李彥釗 鄧東風(fēng) 任 剛 孫 晶 郎明飛 張緒新

（大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院，遼寧 大連 116001）

旱蓮草為中醫(yī)常用的治療出血性疾病的藥物，屬于雙子植物屬菊科，止血紗是一種生物醫(yī)學(xué)材料，其作用是加速手術(shù)中的凝血，從而達(dá)到快速止血的目的，本實(shí)驗(yàn)是通過制造大鼠腦出血模型，中草藥旱蓮草超微粉與生物醫(yī)學(xué)材料旱蓮草聯(lián)合為實(shí)驗(yàn)組，另外設(shè)計(jì)三組對(duì)照組，通過觀察止血時(shí)間、再出血率等研究，反應(yīng)不同組別止血材料的止血效果，并通過光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

1 材料與方法

1.1 材料：動(dòng)物：選取Wistar大鼠48只，由大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，大鼠體質(zhì)量一般為300～350 g，采取分籠喂養(yǎng)，每籠6只大鼠，飼養(yǎng)環(huán)境良好，要求籠內(nèi)溫度為20～23 ℃。試劑：本實(shí)驗(yàn)中止血紗主要材料為純棉纖維，為不可吸收產(chǎn)品，經(jīng)羥甲基化處理后，再由環(huán)氧乙烷滅菌制成，其中羧甲基纖維素為主要止血成分。止血紗布應(yīng)無皮膚致敏反應(yīng)，無皮膚刺激反應(yīng)。旱蓮草超微粉經(jīng)掃描電鏡檢測(cè)其粒徑為5～10 μm，呈正態(tài)分布。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法：動(dòng)物模型建立：選擇雌雄不限Wistar大鼠 48只，平均體質(zhì)量為300～350 g。術(shù)前12 h禁食，不禁水。麻醉藥選取10%水合氯醛，經(jīng)腹腔麻醉后，將大鼠固定在鼠板上，局部備皮，消毒后縱行切開顱頂正中皮膚，開顱部位在距矢狀縫，冠狀縫各5 mm處，用口腔科磨鉆磨出直徑約為5 mm的骨窗，保持硬腦膜完整。后采用外科3-0縫合針縱行劃開硬膜暴露，硬腦膜出血采用生理鹽水棉片壓迫止血。應(yīng)用顯微硬膜鉤鑷夾取大小約2 mm×2 mm×1 mm大小皮層范圍，造成大鼠外傷出血模型，手術(shù)結(jié)束后，缺損顱骨以骨蠟輕柔封口，全層縫合皮膚。分組：本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為4組，每組平均12只Wistar大鼠，其中實(shí)驗(yàn)組為D組，材料為中草藥旱蓮草超微粉與生物醫(yī)學(xué)材料止血紗布聯(lián)合；對(duì)照組有三組，分別為A組自凝組；B組實(shí)驗(yàn)材料為止血紗布，術(shù)中出血采用壓迫止血；C組實(shí)驗(yàn)材料為單純旱蓮草超微粉。

1.3 觀察指標(biāo)：造成大鼠出血后采取不同止血方式完全止血后縫合切口。術(shù)后大鼠正常進(jìn)食，分別于術(shù)后5、10、15 d處死大鼠。止血效果的觀察指標(biāo)為各組的完全止血時(shí)間、各組術(shù)后再出血率，具體方法為用秒表記錄各組大鼠完全止血時(shí)間，計(jì)算平均止血時(shí)間；記錄不同組大鼠之間術(shù)后再出血發(fā)生例數(shù)，計(jì)算出血率；最后觀察光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，并做方差齊性檢驗(yàn)。若不符合正態(tài)分布者，用非參數(shù)檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用χ2表示，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠平均止血時(shí)間比較：見表1。與對(duì)照組比較，aP＜0.01；與止血紗比較bP＜0.01；與旱蓮草超微粉比較cP＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，旱蓮草超微粉聯(lián)合止血紗止血時(shí)間明顯小于其他三組對(duì)照組。

表1 各組大鼠平均止血時(shí)間比較（）

表1 各組大鼠平均止血時(shí)間比較（）

2.2 各組大鼠再出血發(fā)生率比較：A組再出血9只，再出血率為75%；再出血率為B組再出血6只，再出血率為50%；C組再出血4只，再出血率為33%；D組再出血1只，再出血率為8%；采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，旱蓮草超微粉聯(lián)合止血紗止血再出血率低于其他三組對(duì)照組。見圖1。

圖1 光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)

A組為自凝組；B組為采用止血紗布?jí)浩戎寡M；C組為采用旱蓮草超微粉止血組；D組為采用旱蓮草超微粉聯(lián)合止血紗布止血組，光鏡下觀察旱蓮草超微粉聯(lián)合止血紗組細(xì)胞形態(tài)規(guī)整，無明顯細(xì)胞水腫。

3 討論

旱蓮草在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)藥物中扮演重要角色，在不同國(guó)家及地區(qū)作為一種傳統(tǒng)中藥材被使用，尤其在熱帶和亞熱帶地區(qū)，因其止血、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)等作用，被稱一種“轉(zhuǎn)世”藥物，是一種不可估量?jī)r(jià)值的藥物。在作神經(jīng)外科患者手術(shù)時(shí)，由于腦組織血供豐富，術(shù)中快速、徹底止血是往往關(guān)系到手術(shù)成敗。止血不僅與手術(shù)器械和手術(shù)技巧密切相關(guān)，而且與局部止血材料的使用密切相關(guān)。一種好的止血材料不僅能快速有效地止血，而且縮短手術(shù)時(shí)間，對(duì)預(yù)防術(shù)后并發(fā)癥起到積極作用。

在腦外科手術(shù)中，皮質(zhì)表面出血和腦組織創(chuàng)面出血的治療仍是神經(jīng)外科領(lǐng)域的難題之一[1-2]。術(shù)中多采用如止血紗、明膠海綿、止血粉等外用止血材料。然而，不同止血材料均各有其優(yōu)缺點(diǎn)，Peng和Shek[3]的研究表明理想的止血材料具有以下特點(diǎn)：止血快；在體內(nèi)可以吸收；操作方便；質(zhì)量小且易保存；沒有潛在病源性；不增加組織感染率；對(duì)組織愈合不影響等。國(guó)內(nèi)外一直致力于研發(fā)能對(duì)腦組織創(chuàng)面迅速止血可吸收性止血材料。但目前止血材料研究比較單一，將止血藥物與止血敷料進(jìn)行復(fù)合或者共載得到的含藥敷料的研究較少。

現(xiàn)今應(yīng)用于神經(jīng)外科局部止血?jiǎng)┑姆N類逐漸增多，但止血效果理想而生物兼容性好并無明顯不良反應(yīng)的止血?jiǎng)┤杂醒芯康膬r(jià)值。我們查閱文獻(xiàn)，中草藥旱蓮草，在臨床上是一種常用于治療出血癥的中草藥?，F(xiàn)代藥物理論研究表明，中草藥旱蓮草具有促進(jìn)血液凝固、保護(hù)肝功及調(diào)節(jié)免疫等多種藥理作用，并且可以抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗腫瘤等多種功能[4-5]。化學(xué)成分主要有甾體類、香豆草醚類、噻吩類及黃酮類等[6]，且來源廣泛、安全可靠。王建等[7]通過對(duì)小鼠胃出血止血的研究表明：旱蓮草可提高血小板數(shù)量、增加血小板聚集率、提高纖維蛋白原含量，對(duì)血小板和纖維蛋白原的影響顯著。劉世望等[8]將不同劑量的旱蓮草提取液與抗凝兔血混合后測(cè)定凝血時(shí)間，發(fā)現(xiàn)旱蓮草葉提取物最強(qiáng)促凝血活性的濃度為0.5%，最短凝血時(shí)間為16 s。黃酮類化合物在植物界分布很廣，在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷類或碳糖基的形式存在，也有以游離形式存在的。天然黃酮類化合物母核上常含有羥基、甲氧基、烴氧基、異戊烯氧基等取代基。黃酮類具有抗氧化、抗癌、抗血管增生、消炎、抗變應(yīng)性、和抗病毒的功效，最新研究表明旱蓮草最主要的天然止血活性成分為天然黃酮類物質(zhì)[9-10]。

生物醫(yī)學(xué)材料止血紗的主要止血機(jī)制是以網(wǎng)眼紗布為載體，血小板聚集在網(wǎng)眼紗布上作為基質(zhì)，遇到出血后迅速凝結(jié)成血凝塊，達(dá)到有效止血目的，其止血途徑主要是通過物理作用使血液迅速凝固，研究表明，止血紗能有效控制微小血管及小血管的出血[11-12]。

本研究設(shè)計(jì)大鼠腦出血模型，旱蓮草超微粉聯(lián)合止血紗組為實(shí)驗(yàn)組，自凝組、止血紗組及旱蓮草組為對(duì)照組。通過不同止血材料止血效果的比較得出旱蓮草超微粉聯(lián)合止血紗組平均止血時(shí)間較對(duì)照組明顯縮短，術(shù)后再出血發(fā)生率旱蓮草超微粉聯(lián)合止血紗組亦優(yōu)于對(duì)照組，光學(xué)顯微鏡下觀察旱蓮草超微粉聯(lián)合止血紗組較對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)規(guī)整，無明顯水腫。說明止血紗聯(lián)合旱蓮草超微粉效果優(yōu)于單一止血效果，在實(shí)驗(yàn)研究中，我們沒有發(fā)現(xiàn)旱蓮草與止血紗之間有排異反應(yīng)，二者與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之間亦無不良反應(yīng)發(fā)生。

本次研究通過不同止血材料的止血效果對(duì)比及光學(xué)顯微鏡下鼠腦的病理切片觀察，證實(shí)旱蓮草超微粉聯(lián)合止血紗止血效果優(yōu)于單一止血材料的應(yīng)用，且光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)規(guī)整。但對(duì)旱蓮草止血成分的進(jìn)一步提純、不同超微粉顆粒直徑對(duì)止血效果的影響、組織相容性仍需進(jìn)一步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究。