HPLC法測(cè)定(8a,9R)-辛可寧的有關(guān)物質(zhì)

（永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院,湖南永州425000）

(8a,9R)-辛可寧中文全名為(8a,9R)-辛可寧-9-醇單 [[(S)-[(1R)-2-甲基-1-(1-氧代丙氧基)丙氧基](4-苯基丁基)氧膦基]乙酸]鹽，CAS號(hào)為137590-32-0，分子式為 C19H29O6P.C19H22N2O，相對(duì)分子質(zhì)量為678.79，為福辛普利鈉原料藥的中間體[1]。福辛普利鈉為用于治療高血壓和心力衰竭常用藥，在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用。本研究建立了HPLC法測(cè)定(8a,9R)-辛可寧有關(guān)物質(zhì)的方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

樣品：(8a,9R)-辛可寧（湖北鑫鳴泰化學(xué)有限公司，批號(hào) 20160401、20160501、20160601）；正己烷：色譜純，阿拉丁；異丙醇：色譜純，阿拉??；乙腈：色譜純，阿拉丁；其他試劑均為分析純。

1.2 主要儀器

高效液相色譜儀：島津LC-10AT VP泵（日本島津），島津SPD-10AVP檢測(cè)器（日本島津）；Labsolutions色譜數(shù)據(jù)工作站；電子天平：AG135型，梅特勒-托利儀器（上海）有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1）供試品溶液制備：取本品30mg，精密稱(chēng)定，置25mL量瓶中，加水適量使溶解并加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2）對(duì)照溶液制備：精密量取上述供試品溶液1mL，置100mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

3）高溫破壞樣品溶液制備：取本品適量，平鋪于稱(chēng)量瓶中，置80℃烘箱中放置24h，取約30mg，精密稱(chēng)定，置25mL量瓶中，加水適量使溶解并加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

4）光照破壞樣品溶液制備：取本品適量，平鋪于稱(chēng)量瓶中，置4500±500Lx照度下放置24h，取約30mg，精密稱(chēng)定，置25mL量瓶中，加水適量使溶解并加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

5）氧化破壞樣品溶液制備：取本品30mg，精密稱(chēng)定，置25mL量瓶中，加30%雙氧水0.2mL，室溫放置10min后，加水適量使溶解并加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

6）酸破壞樣品溶液制備：取本品30mg，精密稱(chēng)定，置25mL量瓶中，加0.1mol/L的鹽酸溶液0.5mL，室溫放置10min后，加0.1mol/L的氫氧化鈉溶液0.5mL中和，再加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

7）堿破壞樣品溶液制備：取本品30mg，精密稱(chēng)定，置25mL量瓶中，加0.1mol/L的氫氧化鈉溶液0.5mL，室溫放置10min后，加0.1mol/L的鹽酸溶液0.5mL中和，再加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

8）氧化空白樣品溶液制備：量取30%雙氧水0.2mL，置25mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

9）酸堿空白樣品溶液制備：分別量取0.1mol/L的鹽酸溶液與0.1mol/L的氫氧化鈉溶液各0.5mL，置25mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

10）色譜條件：色譜柱為Agilent硅膠柱（250×4.6mm，5μm），以正己烷∶異丙醇∶乙腈∶水∶磷酸（17∶51∶332∶1∶0.2）為流動(dòng)相，流速為 1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm，柱溫為40℃，進(jìn)樣量20μL。

2 結(jié)果分析

2.1 色譜條件的選擇

參考福辛普利鈉EP標(biāo)準(zhǔn)，我們選擇流動(dòng)相A：磷酸∶水∶乙腈（0.5∶3.5∶1000）、流動(dòng)相 B：正己烷∶異丙醇（1∶3），通過(guò)調(diào)整流動(dòng)相A與流動(dòng)相 B的配比，以本品堿破壞供試品溶液進(jìn)行液相色譜條件摸索。

2.2 專(zhuān)屬性試驗(yàn)分析

精密量取上述溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果本品經(jīng)酸、堿、氧化、高溫和光照破壞后，主成分峰與各雜質(zhì)峰分離度較好，破壞前后物料基本守恒。

2.3 檢測(cè)限、定量限

精密稱(chēng)取(8a,9R)-辛可尼適量，加水適量使溶解并加流動(dòng)相稀釋制成每1mL約含1μg的溶液，用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋成濃度分別為0.041μg/mL、0.124μg/mL的溶液，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以信噪比（S/N）約為3作為檢測(cè)限，以信噪比（S/N）約為10作為定量限，結(jié)果本品的檢測(cè)限為0.8ng，定量限分別為2.5ng。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱(chēng)取本品約30mg，6份，同法制成6份供試品溶液與對(duì)照溶液并檢測(cè)，結(jié)果各雜質(zhì)含量RSD 均＜5%（n=6，見(jiàn)表 2），表明精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果 單位：%

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱(chēng)取本品約30mg，置25mL量瓶中，加水適量使溶解并加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。置 25～30℃條件下，分別于 0h、2h、4h、6h、8h和12h取樣檢測(cè)，記錄色譜圖，與0h比較，結(jié)果 (8a,9R)-辛可尼峰面積RSD為1.0%（n=6），各雜質(zhì)峰面積RSD均＜5%（n=6，見(jiàn)表3），未有新雜質(zhì)產(chǎn)生。表明供試品溶液室溫條件下放置12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

表3 溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果 單位：%

2.6 耐用性試驗(yàn)

分別調(diào)整色譜條件中的柱溫、流動(dòng)相流速、比例及更換不同的色譜柱來(lái)考察其對(duì)雜質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果各雜質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果基本不變，表明本法耐用性良好（見(jiàn)表4）。

表4 反應(yīng)時(shí)間優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 單位：%

3 樣品測(cè)定

精密稱(chēng)取3批 (8a,9R)-辛可尼各約30mg，同法制成供試品溶液與對(duì)照溶液并檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 (8a,9R)-辛可尼有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果 單位：%

4 結(jié)語(yǔ)

建立了測(cè)定(8a,9R)-辛可寧有關(guān)物質(zhì)的HPLC方法。確定色譜條件為色譜柱為Agilent硅膠柱（250×4.6mm，5μm），以正己烷/%異丙醇∶乙腈∶水∶磷酸（17∶51∶332∶1∶0.2） 為流動(dòng)相，流速為 1mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm，柱溫為40℃，進(jìn)樣量20μL。結(jié)果表明本方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，(8a,9R)-辛可寧與各降解產(chǎn)物之間分離度良好；重復(fù)性試驗(yàn)各雜質(zhì)含量RSD均＜5%（n=6），精密度良好。該方法操作簡(jiǎn)便，靈敏、快捷，可用于(8a,9R)-辛可寧有關(guān)物質(zhì)測(cè)定。