸道脂肪酶酶活 如表7所示，與對照組相比，十二指腸和空腸的脂肪酶活較高，回腸和盲腸的酶活較低；相對于對照組，其他益生菌組對十二指腸和空腸腸道脂肪酶活的改變較小，但是DSSJ，DD，F(xiàn)1和F2對回腸的脂肪酶活顯著增高(P<0.05)，DSSJ，Db，F(xiàn)1和F2對盲腸的脂肪酶活顯著增高；DSSJ組柳州麻雞十二指腸脂肪酶活平均為1.43 U/g，顯著高于其他組(P<0.05)；復(fù)合1組的空腸，回腸和盲腸腸道酶活分別為1.77，1.53和1.35 U/g，相比于對照組顯著增高(P<0.05)。

表7 柳州麻雞腸道脂肪酶酶活結(jié)果Table 7 Intestinal lipase activity of Liuzhou Ma chicken (U/g)

表8 柳州麻雞腸道淀粉酶酶活結(jié)果Table 8 Intestinal amylase activity of Liuzhou Ma chicken intestine (U/g)

表9 柳州麻雞腸道蛋白酶酶活結(jié)果Table 9 Liuzhou Ma chicken intestinal protease activity results (U/g)

2.2.2 柳州麻雞腸道淀粉酶酶活 如表8所示，每組柳州麻雞整個腸段中，十二指腸淀粉酶活高于其他腸段；在十二指腸中，DSSJ，Db，F(xiàn)1和F2的淀粉酶活分別為7.06，7.28，7.14和7.4 U/g，顯著高于對照組CK(P<0.05)；在空腸中，淀粉酶活最大值為Kb組，平均酶活為5.79 U/g，其次是DD組，為5.29 U/g，顯著高于對照組(P<0.05)；在回腸中，DD組淀粉酶活極顯著高于對照組(P<0.01)，為5.63 U/g，其次為Kb組和F2組，分比為4.26和4.14 U/g，與對照組相比，呈顯著性差異(P<0.05)；而盲腸中，F(xiàn)2組淀粉酶活最高為3.52 U/g，與其他各組差異顯著(P<0.05)。

2.2.3 柳州麻雞腸道蛋白酶酶活 如表9所示，在十二指腸腸段中，F(xiàn)1組蛋白酶活為621.18 U/g，是所有組中最高的，相對于對照組和KJT組差異極顯著(P<0.01)，其次為DD組，平均酶活為467.59 U/g；在空腸中，F(xiàn)1和DD組平均蛋白酶活為461.45和419.22 U/g，極顯著高于CK，KJT，其次為F2，與對照組和KJT組形成顯著性差異(P<0.05)；在回腸中，F(xiàn)1組蛋白酶活高達(dá)484.21 U/g，與對照組呈極顯著差異(P<0.01)，其次為DD組，251.31 U/g；在盲腸中，蛋白酶活最高依舊為F1組，409.91 U/g，與對照組呈顯著性差異(P<0.05)，其次，DD組平均酶活為284.75 U/g；F1組在各個腸段中的蛋白酶活都是最高的，其次為DD組。

2.3 不同益生菌對柳州麻雞血清免疫指標(biāo)的影響

如表10所示，試驗(yàn)組血清中免疫球蛋白A(Ig A)，免疫球蛋白M(Ig M)和免疫球蛋白G(Ig G)的含量均高于對照組。其中，F(xiàn)1組的3種抗體含量比對照組分別增加11.8 %(P>0.05)，37.46 %(P<0.05)，32.29 %(P<0.01)；F2組血清中的Ig A 和IgM含量分別為對照組的1.63倍(P<0.05)和1.37倍(P<0.05)；DD組血清抗體IgM的含量為4837.93 ng/mL，也與對照組形成明顯的差異(P<0.05)，乳酸菌KJT組血清抗體IgG含量高于對照組3694.72 ng/mL(P<0.05)。

3 討 論

3.1 不同益生菌對柳州麻雞生長性能的影響

許多研究表明在禽類養(yǎng)殖應(yīng)用中，給動物飼喂添加益生菌的飼料或飲水，可以提高動物的生長性能。王斌等[10]添加0.1 %唾液乳桿菌(活菌數(shù)≥1×1010cfu/g)和鼠李糖乳桿菌(活菌數(shù)≥1×1010cfu/g)1日齡白萊航SPF蛋用公雛雞的基礎(chǔ)日糧中，飼喂24 d后，乳酸菌組的雞體重與對照組相比明顯增加(P<0.05)，這說明乳酸菌可以提高動物的生長性能，這與本實(shí)驗(yàn)中KJT組結(jié)果類似，在試驗(yàn)期結(jié)束后，KJT組的柳州麻雞的體增重比對照組多10.62 %(P<0.05)；肖克權(quán)等[11]在基礎(chǔ)日糧中添加0.2 %的丁酸梭菌(活菌數(shù)≥1×109cfu/g)和枯草芽孢桿菌(活菌數(shù)≥3×109cfu/g)，20 d內(nèi)2組益生菌試驗(yàn)組的麻羽肉雞的日采食量，日體增重和料重比與對照組相比都有明顯的差異，有效增加了麻羽肉雞的體增重(P<0.05)，而本實(shí)驗(yàn)中DSSJ組柳州麻雞平均體重相比對照組卻無明顯差異(P>0.05),Kb組麻雞體增重卻增加14.02 g(P<0.01)，結(jié)果與肖克權(quán)等相似；孫全友等[12]按照2×109cfu/kg比例在AA肉雞飼糧中添加了地衣芽孢桿菌，飼喂42 d后，地衣芽孢桿菌組相比于對照組平均日增重顯著增加了(P<0.05)，這與本實(shí)驗(yàn)Db組柳州麻雞體增重?zé)o顯著差異的結(jié)果不一致；班慧[13]在AA肉仔雞日糧中添加0.02 g/100g 的雙歧桿菌菌粉，42 d試驗(yàn)周期結(jié)果顯示，雙歧桿菌組與對照組的體增重差異不顯著(P>0.05)，這與本實(shí)驗(yàn)DD組體增重結(jié)果一致，都未形成顯著性差異。本實(shí)驗(yàn)還有兩種復(fù)配益生菌組，F(xiàn)1即乳酸菌和丁酸梭菌1∶1混合，和F2組乳酸菌，丁酸梭菌，地衣芽孢桿菌，枯草芽孢桿菌和雙歧桿菌混合而成，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，兩種益生菌混合組對柳州麻雞體增重效果更好。

因?yàn)槊拷M雞籠容納250只雞，采食飲水等問題使每只雞體重分布不均，因此選擇體重集中在80 %以上的區(qū)間內(nèi)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，并進(jìn)行了少數(shù)弱雞和強(qiáng)雞的體重情況，結(jié)果表明，益生菌組弱雞少于對照組，且弱雞體重大部分大于對照組弱雞平均體重，而益生菌組強(qiáng)壯雞數(shù)量更多于對照組，平均體重也更高。

表10 不同益生菌對柳州麻雞血清免疫指標(biāo)的影響Table 10 Effect of different probiotics on serum immune index of Liuzhou Ma chicken (ng/mL)

3.2 不同益生菌對柳州麻雞腸道酶活的影響

腸道益生菌可以幫助動物機(jī)體消化，增強(qiáng)腸道酶活力。陳靜等[14]在肉雞飲水中添加不同比例的植物乳桿菌，每隔兩周解剖并取空腸和回腸腸道內(nèi)容物檢測淀粉酶活性和蛋白酶活性，結(jié)果表明肉雞空腸中的蛋白酶活和淀粉酶活以及回腸中蛋白酶活都顯著高于對照組(P<0.05)。李佳駿等[15]在科寶肉雞基礎(chǔ)飼糧中添加0.1 %的枯草芽孢桿菌 168 制劑 (活芽孢 數(shù) 為 1.0 ×109CFU/g)，分別在飼喂42 d后解剖取回腸和空腸洗去內(nèi)容物檢測腸道粘膜消化酶活，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組空腸脂肪酶，蛋白酶和回腸蛋白酶活性均高于對照組(P<0.05)。本實(shí)驗(yàn)用5種益生菌和2種復(fù)配益生混合菌，檢測了這幾種益生菌對柳州麻雞的十二指腸，空腸，回腸和盲腸的脂肪酶，淀粉酶和蛋白酶酶活的影響，結(jié)果表明，DSSJ可以顯著提高柳州麻雞的十二指腸淀粉酶酶活、脂肪酶酶活，和回腸和盲腸的脂肪酶酶活(P<0.05)；Db可以顯著提高柳州麻雞十二指腸淀粉酶酶活和盲腸脂肪酶酶活(P<0.05)；Kb可以增加空腸和回腸的淀粉酶酶活；DD可以增加空腸和回腸的淀粉酶和蛋白酶酶活，以及十二指腸的蛋白酶酶活(P<0.05)；F1組復(fù)合菌可以使十二指腸淀粉酶酶活和十二指腸，空腸，回腸的脂肪酶酶活以及全腸段的蛋白酶酶活(P<0.05)；F2組復(fù)合菌可以增加回腸和盲腸的脂肪酶酶活和淀粉酶酶活，以及空腸的蛋白酶酶活(P<0.05)。而KJT組與對照組各段腸段的酶活無顯著性差異(P>0.05)。

3.3 不同益生菌對柳州麻雞血清免疫指標(biāo)的影響

血清免疫球蛋白包括免疫球蛋白G(Ig G)，免疫球蛋白M(Ig M)和免疫球蛋白A(Ig A)，是動物體液免疫的標(biāo)志。甄玉國等[16]在肉仔雞的基礎(chǔ)日糧中添加2 %的植物乳桿菌(活菌數(shù)≥1.36×1010cfu/mL),飼喂42 d后，測定了肉仔雞血清中Ig A 和Ig G等含量，與對照組相比，基礎(chǔ)日糧中添加2 %的植物乳桿菌的實(shí)驗(yàn)組中的免疫球蛋白含量分別增加了33.27 %(P<0.05)和17.88 %(P<0.05)。在本實(shí)驗(yàn)中，KJT組并未顯著提升柳州麻雞血清免疫抗體IgA和IgM的含量，但是，卻顯著提高了IgG的含量(P<0.05)，這與甄玉國的實(shí)驗(yàn)部分結(jié)果相似；此外，DD組血清抗體IgM的含量與對照組相比，明顯增加了(P<0.05)。謝文惠等[17]在基礎(chǔ)日糧中添加不同比例的枯草芽孢桿菌，嗜酸乳桿菌，酵母菌和雙歧桿菌混合菌，可不同程度的提高IgG和Ig A的含量(P<0.05)。本實(shí)驗(yàn)中，2種復(fù)配菌都有效的提高了柳州麻雞血清免疫球蛋白含量，F(xiàn)1組的3種抗體含量比對照組分別增加11.8 %(P>0.05)，37.46 %(P<0.05)，32.29 %(P<0.01)；F2組血清中的Ig A 和IgM含量分別為對照組的1.63倍(P<0.05)和1.37倍(P<0.05)。

4 結(jié) 論

益生菌可有效增加柳州麻雞體重，其中，F(xiàn)1組增重效果最佳；益生菌可有效提高柳州麻雞腸道酶活力，其中F1，F(xiàn)2，Kb，DSSJ，Db，DD等益生菌均能在各腸段發(fā)揮作用；益生菌可以提高柳州麻雞血清免疫球蛋白的含量，F(xiàn)1組和F2組效果最佳。