李 莉，張榮秋，馬桂林，歐陽(yáng)雪

人類免疫缺陷病毒(human immunodeficientcy virus，HIV)進(jìn)入人體后，主要侵犯CD4+輔助性T淋巴細(xì)胞并復(fù)制增殖，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞免疫功能受損乃至缺陷，引發(fā)獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，最終并發(fā)各種嚴(yán)重機(jī)會(huì)性感染和腫瘤。血漿中HIV病毒載量及外周血中CD4+T淋巴細(xì)胞(CD4+細(xì)胞)水平分別反映HIV病毒在體內(nèi)復(fù)制情況及機(jī)體細(xì)胞免疫功能，可用于HIV感染者和AIDS患者病程的判定、臨床進(jìn)展及抗病毒治療效果的評(píng)價(jià)。廈門市自1991年首次報(bào)告HIV-1感染者以來，HIV/AIDS疫情呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，截至2018年12月，廈門地區(qū)HIV/AIDS報(bào)告1 819例，累計(jì)治療1 742例。本研究旨在了解廈門市新發(fā)現(xiàn)HIV-1感染者未經(jīng)抗病毒治療狀況下體內(nèi)病毒復(fù)制情況及機(jī)體細(xì)胞免疫功能水平，為當(dāng)?shù)匕滩〉姆乐喂ぷ魈峁┗A(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象 收集2017年1月—2018年6月經(jīng)廈門市疾病預(yù)防控制中心蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)確證為HIV-1抗體陽(yáng)性、排除“艾滋病綜合防治信息系統(tǒng)”中既往報(bào)告病例、按《艾滋病病毒感染者隨訪工作指南》要求完成首次隨訪，并于抗體確證陽(yáng)性后2周內(nèi)采血進(jìn)行首次CD4+細(xì)胞檢測(cè)的HIV-1感染者共269例。

1.2方法

1.2.1樣本采集 采用EDTA-K2 抗凝管采集靜脈血5 mL×2管，一管于24 h內(nèi)檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞，一管于4 h內(nèi)分離血漿并存放于-80 ℃冰箱用于檢測(cè)病毒載量。

1.2.2病毒載量檢測(cè) 基于實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法(TaqMan熒光探針法)，使用羅氏 COBAS AmpliPrep核酸提取儀、COBAS TaqMan 48病毒載量?jī)x(試劑為TaqMan48 HIV檢測(cè)試劑)，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行測(cè)定，并根據(jù)試劑盒說明書判定結(jié)果。HIV-1病毒載量線性范圍：20～10 000 000 HIV-1 RNA拷貝/mL。

1.2.3外周血T淋巴細(xì)胞檢測(cè) 采用單平臺(tái)法檢測(cè)(FC500流式細(xì)胞儀，德國(guó)貝克曼公司)，應(yīng)用CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3-PC5 四色熒光標(biāo)記抗體和Flow-Count絕對(duì)計(jì)數(shù)熒光微球，通過流式細(xì)胞儀淋巴細(xì)胞亞群分析軟件，獲得T細(xì)胞亞群的相對(duì)數(shù)(百分比)和絕對(duì)數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1基本情況 269例新發(fā)現(xiàn)的HIV-1感染者中，男性244例(90.7%)，女性25例(9.3%)；年齡(33.4±11.0)歲(16～75歲)，主要集中在20～40歲(75.1%)；未婚140例(52.8%)，已婚有配偶82例(30.9%)，離異或喪偶33例(12.5%)；文化程度以大專及以上為主，為106例(40.0%)；傳播途徑以性傳播為主，為228例(84.8%)。

2.2病毒載量檢測(cè)情況 269份血漿樣本中，2份(0.74%)未檢測(cè)到目標(biāo)，2份(0.74%)病毒載量低于檢測(cè)下限(<20拷貝/mL)，其余樣本病毒載量為23～1.76×106拷貝/mL，對(duì)數(shù)平均值為(4.43±0.79)log/mL。93.69%(252/269)樣本的病毒載量≥103拷貝/mL，其中103～104拷貝/mL 46份(17.10%)，104～105拷貝/mL 153份(56.88%)，105～106拷貝/mL 49份(18.22%)，≥106拷貝/mL 4份(1.49%)。不同性別、年齡、婚姻狀況、文化程度、傳播途徑的新發(fā)現(xiàn)HIV-1感染者的病毒載量水平構(gòu)成情況比較，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表1)。

表1 不同特征人群血漿HIV病毒載量基線檢測(cè)結(jié)果構(gòu)成情況

Tab 1 Distribution of plasma HIV viral load in different groups

n(%)

2.3外周血CD4+T淋巴細(xì)胞和CD4+/CD8+比值檢測(cè)情況 269例中，CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)范圍為3～1 736 μL-1，平均值為(423±219)μL-1，中位數(shù)為397 μL-1。半數(shù)以上(61.7%，166/269)樣本的CD4+細(xì)胞≥350 μL-1，29例(10.8%)<200 μL-1。CD4+/CD8+比值范圍為0.01～1.95，平均值為(0.39±0.23)，中位數(shù)為0.33，大部分樣本(77.0%，207/269)CD4+/CD8+比值<0.50，僅5例(1.9%)CD4+/CD8+比值≥1.0(表2)。

表2 外周血CD4+T淋巴細(xì)胞和CD4+/CD8+檢測(cè)情況

Tab 2 Distribution of peripheral blood CD4+T-lymphocytes and CD4+/CD8+

CD4+細(xì)胞數(shù)量μL-1n(%)<20029(10.8)200～35074(27.5)350～50085(31.6)>50081(30.1)合計(jì)269(100.0)CD4+/CD8+比值n(%)<0.2584(31.2)0.25～0.50123(45.7)0.50～1.057(21.2)>1.05(1.9)合計(jì)269(100.0)

2.4血漿病毒載量與外周血T淋巴細(xì)胞數(shù)量相關(guān)性 對(duì)265例血漿病毒載量在檢測(cè)限范圍內(nèi)的樣本進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：血漿病毒載量值不同，外周血CD3+T淋巴細(xì)胞(CD3+細(xì)胞)總數(shù)、CD8+T淋巴細(xì)胞(CD8+細(xì)胞)計(jì)數(shù)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；病毒載量值越高，則CD4+細(xì)胞數(shù)量越少、CD4+/CD8+比值越低，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表3)。Spearman檢驗(yàn)結(jié)果顯示，血漿病毒載量對(duì)數(shù)值與CD3+細(xì)胞總數(shù)、CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)無顯著相關(guān)性，與CD4+細(xì)胞數(shù)量(r=-0.276，P<0.01)和CD4+/CD8+比值(r=-0.355，P<0.01)呈負(fù)相關(guān)。

3 討 論

本研究對(duì)HIV-1感染者在抗體確證陽(yáng)性后2周內(nèi)采集血樣進(jìn)行血漿HIV病毒載量及外周血T淋巴細(xì)胞檢測(cè)，能較好地反映HIV-1感染者在接受高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療前體內(nèi)病毒復(fù)制和機(jī)體細(xì)胞免疫水平的初始狀況。98.51%(265/269)的研究對(duì)象血漿中可檢測(cè)到病毒核酸，病毒載量平均值為4.42 log/mL，主要集中在4～5 log/mL，提示絕大多數(shù)新發(fā)現(xiàn)HIV-1感染者體內(nèi)HIV病毒有不同程度復(fù)制，且大部分感染者體內(nèi)病毒復(fù)制活躍，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[1]。Mellors等報(bào)道，基礎(chǔ)HIV-1 RNA水平可以預(yù)測(cè)感染者發(fā)展成為AIDS及死亡的風(fēng)險(xiǎn)?；A(chǔ)HIV-1 RNA 水平高于30 000 拷貝/mL的人群中，6年內(nèi)有80%發(fā)展成為AIDS，70%死于AIDS[2]。據(jù)此推測(cè)，本次調(diào)查中135例(50.2%)血漿HIV病毒載量高于30 000 拷貝/mL的感染者，倘若不及時(shí)進(jìn)行治療，很有可能在6年內(nèi)發(fā)病。張超等報(bào)道HIV/AIDS患者接受抗病毒治療后影響血漿病毒載量水平的有民族、教育程度、傳播途徑等因素[3]。本研究中，不同性別、年齡、婚姻狀況、文化程度和傳播途徑的新發(fā)現(xiàn)HIV-1感染者的病毒載量基線檢測(cè)結(jié)果構(gòu)成情況無差別，提示HIV病毒在未接受抗病毒治療的感染者群體中的復(fù)制不受上述因素的影響。

表3 不同病毒載量HIV-1感染者外周血T淋巴細(xì)胞檢測(cè)情況

與病毒載量<103拷貝/mL組比較，★：P<0.05；與病毒載量103～104拷貝/mL組比較，▲：P<0.05；與病毒載量104～105拷貝/mL組比較，◆：P<0.05；與病毒載量≥105拷貝/mL組比較，●：P<0.05.

外周血T淋巴細(xì)胞亞群測(cè)定是檢測(cè)機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)，HIV感染人體后攻擊、破壞CD4+細(xì)胞，造成CD4+細(xì)胞進(jìn)行性減少，而CD8+細(xì)胞異常激活呈現(xiàn)增長(zhǎng)趨勢(shì)，導(dǎo)致CD4+/CD8+比值倒置。越來越多的研究證據(jù)表明，CD4+/CD8+比值可作為評(píng)估病毒學(xué)成功抑制的HIV感染者臨床預(yù)后以及非AIDS相關(guān)并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的指標(biāo)[4]。本研究結(jié)果提示，血漿病毒載量與外周血CD3+T淋巴細(xì)胞總數(shù)、CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的相關(guān)性；血漿病毒載量對(duì)數(shù)值與外周血中CD4+細(xì)胞數(shù)量呈總體負(fù)相關(guān)，與國(guó)內(nèi)相關(guān)報(bào)道一致[5]；血漿病毒載量越高，CD4+/CD8+比值越低，與季亞勇等的報(bào)道不同[6]。本研究的調(diào)查對(duì)象CD4+細(xì)胞平均值為423 μL-1，CD4+細(xì)胞<200 μL-1者占10.8%，同比分別高于、低于歐陽(yáng)雪等的報(bào)道[7]。結(jié)果不同，從側(cè)面反映了近3年來廈門市在艾滋病擴(kuò)大檢測(cè)覆蓋面、增加高危人群檢測(cè)頻率等方面工作略見成效，更多HIV感染者在感染早期就得以確診。

病毒載量檢測(cè)費(fèi)用高，且對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件和檢測(cè)人員素質(zhì)要求較高。我國(guó)目前對(duì)HIV/AIDS患者抗病毒治療前開展血漿病毒載量基線評(píng)估未作強(qiáng)制要求，只是建議有條件者進(jìn)行檢測(cè)[8]。有報(bào)道認(rèn)為，根據(jù)病毒載量與CD4+細(xì)胞數(shù)量的負(fù)相關(guān)性，檢測(cè)CD4+細(xì)胞在一定程度上可以間接評(píng)價(jià)病毒載量水平[9]。筆者則認(rèn)為，二者雖然存在負(fù)相關(guān)性，但結(jié)果并非完全匹配，CD4+細(xì)胞數(shù)量反映機(jī)體免疫功能，病毒載量反映病毒復(fù)制活躍程度，故CD4+細(xì)胞檢測(cè)不能替代病毒載量檢測(cè)。本研究中，26例感染者CD4+細(xì)胞≥350 μL-1，而病毒載量>105拷貝/mL，這部分感染者雖然免疫功能未受到明顯破壞，但體內(nèi)病毒復(fù)制活躍、傳染性高，如果僅以首次CD4+細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果評(píng)估抗病毒治療的必要性，可能會(huì)忽略這部分感染者。有研究表明，在用于指示一線抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的起始、評(píng)估效果時(shí)，聯(lián)合應(yīng)用病毒載量檢測(cè)比單獨(dú)使用CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)效果更好[10]，應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)氐纳鐣?huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平選擇合適的檢測(cè)技術(shù)。廈門作為經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平較好的地區(qū)，應(yīng)考慮為HIV感染者提供抗病毒治療前病毒載量基線檢測(cè)服務(wù)，以便于觀測(cè)其抗病毒治療后病毒抑制的效果，更好地指導(dǎo)其抗病毒治療。

綜上所述，廈門市大部分新發(fā)現(xiàn)HIV-1感染者體內(nèi)HIV病毒復(fù)制活躍。作為社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平較好的地區(qū)，應(yīng)考慮聯(lián)合應(yīng)用病毒載量和外周血T淋巴細(xì)胞基線檢測(cè)結(jié)果指導(dǎo)抗病毒治療和觀測(cè)抗病毒治療效果。