王傳禹，嚴紅亞

(云南省畜牧獸醫(yī)科學院，云南 昆明 650224)

鴨坦布蘇病毒(Duck Tembusu virus，DTMUV)屬于黃病毒科( Flaviviridae )黃病毒屬( Flavivirus)恩塔亞病毒群。黃病毒屬的病毒主要是蟲媒病毒，其中常見的有日本腦炎病毒(JEV)、登革熱病毒、西尼羅病毒、黃熱病病毒和圣路易腦炎病毒等人畜共患傳染病病毒[1]。坦布蘇病毒基因組為單股正鏈 RNA，基因組全長約為11kb[2]。鴨坦布蘇病毒病是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種病毒性傳染病，主要引起種(蛋)鴨采食量及產(chǎn)蛋量急劇下降，出現(xiàn)癱瘓和神經(jīng)癥狀，商品肉鴨感染表現(xiàn)共濟失調(diào)、癱瘓、體質(zhì)消瘦。產(chǎn)蛋期櫻桃谷母鴨感染坦布蘇病毒發(fā)病其臨床癥狀往往與禽流感、禽副粘病毒和某些腺病毒類似，均以鴨群采食量、產(chǎn)蛋率下降、低致死率為特征。在云南省關于蛋(種)鴨坦布蘇病的病例未見報道，部分養(yǎng)殖戶對該病的認識不足，診治亦不夠及時，容易造成很大的經(jīng)濟損失。2019年9月，云南省畜牧獸醫(yī)科學院養(yǎng)禽與禽病研究所接診一起產(chǎn)蛋期櫻桃谷母鴨感染坦布蘇病毒發(fā)病的病例，現(xiàn)將相關情況報道如下，為臨床診斷此病提供參考。

1 發(fā)病情況與臨床癥狀

宜良縣某鴨場，旱地圈養(yǎng)的櫻桃谷種鴨4200只，8月齡。養(yǎng)殖戶介紹，起初發(fā)現(xiàn)其中幾欄鴨拉綠色稀便，采食量下降，隨后產(chǎn)蛋率急劇下降，有的欄舍幾天時間產(chǎn)蛋率從90%下降到30%左右，產(chǎn)蛋下降后蛋殼顏色質(zhì)量和之前沒有變化，每天有1～5只病鴨死亡。鴨群在開產(chǎn)前免疫過禽流感(H5+H7)三價苗、新流(ND+H9)油乳劑疫苗、鴨瘟疫苗，未做過坦布蘇疫苗。發(fā)病后用抗病毒中藥、多種維生素等藥品進行拌料、飲水，治療效果不明顯，一周后到云南省畜牧獸醫(yī)科學院求診?，F(xiàn)場觀察鴨群精神狀態(tài)尚可，發(fā)現(xiàn)少數(shù)鴨行走不穩(wěn)，雙腳雙翅掙扎，容易翻滾，個別站立不穩(wěn)、癱瘓。剖檢發(fā)現(xiàn)卵巢充血、出血，卵泡變性、破裂，脾臟腫大，其他臟器無肉眼可見變化。

2 實驗室檢測

2.1 細菌分離培養(yǎng)

無菌操作取肝臟、變性卵泡及輸卵管內(nèi)容物病料，接種到普通瓊脂培養(yǎng)基、鮮血瓊脂及麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h，結(jié)果未見細菌生長。

2.2 主要疫病血清學抗體的檢測

隨機采血16份，分離血清，血凝抑制試驗(HI)進行ND、H5、H7、H9抗體的檢測。標準抗原：禽I型副粘病毒(NDV，LaSota株)、禽流感H5N1(Re-8株)、禽流感H7N9(Re-1株)、禽流感H9N2(F株)，均為哈爾濱維科生物公司提供。HI抗體平均效價的計算：HI抗體平均效價(log2)=∑xn/∑n (x表示HI抗體效價，n表示該效價的血清份數(shù))；抗體離散度(變異系數(shù)CV)=標準偏差/平均值×100%。鴨群抗體檢測結(jié)果見表1。

表1 鴨群ND、H5、H7、H9抗體檢測結(jié)果

2.3 主要疫病病原核酸的PCR檢測

采集樣品，按照基因組RNA提取試劑盒說明書提取樣品RNA，進行A 型流感病毒M蛋白、NP蛋白、禽I型副粘病毒(NDV)、鴨坦布蘇病毒的RT-PCR檢測。A 型禽流感病毒引物的合成參考國家農(nóng)業(yè)行業(yè)標準[3]，新城疫病毒(NDV)的特異性引物由本實驗室設計并合成保存；鴨坦布蘇病毒上游引物[4]5′-GCGGATAAAGAGGACGA-3′、下游引物5′- ATTGCACCAGCAGTCTATG-3′由昆明碩擎生物科技有限公司合成。試劑盒提取核酸、RNA反轉(zhuǎn)錄、PCR擴增、凝膠電泳檢測、拍照。結(jié)果(圖1)：A 型流感病毒M蛋白、NP蛋白核酸陰性、副粘病毒(NDV)核酸陰性、鴨坦布蘇病毒核酸陽性。

2.4 臨床樣品PCR產(chǎn)物檢測分析

樣品坦布蘇病毒 RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)膠回收純化后送昆明碩擎生物科技有限公司測序，所得序列提交 GenBank數(shù)據(jù)庫進行Blast比對分析，發(fā)現(xiàn)提交比對序列與GenBank收錄的DTMUV序列同源性為88.35%～93.16%。從病毒的進化分類結(jié)果顯示該核酸序列來源于DTMUV基因組(見圖2)。

以上實驗室檢測結(jié)果顯示檢測病料為鴨坦布蘇病毒感染。

S為組織樣品；+為陽性對照；-為陰性對照

圖2樣品核酸序列Blast比對結(jié)果

3 診斷與防治

3.1 診斷

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀等流行病學特點及實驗室檢測結(jié)果，診斷該櫻桃谷種鴨群發(fā)生的是鴨坦布蘇病毒病。

3.2 防治措施

(1)緊急接種。使用某公司生產(chǎn)的鴨坦布蘇病毒滅活疫苗對鴨群進行緊急接種，1mL/只胸部肌肉注射。

(2)抗應激及預防繼發(fā)感染。發(fā)病鴨群使用新歐多旺(多種維生素)+混感康(主要成分阿米卡星)+清溫解毒口服液(藥品用量按說明書使用)兌水適量，噴灑到飼料里投喂，1次/d，連用5d。

(3)消毒與隔離。用聚維酮碘和衛(wèi)可(過硫酸氫鉀復合物粉)輪換使用對鴨舍和周圍環(huán)境、飲水、用具等進行消毒；對出現(xiàn)神經(jīng)癥狀無法正常采食的病鴨進行隔離，分開圈養(yǎng)。

3.3 效果觀察

接種疫苗和用藥第4天開始鴨群中癱瘓情況沒有再出現(xiàn)，采食量開始增加，無死亡；第5天產(chǎn)蛋有所回升，第7天鴨群采食量恢復正常水平，產(chǎn)蛋率逐漸升高。

4 小結(jié)與討論

(1)樣品經(jīng)實驗室細菌分離培養(yǎng)，結(jié)果顯示無大腸桿菌、沙門氏菌等感染；主要疫病血清學抗體的檢測結(jié)果， ND、H5、H7、H9抗體水平?jīng)]有異常變化，A 型流感病毒、新城疫病毒RT-PCR檢測結(jié)果均呈陰性，表明樣品未感染上述病毒。鴨坦布蘇病毒RT-PCR檢測樣品擴增后在483bp 處出現(xiàn)一條與陽性對照大小一致的電泳條帶，樣品PCR產(chǎn)物檢測分析顯示該核酸序列來源于DTMUV基因組，表明采集的樣品感染了坦布蘇病毒。該鴨群結(jié)合臨床癥狀、剖檢變化、實驗室檢測結(jié)果以及針對感染鴨坦布蘇病毒的防治措施與效果觀察，可以明確該鴨場產(chǎn)蛋下降的異常情況是由鴨坦布蘇病毒感染所引起的。

(2)鴨坦布蘇病毒病自2010年4月在我國首次流行以來，給我國水禽業(yè)帶來巨大損失。該病主要集中在種鴨和蛋鴨養(yǎng)殖比較密集的福建、浙江、安徽、河北、山東、江蘇、廣東、廣西等沿海養(yǎng)鴨地區(qū)，目前大部分養(yǎng)鴨密集區(qū)都有該病發(fā)生[5]。此病例的診斷，可顯示鴨坦布蘇病毒病已傳入云南省主要水禽養(yǎng)殖區(qū)域，養(yǎng)殖戶應對該病引起重視，及時采取防控措施，避免因感染鴨坦布蘇病毒而造成經(jīng)濟損失。本報告從該病的臨床癥狀、實驗室診斷方法及防控措施等方面進行了闡述，以期為臨床獸醫(yī)工作者診斷此病提供一定的依據(jù)，為該病的防控提供參考。

(3)該病一年四季均能發(fā)生，尤其是秋冬季節(jié)發(fā)病嚴重。飼養(yǎng)管理不良、氣候突變等也能促使該病的發(fā)生[6]。在臨床實踐中，該病的蛋(種)鴨臨床表現(xiàn)與某些亞型的禽流感、新城疫等病毒感染很相似，診斷需要進行實驗室檢驗，以免誤診。坦布蘇病毒屬于蟲媒病毒，流行病學特征提示該病可經(jīng)蚊子等媒介傳播、種蛋垂直傳播，帶毒水禽在不同地區(qū)調(diào)運能引起該病大范圍快速傳播。預防首先要制定和執(zhí)行切實可行的生物安全控制措施，加強飼養(yǎng)管理，保證優(yōu)質(zhì)的營養(yǎng)飼料，減少應激因素，定期消毒，在堅持免疫的基礎上做好滅蚊、滅蠅等工作，防止野鳥與種鴨接觸，是防控該病的關鍵所在。發(fā)病后除緊急免疫外，采用對癥治療，防止繼發(fā)感染對后期產(chǎn)蛋恢復有重要意義。