劉振濤

摘 要：食用油中的黃曲霉毒素（AFT）是由寄生曲霉菌和黃曲霉菌代謝產(chǎn)生的一組具有強毒性的真菌毒素及其衍生代謝物，其中以B1、B2、G1、G2、M1與M2最為常見。而要控制食品中的黃曲霉毒素含量，就要有科學(xué)的檢驗標(biāo)準(zhǔn)和正確的方法對其進(jìn)行檢測和分析，確保含有黃曲霉毒素的食用油不流入市場，保證食品質(zhì)量安全和人們?nèi)罕姷纳踩?/p>

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法測定;島津液相色譜儀;食用油

黃曲霉毒素中含有很多劇毒物質(zhì)，這些劇毒物質(zhì)的過量攝入會導(dǎo)致人類在短時間內(nèi)中毒，甚至?xí)騺聿患搬t(yī)治而死亡。1993年，黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織（WHO）癌癥研究機構(gòu)劃定為一類天然存在的致癌物，屬毒性極強的劇毒物質(zhì)，如果長期過量攝入，會讓人類患肝癌的概率大大提高。而黃曲霉毒素的化學(xué)結(jié)構(gòu)又比較穩(wěn)定，一般不易改變，同時又具有一定的耐熱性，只有把食品加熱到230 ℃以上時才能破壞其中的黃曲霉毒素，所以一般的食物處理很難把它們清除。如果不慎服用了黃曲霉毒素，人體的免疫系統(tǒng)受到破壞，會對身體造成不可挽回的損害，危害人類生命安全，我國為了保護(hù)人民的健康安全，對可能含有黃曲霉毒素的食品進(jìn)行了嚴(yán)格的含量限定及檢測方法。

黃曲霉毒素的檢測方法主要包括：同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜-柱前衍生法、高效液相色譜-柱后衍生法、為酶聯(lián)免疫吸附篩查法、為薄層色譜法與放射免疫法等。在過去的黃曲霉毒素分析方法中，薄層色譜法是使用最廣泛的分析方法，也是使用最早的技術(shù)，但是由于要求較多，操作步驟繁瑣，加上提取和凈化的效果不夠理想，在萃取液中依然存有許多雜質(zhì)，所以現(xiàn)在很少使用這種方法。同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法因為設(shè)備價格較高，還不能在基層檢驗檢測機構(gòu)普遍采用，而酶聯(lián)免疫吸附篩查法因準(zhǔn)確度不高而僅限于常規(guī)的定性快速篩查檢測，高效液相色譜法雖然沒有同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法準(zhǔn)確度高，但因操作便捷、分辨率高、分析時間較短、可同時檢測多個AF種類以及適于大批量樣品的分析等優(yōu)點，是目前基層檢驗檢測機構(gòu)采用較多的一種檢驗檢測方法[1]。本文將圍繞高效液相色譜法檢測食用油中黃霉曲毒素的相關(guān)問題進(jìn)行討論分析。

1 檢測黃曲霉毒素的必要性

影響食物油品質(zhì)的重要因素之一就是黃霉曲毒素是否超標(biāo)。國家對食用油中黃霉曲毒素含量的要求也十分嚴(yán)格，盡管如此，在食用油中抽檢中，依然發(fā)現(xiàn)很多樣品中黃霉曲毒素的含量處于偏高和超標(biāo)狀態(tài)，所以需進(jìn)一步加強對食用油中黃霉曲毒素含量的檢測，然后針對食用油生產(chǎn)和流通過程采取有效的管、控、防措施，有效降低食用油中黃霉曲毒素的含量，提高食用油的質(zhì)量，保障人民群眾的食品安全。

2 高效液相色譜法特點

蒙山縣食品安全檢驗檢測中心主要采用高效液相色譜-柱后衍生法來檢驗食用油中的黃曲霉毒素含量。以下將對高效液相色譜法的特色進(jìn)行簡單的描述。

（1）高壓：儀器中配置了高壓泵，在裝載液中加入高壓，這樣可以讓流動相快速通過色譜柱，提高了分析速度。

（2）高效：分離的效率較高，還可以選擇固定相和流動相，以達(dá)到最佳分離效果，比其他方法的效能高很多倍。

（3）高靈敏度：檢測器檢測限度可以達(dá)到納克級別。

（4）應(yīng)用范圍廣：70%以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性與熱穩(wěn)定性差化合物的分離，具有明顯優(yōu)勢。

（5）柱子耐用：柱子可多次使用，并且用一根色譜柱可分離多種不同的化合物。

（6）樣品量少、容易回收：樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分。

高效液相色譜是近年使用率很高的黃曲霉毒素檢驗檢測儀器，它應(yīng)用廣泛，覆蓋了大部分食品的定量和定性分析。它的組成類似于氣相色譜但又有所區(qū)別，高效液相色譜的流動相是液體，而液體的流動相粘度比氣體的粘度要高得多，所以為了降低柱壓，高效液相色譜的色譜柱一般比氣相色譜的色譜柱厚，也短了很多。而其中加入的高壓泵能保證儀器有恒定穩(wěn)固的輸液量。在高效液相色譜柱工作的時候，待檢測的液體物質(zhì)進(jìn)入進(jìn)樣器中，并在壓力的推動下通過色譜柱。因為物質(zhì)種類不同，與固定相之間的吸附作用不同，這些不同的物質(zhì)會按不同的保留時間逐一離開色譜柱，然后通過檢測器，檢測器獲得不同的峰值信號，并形成電信號，最后通過對電信號強弱的判斷和分析，從而得到食用油中黃曲霉毒素的含量[2]。

3 島津液相色譜儀及其使用方法

島津液相色譜儀LC-2030C3D是目前檢測食用油中黃曲霉素毒的主要儀器。

3.1 儀器組成

由DGU-20As脫氣機、LC-2030 Pump低壓梯度泵、LC-2030Autosampler自動進(jìn)樣器、LC-2030Oven柱溫箱、LC-2030PDA Detector檢測器、RF--20A熒光檢測器、LC-2030 Controller系統(tǒng)控制器與Labsolutions工作站等組成。

3.2 操作步驟

啟動前，根據(jù)樣品的方法的特性制備流動相、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品前處理。流動相通過超聲過濾和脫氣15 min，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品通過0.22 μm的濾膜。

打開主機、檢測器和計算機電源開關(guān)，待高壓泵、柱溫箱、自動取樣器、檢測器和系統(tǒng)控制器自檢完成后，雙擊Labsolutions圖標(biāo)，啟動工作站軟件。

選擇新建方法文件，并在編輯方法（儀器參數(shù)）依次選定數(shù)據(jù)采集時間、沖洗脫氣時間、泵濃度和流速、檢測器類型及波長、色譜柱溫度與進(jìn)樣量等各種參數(shù)并下載保存參數(shù)到儀器[3]。

方法參數(shù)保存后，開始執(zhí)行自動排氣，共10 min，在排氣完成后，開始執(zhí)行色譜柱平衡化，觀察基線是否達(dá)到實驗要求。

根據(jù)樣品數(shù)量選擇“單次處理分析”還是“批處理分析，，并設(shè)定樣品編號、樣品瓶架、樣品名，最后設(shè)定文件名稱并保存，完成后即可開始儀器分析。

3.3 數(shù)據(jù)處理

以上操作完成后，得到樣品分析的原始數(shù)據(jù)，然后對樣品進(jìn)行數(shù)據(jù)處理（再分析），主要的處理方法有兩種，一種是單針進(jìn)樣分析，另一種是批量分析。具體使用的處理方法需要與實際情況相結(jié)合，以得出更準(zhǔn)確、更科學(xué)的結(jié)果。

3.4 形成報告

數(shù)據(jù)處理完畢，經(jīng)復(fù)核無誤后，保存到電腦，并形成實驗報告。

4 結(jié)語

高效液相色譜-柱后衍生法可以同時分離多種黃曲霉毒素，操作相對簡單便捷，進(jìn)樣架較多，適合同時開展大批量樣品的分析，但這個方法的樣品預(yù)處理程序相對復(fù)雜，所用到的試劑較多，也需要一定的檢測時間，數(shù)據(jù)處理也需要較強的專業(yè)技術(shù)，對技術(shù)人員的專業(yè)水平要求很高。據(jù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，目前縣一級的食品檢驗檢測機構(gòu)基本是近年來新成立的基層檢測機構(gòu)，存在技術(shù)人員偏少、技術(shù)比較薄弱、業(yè)務(wù)范圍較窄與財政預(yù)算投入較少的狀況，大規(guī)模普遍開展高效液相色譜法檢測還有一定困難。只有積極引進(jìn)培養(yǎng)優(yōu)秀技術(shù)人員，提高專業(yè)檢測水平，拓展業(yè)務(wù)范圍，增加財政投入，加大業(yè)務(wù)培訓(xùn)和實驗操作，才能進(jìn)一步提高基層檢驗機構(gòu)使用高效液相色譜法的頻率和檢驗準(zhǔn)確率，為保障食用油的品質(zhì)和安全作貢獻(xiàn)。

參考文獻(xiàn)

[1]劉嵐.糧油食品中黃曲霉毒素檢測方法[J].農(nóng)產(chǎn)品加工·綜合刊，2010（4）：66-67.

[2]王峰瑩.高效液相色譜法測定花生中的黃曲霉毒素[J].現(xiàn)代儀器，2002（3）：22-23，16.

[3]宮春波，姜連芳，張永翠，等.黃曲霉毒素在食品中的危害及去除方法[J].食品研究與開發(fā)，2004，25（1）：120-123.